上海金畔生物科技有限公司EDTA抗原修复液的使用方法及作用

抗原修复是利用化学试剂和热的作用将封闭的抗原或肽链发生扭曲的抗原重新暴露出来或修正过来的过程。EDTA抗原修复液是一种常用的抗原修复液，可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。可以有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。

在免疫组化染色后，出现假阴性、时隐时现等现象的基本原因：

1.组织在用甲醛固定的过程中所形成的醛键可封闭抗原的决定族。甲醛与组织蛋白质类的反应是多样而复杂的，因为它能和多种不同的功能基团结合，在多数情况下在其间形成桥键8。这也是甲醛的一个作用，因为它是一种聚合固定剂，因而能在相邻的蛋白质键间形成桥键的作用。

2. 甲醛在保存进程中会形成羟甲基，也可封闭抗原决定族。据French和Edsall的研究认为，最常遇到的甲醇反应，就是加到一个含反应性氢原子的化合物中，形成一个羟甲基化合物。

3.在组织固定过程中，甲醛与蛋白质发生交联，形成醛交联蛋白，这种化合物封闭了抗原，使之无法表达出来。

抗原修复的集中方法

1. 真空负压抗原修复法：

① 切片脱蜡至水。

②0.3%H2O2甲醇真空负压处理5分钟。

③自来水洗，蒸馏水洗。

④0.01M柠檬酸盐缓冲液（PH6.0），真空负压干燥箱预先调至95℃，真空负压处理10分钟。

⑤待修复注降至室温的一，PBS洗3次，随后按选好的免免疫组化染色方法进行染色。

2.微波辐射抗原修复法：

①切片脱蜡至水。

②0.3%H2O2甲醇处理10分钟。

③自来水洗，蒸馏水洗。

④ 0.01M柠檬酸盐缓冲液（PH6.0），于微波炉内微波辐射10分钟，如检测Er和Pr则需要20辐射分钟左右。

⑤待修复液降至室温后，PBS洗3次，随后按选好的免疫组化学的染色方法进行染色。

3.高压抗原修复法：

①切片脱蜡至水。

②0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。

③自来水洗，蒸馏水洗。

④切片放入抗原修复液中，边同容器放入高压锅中加热至沸腾。盖上压力阀至喷汽后持续1－4分钟。

⑤待修复液恢复至室温后，PBS洗3次，随后按选好的免疫组织化学染色方法进行染色。

4.隔水热抗原修复法：

①切片脱蜡至水。

②0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。

③自来水洗，蒸馏水洗。

④切片放入0.01M柠檬酸盐缓冲液（PH6.0）中，边同容器一起放入水溶锅中加热，其间应不断用温度计测其温度，待抗原修复液的温度达到有效温度后（92℃↑）。即开始计时，持续40分钟。

⑤待抗原修复液恢复至室温后，PBS洗3次，随后按选定好的免疫组化染色方法进行染色。

5.电炉加热抗原修复法：

①切片脱蜡至水。

②0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。

③自来水洗，蒸馏水洗。

④ 将切片放入抗原修复液中于电炉上加热，不时用温度计测量温度，当达92℃后，即可拔离电源，当温度低于92℃时，再插上电源，如此反复持续至10分钟左右。

⑤待抗原修复液降至室温后，PBS洗3次，随后按选定的免疫组化染色方法进行染色。

EDTA抗原修复液的使用方法

1. 对于石蜡切片：a. 脱蜡：二甲苯3次，每次3-5min→ 无水乙醇2次，每次3-5min→ 95％乙醇1次，3-5min→ 90%乙醇1次，3-5min→ 75％乙醇1次，3-5min→ 蒸馏水洗2次，每次3-5min。b. 抗原修复：将切片浸泡在抗原修复液(1×)中，95-100℃加热约15 min (加热时间可以控制在10-20 min内，最佳的加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索)。抗原修复液(1×)使用前需预热到95-100℃。加热可以使用普通的水浴锅，也可以使用微波炉加热。如果使用微波炉加热，需注意避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在20-30 min内冷却至室温。用免疫染色洗涤液洗涤1-2次，每次3-5 min。随后即可进行封闭等后续的免疫染色步骤。

2. 对于冰冻切片：用免疫染色洗涤液洗涤切片5 min。将切片浸泡在抗原修复液(1×)中，95-100℃加热约15 min (加热时间可以控制在10-20 min内，最佳的加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索)。抗原修复液(1×)使用前需预热到95-100℃。加热可以使用普通的水浴锅，也可以使用微波炉加热。如果使用微波炉加热，需注意避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在20-30 min内冷却至室温。用免疫染色洗涤液洗涤1-2次，每次3-5 min。随后即可进行封闭等后续的免疫染色步骤。

