不同来源胎牛血清的差别

    不同来源胎牛血清的差别市场上的胎牛血清种类繁多，鱼龙混杂，很多科研工作者，特别是刚接触细胞培养的人，难以分辨血清质量的优劣。本人根据十多年来血清生产销售的经验，总结如下：

一、外观

拿到血清，最先接触的是血清外观，对于缺少细胞培养经验的人来说，外观的判断尤为重要

1、颜色

根据血红蛋白含量的不同，胎牛血清可表现出黄色或红色，我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl，实际上，血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响，这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度，良好的操作能降低血清的溶血。

国产血清的采血点很分散，大多是由屠户采血后马上离心收集，所以很少会有溶血，表现出明亮的蜡黄色，当然，国产血清也很少有标准意义上的胎牛血清。

进口胎牛血清或多或少总有点溶血，因为真正的胎牛血清凝血功能差，红细胞容易破裂。

总的来说，国产的血清呈现出蜡黄。进口的血清，质量最好的呈现出谈黄、微红色，如Gibco 16000，差点的呈现出橘红色或鲜红色。当然，热灭活血清或保存不当的血清，由于血红蛋白的破坏氧化，会呈现出暗红，甚至咖啡色。

2、沉淀

很多血清客户，会发现进口血清有沉淀，从而怀疑血清的质量问题，这是没有根据的。

血清中的沉淀是由纤维蛋白的凝聚产生，对血清质量没有任何影响，沉淀的产生原因很多，和厂家的加工生产方式密切相关。

国产的血清，大多来自北方，由于价格低廉，保存环境都不好，从采血、冷冻、运输到生产会经过多次冻融，每次冻融过程，就会析出部分纤维蛋白沉淀，这样，血清成品过滤后看起来反而更加的“干净”，很少有沉淀产生。

进口的胎牛血清，过滤分装前很少会反复冻融，生产后的成品也是清澈的，但随着时间的推移，血清中的大量纤维蛋白会析出形成沉淀。当然，进口的新生牛血清，一般牛龄都在2周左右，血清中的各种蛋白含量明显偏高，生产后血清可能会浑浊，甚至有大量沉淀。

当然，购买回来的血清都是冰冻状态，使用时需要融化，融化过程最好在温度较低的状态下慢慢进行，否则沉淀相对较多，虽然沉淀并不直接影响血清的质量，但对细胞的显微观察有一定的阻碍。

3、澄清度

进口胎牛血清由于蛋白和脂类等物质含量低，表现为稀薄、清淡，而国产血清，因为绝大多数是新生牛血清，相对而言更加粘稠，颜色略深，这对于初步接触血清的人很难判断，但把两者进行对比，可容易分辨。

二、主要技术指标

目前国内血清的质量标准是2005版的《中华人民共和国药典》，主要指标有以下几点：

1、内毒素

标准为不高于5EU/ml。内毒素是细菌破碎后细胞壁的成分，因此内毒素含量的高低可表现出采血到生产一系列过程中的无菌操作情况。目前，国产血清基本都能达到这一要求，很多进口胎牛血清内毒素含量反而更高，如Gibco 26140，只要求不高于50EU/ml，高出我国标准10倍，即使是16000，也要10EU/ml，血清质量也未见影响。可见，内毒素含量偏高不影响质量，除非含量极高，预示着已经污染。

2、总蛋白含量

胎牛血清一般范围是30-40mg/ml，数值偏高，说明采血的牛龄偏大，不是胎牛，数值偏低，表明血清可能掺水了。

3、血红蛋白

标准为不高于20mg/dl，颜色越红，数值越高，反之，数值越低。

4、pH

国产血清，大多高于7.5，进口胎牛血清，大多低于7.5，具体原因未知，可能和牛龄有关，这也能用来初步鉴别血清的来源。

5、微生物

包括细菌、霉菌、支原体、噬菌体、各类病原性病毒等。随着国内血清厂家生产条件的改善提高，细菌、霉菌等“大型”微生物几乎能100%控制，支原体经过0.1um过滤，大多也能清除。大肠杆菌噬菌体的污染还是比较严重的，主要是生产环境过程中带入，又无法过滤，很难彻底清除，但对血清质量影响不大。病原性病毒，特别是BVDV，在国产血清中几乎90%以上都存在，这类微生物是影响国产血清质量的重要因素之一，而进口胎牛血清中基本都控制的很好。

