日度归档：2019年4月18日

CCK-8与MTT细胞增殖及毒性检测试剂的比较-技术文章

发表于由

CCK-8与MTT细胞增殖及毒性检测试剂的比较

CCK-8与MTT细胞增殖及毒性检测试剂的比较：

1、CCK-8为一瓶溶液，毋需预制，即开即用，MTT法的步骤比较多也比较繁琐。

2、如果药物本身有颜色，那么采用MTT法可以通过离心去除颜色的干扰，多次的离心和吸取上清要求操作者要小心和仔细，否则会降低试验的准确率。

3、CCK-8法生成的甲臜是水溶性的，不需要再吸出培养液加入有机溶剂溶解这个步骤，因此可以减少一定的误差，其重复性优于MTT。其对悬浮细胞的测定有其独到之处。

4、对细胞毒性小，CCK-8对细胞生长没有影响，测完细胞活性后，去掉含CCK-8的培养基，用新鲜培养基可以继续培养，并且还可以继续做其它指标的检测，而MTT就不能。

5、CCK-8反应时间也短，适合做急性作用。

6、CCK-8线性范围更宽，灵敏度更高。

7、发文章过程中，MTT因其重复性差，一般得不到认可。

应用：

被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞增殖试验、细胞毒性试验以及药敏试验等。

nunc

DA-67

发表于由

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 产品价格
046-22341 DA-67
10-（羧甲基氨基羰基）-3,7-双（二甲氨基）吩噻嗪钠盐		 50 mg for Biochemistry –
  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

DA-67DA-67

◆储存条件


2-10℃（冷藏运输）

 


◆分子式


C19H21N4NaO3S



◆分子量


408.45



◆外观


白色~蓝色或绿色，结晶性粉末~粉末或块状（引用文献：和光純薬製品規格）

 


◆溶解性


可溶于水（10 mg/25 mL）

以1 mmol/L以上的浓度直接溶于水

 


◆产品概要


检测波长

λ max（显色波长）= 666 nm，ε/H2O2（一个H2O2分子的吸光系数）=9×104


分类

酶•基质•抑制剂>>酶基质>>其他底物


原理

过氧化氢是生物体中痕量组分分析、食品质量监控、环境物质等检测中的重要中间代谢物。DA-64、DA-67是在有过氧化物酶的存在下高灵敏度地检测出过氧化氢的水溶性氧化显色试剂。传统的水溶性过氧化氢显色试剂由于显色色素的分子吸光系数较低以及虽具有高灵敏度，但是因其微溶性难以处理。DA-64，DA-67首次兼容了水溶性和高灵敏度。以往，为了追求高灵敏度，不得不使用发光、荧光试剂。现在，特殊的专用检测机检测出的检测对象组也通过采用DA-64，DA-67，用简便的比色计就可以获取结果。本产品的优点是比起DA-64更难受共存物质的影响，特别适用于生物体成分样本的检测。

 


◆特点


兼容高灵敏度和水溶性（引用文献：和光纯药情报）



◆使用示例


定量H2O2

1.    制备显色溶液  

把4.08 mg DA67和1 mL100 units/mL的过氧化物酶 (Peroxidase，下文简称POD)放到PIPES缓冲液（0.1mol/L, pH=7, Triton X-100 0.5%）中溶解，定容至100 mL（DA67 100 μmol/L溶液）

2.    将上述制备的溶液3 mL与10 μL样本溶液（H2O2:0~5 mmol/L）混合，并在37°C下孵育5分钟。

3.    用分光光度计检测666 nm处的吸光度，以空白（用蒸馏水替换样本溶液混合成的溶液）的吸光度差作为检测值，用单独制备的校准曲线确定样本中的含量。


检测POD活性

1.    制备显色溶液

把4.08 mg DA67和1 mL H2O2（2%）放到Mcllvaine缓冲液（柠檬酸0.05 mol/L、磷酸二钠0.1 mol/L， pH=5.7）中溶解，调至100 mL（DA67 100 mmol/L溶液）

