pMW219 DNA

克隆载体

◆原理

　　pMW219 DNA由Cosmid lorist6、质粒pBR322、质粒pSC101、质粒pUC19的DNA片段构建而成。

　　下图展示了限制性内切酶图谱。（参考使用例图片）

◆优点、特色

u 可用于克隆在多拷贝质粒里难以克隆的基因

　 （DNA代谢相关的蛋白编码基因，如，聚合酶、连接酶等基因）

u 在同一菌株内拥有pBR系、pUC系的DNA复制开始区域的质粒里，克隆了基因A的同时也想表达其他

　 基因B时，可作为克隆基因B的克隆载体

u 可用于克隆多克隆位点Hind III、Xba I、BamH I、Sma I、Xma I、Kpn I、Sac I、EcoR I的唯一切割部位

u 在多克隆位点里克隆基因，使用宿主大肠杆菌lacZ、N末端有缺陷的菌株（如JM109）并添加

　 X-Gal和IPTG，重组体容易识别白色菌落旁边蓝色的非重组体

u 可在卡那霉素培养基上选择转化的大肠杆菌

来源：           有质粒pMW219的E. coli JM109

M.W.：         2.55 x 10⁶ Da（3,923 bp）

试剂制备：    有质粒pMW219的E. coli JM109通过溴化乙锭——氯化铯密度梯度离心分离

形状：           10 mmol/l Tris-HCl（pH 8.0）, 1 mmol/l EDTA

浓度：           0.1 ～ 0.5 μg/μl

纯度：           A260/A280 ≒ 1.8（此数值可能因批次不同有异）

碱基配列：    EMBL, GenBank, DDBJ Accession No. AB005478（pMW219）

参考：           pMW218・219 DNA的限制性内切酶图

◆案例、应用

【构建模式图】

       par：     质粒稳定化区域

       ori：      DNA复制开始区域

       rep：     DNA复制调节基因

       lacZ：    β-半乳糖苷酶基因

       Kmr：    卡那霉素抗性基因

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