6、免疫球蛋白

国产血清的只是定性检测，结果也很不准确，进口胎牛血清大多定量检测。免疫球蛋白的数值能完全体现出采血的时的牛龄情况，国产血清，基本都是新生牛的，血清中容易产生IgM，IgG的含量也偏高，进口胎牛血清，不含IgM，IgG的含量也较低。

7、其它

不管是国产还是进口血清，都是不测抗生素的（无四环素胎牛血清除外）。国外，抗生素的使用很严格，用量也很少，每头奶牛的产品包括血清都可以溯源的，因此可以做到胎牛血清中不含抗生素或含量极低；国内，抗生素的滥用已成了普遍现象，血清中残留很高，对细胞培养极为不利，这是国产血清质量差的根本原因。

三、血源

市场上的血清血源主要分为中国、北美、南美和澳洲。

1、国产血清质量差，这是公认的，主要原因并不是生产厂家的责任，而是天然环境差和抗生素的大量使用。国内环境污染严重，同时饲养过程中抗生素极其滥用，有毒有害物质会大量残留在血清中，最终不利于细胞的生长。

2、南美血清，来源很多，如Bioind的巴拿马、Gibco的乌拉圭、巴西等，这些血清由于采血的不可控性，质量参差不齐，当然，相对于国内血清来说好的多。另外，国内销售的南美血清大多颜色鲜红，如Bioind、Gibco、Hylone等品牌，但阿根廷的血清例外，这可能和各国的采血、生产工艺有关。

3、北美血清，主要来自美国和加拿大，如Hclone的SH30396、SH30070、SH30071、Gibco的16000-044、26140-079等。这类血清，等级越高的颜色越淡，表现为淡黄中带一点微红，SH30070和SH30396对比就很明显，特级胎牛血清基本就能进行干细胞培养。北美血清还有一个显著特点就是每瓶血清都能溯源，这对一些大型的疫苗厂、药厂尤为重要。

4、澳洲血清，来源主要是新西兰和澳大利亚，这是在北美血清禁运之后进入中国市场的，一般不具有溯源功能，由于生产、运输等原因，价格相对来说比较贵。拿Gibco的10099和16000相比较，后者质量等级更高，颜色更淡，性价比更高。

简单介绍人血清的作用及保存方法

离体的血液凝固之后，经血凝块聚缩释出的液体便是血清。人血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长和抑制生长活性是达到生理平衡的。

人血清的作用：

提供基本营养物质：氨基酸、维生素、无机物、脂类物质等，是细胞生长必须的物质。提供结合蛋白：结合蛋白作用是携带重要的低分子量物质，如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等，转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起到重要作用。提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺皮质激素（氢化可松、地塞米松）、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。对培养中的细胞起到保护作用：有一些细胞，如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。这种作用是偶然发现的，现在则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。因为胰蛋白酶已经被广泛用于铁壁细胞的消化传代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保护细胞免受机械损伤，特别是在悬浮培养搅拌时，粘度起到重要作用。血清还含有一些微量元素和离子，他们在代谢解毒中起重要作用。

正常人血清等血清使用时常见问题及解决方法：

一、保存血清最好的方法?血清应保存在-5C至-2OC。然而，若存放于4C时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议将无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。

二、如何解冻血清才不会使产品质量受损?将血清从冷冻箱取出后，先置于2-8C冰箱使之溶解，然后在室温下使之全溶。但必须注意的是，溶解过程中必须规则地摇晃均匀。

三、如何避免沉淀物的产生?