3. 对于其它样品的抗原修复，可以参考石蜡切片或冰冻切片的步骤进行。

EDTA抗原修复液的注意事项：

1、抗原修复时应选择最佳温度。（温度在92℃－98℃是合适的，尤其在95℃为最好）

2、抗原修复液必须遵循自然降温规律，否则效果不好或达不到抗原修复的目的。

3、抗原修复的方法，都采用加热的方法，尤其是微波辐射加热法，该法由于产热快。液体容易挥发直至干涸。因此，应用于抗原修复的液体，一定要充足，防止切片干涸。

4、用于抗原修复的切片，必须附贴牢固，否则发生掉片，则前功尽弃。

北京上海金畔生物科技有限公司科技有限公司长期备货EDTA抗原修复液（50×），其货号为C1034。抗原修复可以提高石蜡切片的免疫染色效果，亦可以不同程度的提高冰冻切片的染色效果。当冰冻切片免疫染色效果不理想时，考虑进行抗原修复。抗原修复过程可以使用上海金畔生物科技有限公司的的抗原修复盒进行操作。

琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验原理和方法步骤

实验原理 根据DNA分子量不同，采用外加电场使其分开，用EB嵌入DNA分子后在紫外下显色。
琼脂糖凝胶电泳是利用琼脂糖溶化再凝固后能形成带有一定孔隙的固体基质的特性。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。
1） 在电场的作用下及中性pH的缓冲条件下，带负电的核酸分子向正极迁移。由于糖一磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极方向移动。
2） 在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即DNA分子本身的大小和构型。具有不同的相对分子质量和不同构型的DNA片段泳动速度不一样，可进行分离。
3） 溴化乙锭在紫外光照射下能发射荧光，当DNA样品在琼脂糖凝胶中从负极向正极泳动时，溴化乙锭从正极向负极移动，这样溴化乙锭分子就会嵌入DNA分子中形成络合物，使DNA在紫外光下发射很强的荧光。在溴化乙锭足够的情况下，荧光的强度正比于DNA的含量，这样就可以检测DNA的浓度。
一、材料
     pUC19质粒，1.5ml塑料离心管，离心管架，透明胶带，防护眼镜
二、设备
    微量移液器(20μl)，高压灭菌锅，电泳仪，琼脂糖平板电泳装置，微波炉，紫外透射仪等。
三、试剂准备
1. TAE电泳缓冲液：50X储存液，pH8.5：242gTris碱，57.1ml冰醋酸，37.2 g Na2EDTA.2H2O，加水至1L；
1X工作液： 40mmol/L Tri Ac，2mmol/L EDTA
2．溴化乙锭（EB）：10mg/ml，用铝箔或黑纸包裹容器，储于室温即可。 
（注意：EB为强诱变剂，操作时带手套）
3.  DNA loading buffer（上样缓冲液）：0.25%溴酚蓝，0.25%二甲苯青FF，40%（W/V）蔗糖水溶液，贮存于 4℃。(作用：增加样品密度以保证DNA沉入加样孔内；使样品带有颜色便于简化上样过程；其中的染料在电场中以可以预测的泳动速率向阳极迁移。 在0.5 ×TBE琼脂糖凝胶电泳中溴酚蓝的迁移率约与300bp的线状双链DNA相同，而二甲苯氰FF约与4000bp的DNA相同。)
4  DNA Maker标准分子量： λDNA/EcoR I+ Hind III  Maker
5.  1% 琼脂糖凝胶：称取1g琼脂糖于三角烧瓶中，加100ml  1×TAE，微波炉加热至完全溶化，冷却至60℃左右，缓缓倒入架有梳子的电泳胶板中，勿使有气泡，静置冷却30min以上，轻轻拔出梳子，放入电泳槽中（电泳缓冲液1×TAE），即可上样。
6. 无菌水
四 实验操作
1、 琼脂糖凝胶的制备
1）取50×TAE缓冲液20ml，加水至1000ml，配制成1×TAE稀释缓冲液，待用。
2）胶液的制备：称取1g琼脂糖,置于200ml锥形瓶中, 加入100ml 1×TAE稀释缓冲液，放入微波炉里(或电炉上)加热至琼脂糖全部熔化，取出摇匀, 此为1％琼脂糖凝胶液。加热时应盖上封口膜, 以减少水份蒸发。
胶板的制备：将有机玻璃胶槽两端分别用透明胶带(宽约1cm)紧密封住。将封好的胶槽置于水平支持物上,插上样品梳子。
向冷却至50-60℃的琼脂糖胶液中加入5μl溴化乙锭(EB)溶液使其终浓度为轻轻摇匀，0.5μg/ml(也可不把EB加入凝胶中, 而是电泳后再用0.5μg/ml的EB溶液浸泡染色)。小心地倒入胶槽内, 使胶液形成均匀的胶层。检查有无气泡。
室温下约30-45分钟后，琼脂糖溶液完全凝固，小心垂直拔出梳子和挡板，注意不要损伤梳底部的凝胶；清除碎胶，将凝胶放入电泳槽中。
加入电泳缓冲液（1×TAE）至电泳槽中，使液面高于胶面约1mm。
 
