考马斯亮蓝染色原理-技术文章

考马斯亮蓝染色原理

 在蛋白质染色方法中,目前以考马斯亮蓝染色最为常用。因为它既克服了氨基黑染色灵敏度不高的限制,又比银染简便易操作,并且染色时间短,一般半小时内即可检测到蛋白电泳条带。

考马斯亮蓝染料的灵敏度:  

    考马斯亮蓝染色可以达到0.2-0.5 μg(200-500 ng),最低可检出100ng蛋白;银染的灵敏度比考染高将近100倍,最低可以检出2 ng蛋白。  通过考马斯亮蓝染色条带的深浅粗细,可以大致判断该条带有多少蛋白。

考马斯亮蓝染料的原理: 

    考马斯亮蓝有G-250和R-250两种。其中R为红蓝色,G为绿蓝色。R-250即三苯基甲烷,每个分子含有两个SO3H基团,偏酸性,与氨基黑一样也是结合到蛋白质的碱性基团上。G-250即二甲花青亮蓝,是一种甲基取代的三苯基甲烷。G-250在游离状态下呈红色,最大吸收峰在465nm。当它与蛋白质结合后变成深蓝色,最大吸收峰变为595nm。蛋白质含量在1-1000μg范围内,蛋白质-染料复合物在595nm处的吸光度与蛋白质含量成正比,故可用比色法测定。 

     北京上海金畔生物科技有限公司科技有限公司是长期从事生化试剂耗材生产和销售的厂家。备有大量现货产品,其中包括自产试剂考马斯亮蓝染色液,货号为P1300,常卖规格为500ml。作为科研实验用染色液类产品,是一种即用型快速灵敏而且安全的染液,以考马斯亮蓝G-250为染料,可用于SDS-PAGE或者非变性电泳蛋白凝胶的快速染色。而考马斯亮蓝R-250与蛋白质反应虽然比较缓慢,但是可以被洗脱下去,所以可以用来对电泳条带染色。

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