β-Amyloid ELISA 试剂盒

——定量检测 Aβ40/Aβ42

　　阿尔茨海默症（Alzheimer’s Disease, AD)，俗称老年痴呆症，其特征是在大脑神经细胞中存在老年斑（Senile Plaques,SPs） 和神经元纤维缠结（Neuro Fibrillary Tangles, NFT），老年斑的主要组成蛋白是 β- 淀粉样多肽（Amyloid Peptide, Aβ）40 和 42(43)，Aβ42 比 Aβ40 更容易发生聚集。因此，蛋白样多肽的聚集开始于 Aβ42 而不是 Aβ40。出现了 Aβ42 而没有出现 Aβ40 是阿 尔茨海默症的早期特征；出现了 Aβ40，尤其是在成熟老年斑的中心部分出现则代表进入阿尔茨海默症的晚期阶段。

　　本产品可检测与阿尔茨海默病相关的淀粉样蛋白β蛋白质（1-40）以及淀粉样蛋白β蛋白质（1-42）的高灵敏度ELISA试剂盒。与以往试剂盒相比较，检测灵敏度提高约10倍，检测范围在0.1~20.0（pmol/L）。

　　另外，因为以往产品同样标志抗体Fab’化，非特异性结合降低。由于运用的是武田药品工业株式会社开发的特异性非常高的单克隆抗体，不仅是组织提取液、培养上清液、脑脊髓液，而且以前检测较困难的血浆中Aβ40以及Aβ42亦可高灵敏度检测。

◆优点

●  可检测多种样品类型：脑组织样品，培养基上清样品，脑脊髓液样品， 血浆样品等

●  特异性极强的抗体，避免非特异性结合

　　　    BAN50：Aβ肽N末端1-16特异性

　　　    BNT77：Aβ11-28特异性

 　　  　 BA27：Aβ40 C末端特异性

　　　    BC05：Aβ45 C末端特异性

●  极高的灵敏度，可检测至 pmol 级含量

●  使用此产品的文章已在Science、Biochemistry、Neuron 等多家国际顶尖刊物发表

◆试剂盒构成　　　

抗体包被的微平板                          1块 标准溶液                                        2ml×2支   标准稀释液                                     2ml×2支 清洗液（20x）                               50ml×1支 HRP标记抗体溶液                          12ml×1支 TMB溶液                                        12ml×1支 终止液                                            12ml×1支 密封件                                            3支

① 加入100ul 的标准品和样品，在4 度冰箱中密封过夜。 
↓

② 加入HRP标记的抗体溶液，在4 度冰箱中孵育。

↓

③ 加入100ulTMB 溶液室温孵育30 分钟，避光，密封盖子，进行显色反应。

↓

④ 加入100ul 终止液，测OD450nm值。

◆案例

案例1.人、小鼠血浆的测定

　　使用EDTA2K真空采血管采血，置于5000g、4℃、离心15分钟，分离血浆，使用之前存放于-80℃。

　　用试剂盒附带的标准稀释液，4倍样本稀释后测定。

　　（*Aβ（1-40）以及Aβ（x-40）的测定使用人β淀粉样蛋白（1-40）ELISA试剂盒WakoⅡ（产品编号：298-64601）以及人/大鼠β淀粉样蛋白（40）ELISA试剂盒WakoⅡ（产品编号：294-64701）。

案例2.小鼠脑组织的测定

　　用2mL的Tris盐水提取12月龄APP转基因小鼠（J20）的脑半球，使用之前置于-20℃保存。

　　用试剂盒附带的标准稀释液，2倍样本稀释后测定。

　　除了转基因（tg）小鼠，也可测定野生型（wt）小鼠的微量Aβ。

　　（数据提供：东京大学大学院药学研究科 临床药学教室 岩坪教授 桥本助手）

标准曲线

　　用试剂盒附带的标准溶液制作标准曲线。结果显示，在0.1~20.0（pmol/L）范围内，接近于直线。

添加回收实验

　　向血浆中分别加入5、10、20（pmol/L），4倍稀释后记录测定时的回收率（%）（测定值/理论值）。基本显示较高的回收率。

稀释实验

　　将A、C、E的正常人血浆稀释2~16倍后求稀释曲线。结果显示，特别是人/大鼠系列获得了良好的稀释曲线。

产品信息

升级版的内毒素检测仪是ET-7000

内毒素检测仪ET-7000产品详情请点击：

内毒素检测系统Toxinometer^® ET-7000（ET-6000的升级版）

◆原理

Toxinometer^® 能通过光学法测量构成各种微生物细胞壁成分的内毒素、(1,3)-β-D-葡聚糖及肽聚糖的高感度。另外，从反应培育到结果判定，都能够短时间内无个体差别进行测量，是最符合日本药典及生物学制药标准（平衡线定量法）中内毒素检测的仪器。尤其是ET-6000，在遵循日本公定法的基础下，软件「Toximaster^® QC7」已标准套装化，不仅可在Windows^® 计算机中直接控制，并为使用者提供了操作便利的工作环境。

用比色分析法捕捉内毒素和溶菌液试剂在凝胶反应中透过光量的变化，测出凝胶所用时间。凝胶反应的时间过程以及内毒素浓度和凝胶时间之间的检测关系可从参考下图。

◆优点・特色

◆案例・应用

①  牛奶中的内毒素测量法

　　健康奶牛的乳汁内毒素值通常为零。挤出奶汁后保存，送往乳业工厂在制作过程中进行灭菌处理后，鲜奶中的细菌被拆的零散，内毒素就会被释放出来。通常认为下水道里的内毒素水平（1~10EU/mL）远远超过一般数值。当然，这种饮品对于健全的人来说，不会马上损害到健康，内毒素作为鲜奶中细菌存在的证据，可当作指标反映出其卫生状况，该管理办法正被研讨当中。

　　乳液，市场上出售的牛奶都通过Endotoxin-Free在水中稀释100倍来进行测定。（使用Toxinometer，Limulus ES Ⅱ Single test）

   　市场出售的牛奶74样品的测定数据如下图所示：（2001年日本防菌防霉学会发布）

②  培养基的内毒素测量法

　　由于内毒素能把细胞毒性发挥出来，近年来，细胞培养用的培养基开始被要求需要更高度的管理。作为细胞培养用的代表，培养基（D-MEM培养基）的加标回收数据于下图所示：（由使用了Limulus ES Ⅱ Single test的Toxinometer测定）

　　结果显示，不管是不含FBS，还是含10%FBS在被稀释了10倍的情况下均可测量。

③  动物血液的内毒素测量法

    　动物血液里的内毒素测试如下图条件中，将样品作预处理（稀释加热处理）即可测量。（使用Toxinometer，Limulus ES Ⅱ Single test）

　　※为了验证内毒素的加标回收实验，过程中需要注意的是血浆稀释液和已加标的内毒素溶液需要完全冷却后（冷藏下）再混合。

● 什么是内毒素

● 内毒素检测——鲎试剂的选择方法

◆内毒素检测仪ET-6000与ET-7000的对比

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