2、 琼脂糖凝胶电泳
1） 加样：取18μl检测样品与2μl  (1/10体积)的10× DNA上样缓冲液混匀, 用微量移液枪小心加入样品槽中。小心操作, 避免损坏凝胶或将样品槽底部凝胶刺穿。
2）电泳：加完样后，插上导线，打开电泳仪电源，按照需要调节电压至120V，电泳开始，观察电流情况或电泳槽中负极的铂金丝是否有气泡出现。
3）当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿约1cm时，将电压（或电流）回零，关闭电源，停止电泳。
4）取出凝胶，在紫外观测仪上观察电泳结果。在波长为302nm紫外灯下观察染色后的或已加有EB的电泳胶板。DNA存在处显示出肉眼可辨的桔红色荧光条带。紫光灯下观察时应戴上防护眼镜或有机玻璃面罩, 以免损伤眼睛。
5） 根据需要切下DNA条带，放入1.5ml Ep管中，放于4℃保存，以备下次实验用。
 
3、实验结果及讨论
质粒DNA在琼脂糖凝胶中应为一条带，
有时出现三条带，可能时DNA降解形成的。最前面的条带为超螺旋构型，中间为线型，最后为单链有缺刻的构型。
如提取过程中有机械损伤会造成DNA降解，可能在胶上出现弥散。
 
[注意] 
EB是强诱变剂并有中等毒性，配制和使用时都应戴手套，并且不要把EB洒到桌面或地面上。凡是沾污了EB的容器或物品必须经专门处理后才能清洗或丢弃。

碱性木质素的应用

用碱从植物组织中抽提出的木质素称为碱性木质素。木质素受碱的作用，发生一定程度的碱性水解，使其溶解度增加，而木质素被抽提出来，经沉淀分离，即可得到碱性木质素。

碱性木质素以烟道气(CO2)或酸处理中和碱法制浆蒸煮废液，也可得到碱性木质素沉淀。木材中的木质素分子量约在10000以上，而碱性木质素的分子量大体在1000～2000之间。

主要应用

1、型煤粘合剂：可用于型煤生产厂家，作为型煤的粘合剂。

2、地质、油田钻井泥浆助剂：用于巩固井壁及石油开采堵水剂，并可改善泥浆流变性。

3、生化试剂：可用作可湿性粉剂的扩散剂和多价金属鳌和剂。

4、选矿浮选助剂：冶金工业可用作选矿浮选助剂，抑制脉石，提高选矿收率。

5、石材加工助剂：用于石材加工过程中，可配制锯石冷却液，大幅度提高工作效率。

6、化肥缓释剂：可用于氮肥工业，用作氮肥的缓释剂，延缓氮肥在土壤中的流失。

7、水煤浆添加剂：可用作水煤浆添加剂，适用于炉前配浆，降低制浆成本。

8、混凝土减水剂。

9、陶瓷添加剂。

北京上海金畔生物科技有限公司科技有限公司备有现货产品碱性木质素，货号为L8500，常卖规格为50g。作为生化试剂类产品主要用于科研实验。碱性木质素用作可湿性粉剂的扩散剂和多价金属鳌和剂等。

纤维素酶的最适PH值以及影响纤维素酶作用的因素

纤维素酶（β-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶）是降解纤维素生成葡萄糖的一组酶的总称，主要由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成，还有很高活力的木聚糖酶，是一种复合酶。不同来源的纤维素酶有不同的最适PH值。一下来总结一下纤维素酶的最适PH值。