（1）、解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-2O。C至4。C至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20。C至37。C)，实验显示非常容易产生沉淀物。

（2）、解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生

（3）、请勿将血清置于37。C太久。若在37。C放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。

（4）、血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。

（5）、若必须做血清的热灭活，请遵守56。C，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理?　欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。但不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞过滤膜。

人血清与人血浆的区别：

人血清：血液凝固析出的淡黄色透明液体。如将血液自血管内抽出，放入试管中，不加抗凝剂，则凝血反应被激活，血液迅速凝固，形成胶冻。凝血块收缩，其周围所析出之淡黄色透明液体即为血清，也可于凝血后经离心取得。在凝血过程中，纤维蛋白原转变成纤维蛋白块，所以血清中无纤维蛋白原，这一点是与血浆最大的区别。而在凝血反应中，血小板释放出许多物质，各凝血因子也都发生了变化。这些成分都留在血清中并继续发生变化，如凝血酶原变成凝血酶，并随血清存放时间逐渐减少以至消失。这些也都是与血浆区别之处。但大量未参加凝血反应的物质则与血浆基本相同。为避免抗凝剂的干扰，血液中许多化学成分的分析，都以血清为样品。

人血浆：相当于结缔组织的细胞间质。是血液的重要组成分，呈淡黄色液体（因含有胆红素）。血浆的化学成分中，水分占90～92％，溶质以血浆蛋白为主。血浆蛋白是多种蛋白质的总称，用盐析法可将其分为白蛋白、球蛋白和纤维蛋白原三类。血浆蛋白质的功能有：维持血浆胶体渗透压；组成血液缓冲体系，参与维持血液酸碱平衡；运输营养和代谢物质，血浆蛋白质为亲水胶体，许多难溶于水的物质与其结合变为易溶于水的物质；营养功能，血浆蛋白分解产生的氨基酸，可用于合成组织蛋白质或氧化分解供应能量；参与凝血和免疫作用。血浆的无机盐主要以离子状态存在，正负离子总量相等，保持电中性。这些离子在维持血浆晶体渗透压、酸碱平衡、以及神经-肌肉的正常兴奋性等方面起着重要作用。血浆的各种化学成分常在一定范围内不断地变动，其中以葡萄糖、蛋白质、脂肪和激素等的浓度最易受营养状况和机体活动情况的影响，而无机盐浓度的变动范围较小。血浆的理化特性相对恒定是内环境稳态的首要表现。

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LB培养基的配制及应用

 LB一般被解释为Luria-Bertani，然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法，这个名字来源于英语lysogeny broth，即溶菌肉汤。LB培养基是近年来用于培养基因工程受体菌(大肠杆菌)的常用培养基之一。

酵母提取物：酵母经破壁后将其中蛋白质、核酸、维生素等抽提，再经生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、维生素等天然活性成分的淡黄色粉末，其中氨基酸含量30%以上，总蛋白50%以上，核苷酸10%以上，广泛用作生物培养基和食品调味品制造原料。

胰化蛋白胨：一种优质蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩干燥而成的白色粉末，含有丰富的氮源、氨基酸等。

酵母提取物为微生物提供碳源、能源、磷酸盐、生长因子、维生素等;蛋白胨主要提供氮源;NaCl主要提供微生物生长环境(如渗透压)，其次是提供无机盐。

在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或垫以石棉网直接煮沸溶化。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。

由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。

LB培养基配方(每升)

　　酵母提取物 5g

　　胰化蛋白胨 10g

　　氯化钠 10g

　　NaOH调pH至7.0，121℃、20min高压灭菌。

LB固体培养基

　　LB培养基 1L

　　琼脂粉 15g

　　NaOH调pH至7.0，121℃、20min高压灭菌。

　　有时需在培养基中添加抗生素，琼脂凝固点为40℃，所以添加抗生素最好在50～55℃。

LB培养基用途

　　用于一般细菌培养，特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。

　　LB培养基使用原理：

　　蛋白胨、酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;葡萄糖提供碳源;琼脂是培养基的凝固剂。

LB培养基配制方法

　　配制每升培养基，应该在950 ml去液态lb培养基离子水中加入：胰化蛋白胨10g 酵母提取物5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解。用5mol/LNaOH调pH至7.0。用去离子水定容至1L。在15psi高压下蒸汽灭菌20min。

　　LB固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗固态LB培养基生素，并且倒好板。

LB固体培养基倒板

　　1.配制：100ml LB培养基加入1.5g琼脂粉。

　　2.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时(手可触摸)加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。