2.    将上述制备的溶液2 mL与2 mL样本溶液（1 fmol~1 pmol/tube POD）在37°C下孵育。

3.    用分光光度计检测666 nm处的吸光度，以减去空白（用蒸馏水替换样本溶液混合成的溶液）的吸光度差作为检测值，用单独制备的校准曲线确定样本中的含量。

 


◆用途


过氧化氢比色定量（引用文献：和光纯药情报）

◆产品列表


产品编号

产品名称

等级

包装

046-22341

DA-67
10-（羧甲基氨基羰基）-3,7-双（二甲氨基）吩噻嗪钠盐

生化学用

50 mg

[1]　橋爪利至:日本化学会、第60回秋季年会講演予稿集2P576 (1990)

[2]　佐方由嗣,橋爪利至,岩田勉,向井豊治:公開特許公報、昭63-24356

jQuery(“.nltabbox”).slide({effect:”fade”});

DA-64

发表于由

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 产品价格
043-22351 DA-64
N-（羧甲基氨基羰基）-4,4′-双（二甲氨基）二苯胺钠		 100 mg for Biochemistry –
  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

DA-64DA-64

◆储存条件


2-10℃（冷藏运输）

 


◆分子式


C19H23N4NaO3



◆分子量


378.39

 


◆外观


白色~绿褐色或灰绿色，结晶性粉末~粉末（引用文献：和光纯药产品规格）

 


◆溶解性


可溶于水（10 mg/25 mL）

以1 mM以上的浓度溶于水

 


◆产品概要


检测波长

λmax（显色波长）= 727 nm，ε/H2O2（一个H2O2分子的消光系数）=9×104


分类

酶·底物·抑制剂>>酶底物>>其他底物


原理

过氧化氢是生物体中痕量组分分析、食品质量监控、环境物质检测等过程的重要中间代谢物。DA-64、DA-67是在有过氧化物酶的存在下高灵敏度地检测出过氧化氢的水溶性氧化显色试剂。传统的水溶性过氧化氢显色试剂由于显色色素的分子吸光系数较低以及虽具有高灵敏度，但是因其微溶性难以处理。DA-64，DA-67首次兼容了水溶性和高灵敏度。以往，为了追求高灵敏度，不得不使用发光、荧光试剂。现在，特殊的专用检测机的检测对象也可通过采用DA-64，DA-67，用简便的比色计就可以获取结果。

 


◆特点


兼容高灵敏度和水溶性（引用文献：和光纯药情报）



◆使用例


定量H2O2

1.　制备显色溶液  

把3.78 mg DA64和1 mL 100 units/mL的过氧化物酶 (Peroxidase，下文简称POD)放到PIPES缓冲液（0.1mol/L, pH=7, Triton X-100 0.5%）中溶解，定容至100 mL（得到DA64 100 μmol/L溶液）

2.　将上述制备的溶液3 mL与10 μL样本溶液（H2O2:0~5 mmol/L）混合，并在37°C下孵育5分钟。

3.　用分光光度计检测727 nm处的吸光度，以空白（用蒸馏水替换样本溶液混合成的溶液）的吸光度差作为检测值，用单独制备的校准曲线确定样本中的含量。


检测POD活性

1.　制备显色溶液

把40 mg DA64和1 mL H2O2（2%）放到Mcllvaine缓冲液（柠檬酸0.05 mol/L、磷酸二钠0.1 mol/L， pH=5.7）中溶解，定容至100 mL（得到DA64 100 mmol/L溶液）

2.　将上述制备的溶液2 mL与2 mL样本溶液（1 fmol~1 pmol/tube POD）在37°C下孵育。

3.　用分光光度计检测727 nm处的吸光度，以减去空白的吸光度差作为检测值，用单独制备的校准曲线确定样本中的含量。


 

◆用途


过氧化氢比色定量（引用文献：和光纯药情报）



◆产品列表


产品编号

产品名称

等级

包装

043-22351

DA-64
N-（羧甲基氨基羰基）-4,4'-双（二甲氨基）二苯胺钠

生化学用

100 mg

[1]　橋爪利至:日本化学会、第60回秋季年会講演予稿集2P576 (1990)
[2]　佐方由嗣,橋爪利至,岩田勉,向井豊治:公開特許公報、昭63-24356

jQuery(“.nltabbox”).slide({effect:”fade”});