纤维素酶的最适PH值：

常见的纤维素酶产生菌中,如曲霉、青霉及木霉,产生的酶一般为酸性酶,酶的最适温度大多在45~65℃之间,最适pH值大多在4.5.5之间.一些嗜碱和耐碱性的细菌,如Bacillus属中的某些种,可以产生在碱性条件下保持较高活性的纤维素酶.至于海洋细菌,王玢等分离出的细菌产纤维素酶最适反应温度为35℃,最适pH值为6.0,属酸性酶.曾胤新等分离出的细菌所产纤维素酶的最适作用温度皆为35℃.淀粉酶最适作用温度60～70℃,作用pH范围5.7.0,最适pH6.0.如果两个一块使,取交集60度,ph5.5。

影响纤维素酶作用的因素：

纤维素酶的最适pH一般在4.5~6.5。葡萄糖酸内酯能有效的抑制纤维素酶，重金属离子如铜和汞离子，也能抑制纤维素酶，但是半胱氨酸能消除它们的抑制作用，甚至进一步激活纤维素酶。植物组织中含有天然的纤维素酶抑制剂；它能保护植物免遭霉菌的腐烂作用，这些抑制剂是酚类化合物。如果植物组织中存在着高的氧化酶活力，那么它能将酚类化合物氧化成醌类化合物，后者能抑制纤维素酶。

纤维素酶的主要用途：

纤维素酶在食品行业和环境行业均有广泛应用。在进行酒精发酵时，纤维素酶的添加可以增加原料的利用率，并对酒质有所提升。由于纤维素酶难以提纯，实际应用时一般还含有半纤维素酶和其他相关的酶，如淀粉酶（amylase）、蛋白酶（Protease）等。纤维素酶种类繁多，来源很广。不同来源的纤维素酶其结构和功能相差很大。由于真菌纤维素酶产量高、活性大，故在畜牧业和饲料工业中应用的纤维素酶主要是真菌纤维素酶。纤维素酶根据其催化反应功能的不同可分为内切葡聚糖酶（1,4-β-D-glucan?glucanohydrolase或?endo-1,4-β-D-glucanase，EC3.2.1.4），来自真菌的简称EG,来自细菌的简称Cen、外切葡聚糖酶（1,4-β-D-glucan?cellobilhydrolase或exo-1,4-β-D-glucannase，EC.3.2.1.91），来自真菌的简称CBH,来自细菌的简称Cex)?和β-葡聚糖苷酶（β-1,4-?glucosidase，EC.3.2.1.21）简称BG。内切葡聚糖酶随机切割纤维素多糖链内部的无定型区,产生不同长度的寡糖和新链的末端。外切葡聚糖酶作用于这些还原性和非还原性的纤维素多糖链的末端,释放葡萄糖或纤维二糖。β-葡萄糖苷酶水解纤维二糖产生两分子的葡萄糖。真菌维素酶产量高、活性大，在畜牧业和饲料工作中主要应用真菌来源的纤维素酶。

上海金畔生物科技有限公司是一家集产品研发、生产、销售、服务于一体的高科技生物企业。产品主要涵盖生化试剂、分子生物学试剂、细胞培养、免疫学产品及实验耗材等。HE染色试剂盒为上海金畔生物科技有限公司自产产品，其货号为C8270，微生物纤维素酶在转化不溶性纤维素成葡萄糖以及在果蔬汁中破坏细胞壁从而提高果汁得率等方面具有非常重要的意义。

HE染色原理和注意事项

HE染色作为一种常用的染色方法，被广泛应用于组织学、病理学和胚胎学等教学科研工作中。

HE染色原理

HE染色是苏木素-伊红染色的简称。其中苏木素能对细胞核部分进行染色，伊红则对细胞质进行着色，两者结合能清晰的显出细胞的形态和特点。细胞核中的核酸带负电荷，苏木素自身待正电荷，带正点的苏木素与带负电的核酸能结合，苏木素在碱性环境中呈现蓝色，所以细胞核能被染成蓝色，因为苏木素对不同的细胞组织的亲和力不同，使用适当方法（如延长冲水时间）可使细胞核呈现清楚的深蓝色。伊红是一种酸性染料，能水解出带负电的离子，与蛋白质中带正点的氨基相结合，从而使细胞质被着色，呈现红色，由于伊红与氨基的结合程度不同使得呈现的颜色深浅的有所区别。

HE染色注意事项：

1、染色时的pH值很重要。苏木素中矾类，太少会使核染偏红，太多会造成染色弥散。需要严格按照配方进行配置。

2、放置时间过长的苏木素染液需要过滤后才能使用，否则容易造成分色效果不好。

3、如果染色效果不好，可以加适量的冰醋酸增强细胞质着色，该操作具有一定副作用，染好的片子会随着时间延长而褪色。