　　3.倒板：一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。

　　4.保存：用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用。 配400ml的话成分按比例减少就行了，pH还是要按规定的。

LB培养基设计不同的离子对大肠杆菌生长状况的影响

　　以下方法仅供参考：

　　1.首先养几个平板固体培养基培养的大肠杆菌，保证这些细菌来自于同一个克隆;

　　2.采用液体培养并用分光光度计测定浊度来评价大肠杆菌生长。

　　3.盐可选择氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化锌、铵盐、磷酸盐等;

　　4.浓度差别可做，可不做;

　　5.因为分光光度计的准确性有一定要求，培养时间就不能太长，最多8小时;

　　根据这些条件设计实验就容易了。大体上是，先配制好各种液体培养基;然后从1中挑一个菌落放到一个起始的基本LB液体培养基，培养到稍微有点浑时，就可以向各种培养基中加同样体积的细菌;最后就是测定OD值了。记得每个培养基做3个重复管。

RIPA裂解液的配制方法详细说明

    RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液，主要是从动物组织和动物细胞中抽取的可溶性蛋白。可分为强效RIPA裂解液和普通RIPA裂解液，其RIPA裂解液的配制方法也有所不同。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。

    RIPA裂解液的配制方法

    NP-40orTriton-1001%

    TrisHCl(pH8.0)50mmol/L

    NaCl150mmol/L

    PMSF（苯甲基磺酰氟）0.1mmol/L(100μg/ml)

    Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂)1μmol/L(0.7μg/ml)

    Leupeptin（亮抑制肽）0.5mg/ml

    Aprotinin（抑蛋白酶肽）0.3μmol/L(1μg/ml)

    （注：PMSF贮存液：100mmol/L即17.4mg/ml于异丙醇中；

    Aprotinin贮存液：10mg/ml溶于0.01mol/LHEPES(pH8.0)；

    Leupeptin贮存液：10mg/ml溶于水中；

    Pepstatin贮存液10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）

    RIPA裂解液的成分：

    RIPA裂解液(强)的主要成分为50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1%TritonX-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及2mM sodium pyrophosphate，25mM β-glycerophosphate，1mM EDTA，1mM Na3VO4，0.5 ug/ml leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。

    RIPA裂解液(中)的主要成分为50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodium deoxycholate。

    RIPA裂解液的配制方法有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。关于不同的RIPA裂解液以及我们生产的其它裂解液的主要特点和差异。

茉莉酸与茉莉酸甲酯的区别

茉莉酸甲酯作为与损伤相关的植物激素和信号分子，广泛的存在于植物体内，可用于人工培植茉莉净油中。

茉莉酸与茉莉酸甲酯的区别

茉莉酸(JA)和茉莉酸甲酯(MeJA)外源应用能够激发防御植物基因的表达,诱导植物的化学防御,产生与机械损伤和昆虫取食相似的效果.大量研究表明,用茉莉酸类化合物处理植物可系统诱导蛋白酶抑制剂(PI)和多酚氧化酶(PPO),从而影响植食动物对营养物质的吸收,还能增加过氧化物酶、壳聚糖酶和脂氧合酶等防御蛋白的活性水平,导致生物碱和酚酸类次生物质的积累,增加并改变挥发性信号化合物的释放,甚至形成防御结构,如毛状体和树脂导管.经茉莉酸处理的植物提高了植食动物的死亡率,变得更加吸引捕食性和寄生性天敌.挥发性化合物–茉莉酸甲酯可以从植物的气孔进入植物体内,在细胞质中被酯酶水解为茉莉酸,实现长距离的信号传导和植物间的交流,诱导邻近植物产生诱导防御反应.茉莉酸和茉莉酸甲酯分别具有4种立体异构,其中具有活性的是顺式结构,但顺式结构不稳定,会差向异构化为反式结构.茉莉酸的代谢物(Z)-茉莉酮(cis-Jasmone)具电生理活性,在植物诱导防御中起作用,并且在防御信号的作用上不同于茉莉酸和茉莉酸甲酯. 红茶香气成分之一。具有茉莉花浓甜香。…在包种茶中茉莉酮酸酯占香气组分层析峰面积1%，而茉莉花茶中只有痕量。