上海金畔生物科技有限公司DNase I(Deoxyribonuelease I)的用途及活性介绍

产品介绍：

    DNase I(Deoxyribonuelease I)，中文名为脱氧核糖核酸酶I，分子量约32Kda，是核酸内切酶的一种，可以将单链或双链DNA随机进行分解。其活性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价锰离子激活。在镁离子存在时，能在双链DNA上随机地产生切口；锰离子存在时，能将双链DNA同时切断。

特点：不含RNA酶，可用于各种RNA样品的处理。

来源：牛胰腺。

用途：

    1）制备不含DNA的RNA样品；

    2）用T7或SP6 RNA 聚合酶进行体外转录时，合成RNA后可使用DNase I将模板DNA降解；

    3）用于切口平移；

    4）用于足迹法分析DNA-蛋白质相互作用；

5）在二价锰离子存在下，为鸟枪法测序制作DNA文库。

活性定义：37℃10分钟内，将能够完全降解1μg pBR322质粒DNA所需的酶量定义为1个活性单位。

失活或抑制:加入EDTA至终浓度为2.5mM后，65℃加热10分钟可使DNaseI失活。酚-氯仿抽提也可以使DNaseI失活。金属离子螯合剂，达到毫摩尔/升浓度的锌离子，0.1%的SDS，DTT、巯基乙醇等还原剂，50-100mM以上盐浓度均对DNaseI有显著抑制作用。

保存温度: -20℃

TTC染色液与HE染色液的区别是什么

    TTC染色液与HE染色液的区别是什么，首先我们要先了解一下什么是TTC染色液，什么是HE染色液。

    HE染色是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法.

    TTC染色是TTC和活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反应,生成红色的甲月赞,用来表示细胞的活力.配制多为2％,染色要避光,37度条件下,它是评价脑缺血损伤常用的指标.

    TTC染色液与HE染色液的区别是什么

    1、染色原理

    TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光敏感复合物，1894年首次合成用来检测种子的生存能力，1958年开始用来染色检测哺乳动物组织的缺血梗塞。它是呼吸链中吡啶—核苷结构酶系统的质子受体，与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色，而缺血组织内脱氢酶活性下降，不能反应，故不会产生变化呈苍白。

    苏木精 — 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，简称HE染色法 ，易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性( basophilia )和嗜酸性( acidophilia )；而对碱性染料和酸性染料亲和力都比较弱的现象称为中性（neutrophilia)。

    织内的蛋白质构成蛋白质的氨基酸的种类很多，它们有不同的等电点。在普通染色法中，染色液的酸碱度为pH6左右，细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色，这些物质称为嗜碱性。而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色，这些物质称为嗜酸型。如果改变染色液的酸碱度，pH值升高时，则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性；pH值降低时，原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。所以说染色液的pH值可以影响染色的反应。

    2、配制方法

    TTC溶液的配制

    取3g TTC溶于1L蒸馏水或冷开水中，配制成0?1％的TTC溶液。药液PH应在6?5～7?5，以PH试纸试之(如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水)。

    HE染色液配制

    Harris氏苏木素（1990）

    苏木素 2.5g

    无水酒精 25ml

    硫酸铝钾（钾明矾）50g

    蒸馏水  500ml

    黄*色氧化汞  1.25g

    冰醋酸  20ml

    配制时，先将苏木素溶于酒精（平时也可将苏木素以10%的浓度溶解好，贮存备用），取一2000ml的烧杯，倾入钾明矾，加入蒸馏水，于电炉上加热，熔解钾明矾，完全熔解后，待温度至90℃左右时，加入预先溶解好的酒精苏木素，继续加热至沸腾，延续3-5min，此时溶液逐渐加深，变为紫红色，拔离电源，加入黄*色氧化汞，当充分氧化后，重新插上电源继续加热3-5min，此时溶液变深紫色，拔去电源，直接将烧杯插入预先备好的冰水里，放于暗处，第二天过滤后加入冰醋酸，即可使用三个月，但据我们的实践及多年的经验认为，只要掌握好切片的“无水化”，该染液可反复使用达一年之久（天天使用）。

有关TTC染色原理的介绍

    TTC染色是TTC和活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反应,生成红色的甲月赞，用来表示细胞的活力。配制多为2％,染色要避光，37度条件下，它是评价脑缺血损伤常用的指标。

    TTC染色原理

    TTC（2,3,5—氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光敏感复合物,1894年首次合成用来检测种子的生存能力,1958年开始用来染色检测哺乳动物组织的缺血梗塞。它是呼吸链中吡啶—核苷结构酶系统的质子受体,与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色,而缺血组织内脱氢酶活性下降,不能反应,故不会产生变化呈苍白。

    TTC可以被活细胞中的具有还原活性的酶(好像主要是琥珀酸脱氢酶)还原生成粉红色的还原产物，所以活组织部分呈现粉红色，而死亡的细胞的还原酶的活力已经消失，因此TTC不能被还原，所以死亡的组织呈现白色。

    对于种子或者植物组织来说，染色结果为活组织被染成不同程度的红色，死组织或者无生命力的组织不着色。对于缺血梗塞组织，因组织坏死脱氢酶活力丧失呈现苍白色，而正常组织呈深红色。TTC常用的染色浓度为2%（w/v），也可根据组织类型做浓度的适当调整。

    TTC染色步骤

    1、取脑：可麻醉后直接取脑或经生理盐水灌注后取脑。因为脑组织未用多聚甲醛固定，所以较软，取脑时更应仔细，保持大脑的完整性。

    2、－20度冰箱中速冻20分钟左右，便于切片。

    3、切片：一般切成5－6片，每隔2mm切一片。第一刀在脑前极与视交叉连线中点处；第二刀在视交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄与后叶尾极之间。如果需计算面积的话，应切得均匀或用专门的脑槽。

    4、将切片置于TTC中，常规浓度为2%，也有用1%或更低浓度的。

    5、用锡箔纸盖住后，放入37C温箱15～30min，不时翻动脑片，使均匀接触到染色液。

    6、染色后效果：为皮层下梗死。

    TTC染液是一种脂溶性光敏感复合物，用TTC染色即可用来检测种子的生存能力，也可用来检测哺乳动物组织的缺血梗塞。检测机制在于TTC本身可作为一种氧化还原指示剂，活细胞内的脱氢酶（尤其是线粒体内的琥珀酸脱氢酶）可以将TTC还原为红色甲臢化合物TPF（1,3,5-triphenylformazan）。