胎牛血清使用中的常见问题

1、 如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损?

将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。

长时间储存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。

我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。

2、血清中包含絮状沉淀，它们是什么，怎么处理?

沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产品性质。要除去沉淀，离心血清(400g，1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以，使用产品时要摇动并加热血清至37℃，沉淀会自然消失。

3、实验室如何选择适合的血清?

国内一致认为HYCLONE的血清是最好的，但是根据我在北美的经历，国外一般认为GIBCO比HYCLONE好，所以并不是价格决定质量，但是总的来说这两种价格普遍偏贵，一般不是太娇气的细胞，国产的就够用了。此外，由于国内HYCLONE，GIBCO并没有生产线，我们只能从代理商那里买，而代理商又鱼龙混杂，所以买到假货的可能性也很大。所以，我一般会从直销员那里买血清，有的国外生物公司由于刚刚进入中国，知名度不高，但是其实在国外已经做得很不错了，如Wisent等，他们在国内有办事处，我会从那里拿，血清的品质和HYCLONE不相上下，但价格相对优惠很多。

4、 如何避免血清中产生沉淀?

按如下操作可避免沉淀的产生：

(1)解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。

(2) 血清分装冻存时，须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一。

(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。

(4) 勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。

(5) 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。

(6) 若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。

5、 培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗?

一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

6、 为什么要热灭活血清?

加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学 研究，培养ES细胞、平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。

7、 有必要做热灭活吗?

实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物 的分裂扩增。

若非必须，可以不需要做热处理这一步。不但节省时间，更确保血清的质量!

8、细胞培养 中出现黑点是污染吗?如何处理?

一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。

如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：

(1)细胞生长过老，破碎的细胞残骸;

(2)血清质量不好，反复冻融的结果;

(3)配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长;

(4)配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点;

(5)培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。

9、 细胞培养中如何防止黑点生成?

(1) 尽可能地减少血清冻融次数。

(2) 培养基无需37℃水浴。

(3) 培养基保持最佳PH值7.0- 7.2。

(4) 严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。

(5) 掌握细胞传代的最佳时机，细胞切勿生长过老。

10、小牛血清和胎牛血清有何区别与注意事项?

来源不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。

组份与比例不同：两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同，用途与用法不同：某些细胞必需胎牛血清才能生长，而有些细胞只需小牛血清即可，使用浓度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的浓度在20%。

血清保存和使用须注意：血清应保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超过一个月。解冻血清时 ，应先将血清至于2-8℃冰箱，并经常摇匀使之溶解，然后至室温放置使之升温，绝对不可将冷冻的血清直接放入37℃水浴或者温箱中，如放在37℃解冻，颜色加深，粘稠度也会增加，血清在解冻和热灭活后，应按用量分装并于-20℃保存，避免反复冻融。

实验室常用几款胎牛血清（gibco hyclone）的比较

一、特级类胎牛血清（最高级别的，专用于干细胞的胎牛血清）
    1、Hyclone 北美特级胎牛血清

    目前，性能最好的血清，实验室反馈不错的，那就是Hyclone的特级胎牛血清， Hyclone的“头牌”。

    这款血清–Hyclone特级胎牛血清(Defined FBS)，货号：SH30070，是世界上唯一经过40纳米过滤的顶级胎牛血清，极佳的促细胞生长作用及产品稳定性。内毒素含量小于10EU/ml，血红蛋白含量小于10mg/dl。此血清可以广泛用于各种细胞培养，包含任何干细胞系的培养。

    2、Gibco北美特级胎牛血清
    
    invitrogen公司在美国原装生产的特级胎牛血清，货号：16000-044，是100nm过滤3次，内毒素和血红蛋白含量都可以与Hyclone的SH30070.03相媲美。也可以用于培养大部分的干细胞系。

二、优等类胎牛血清

    1、Hyclone加拿大优等胎牛血清

    性价比最高的是Hyclone加拿大优等胎牛血清(Characterizend FBS)，货号：SH30396，血清采自加拿大，由Hyclone公司总部的员工采集加工，采集方法，加工过程，检定标准与美国原产优等胎牛血清完全一致，市场价格低于美国原产的。经过3次100nm过滤，内毒素含量小于25EU/ml，血红蛋白含量小于25mg/dl。此血清，在2005年以前，是很多实验室选择血清的首选，价格适中，质量过硬，应用细胞非常广泛。

    2、Hyclone澳大利亚优等胎牛血清

    基本与加拿大的优等血清是一样的，级别也非常相似，各种级别都有。

    3、Gibco澳大利亚胎牛血清（10099-141）与Hyclone澳大利亚胎牛血清差不多，市场价也是3200元/500ml左右。这一级别的血清，也能用于干细胞培养，可是，不象特级胎牛血清那么优秀。

三、普通进口胎牛血清 Hyclone南美胎牛血清（SV30087）
    
   目前市场上用的最多的Hyclone血清是南美胎牛血清(FBS) SV30087 ，此血清采自南美，在国内(兰州)过滤并测试检验，经三次100纳米过滤，根据中国商标法的规定标贴中文标签，内毒素含量小于等于10EU/ml,血红蛋白含量小于等于20mg/d。此血清广泛用于各种肿瘤细胞的培养，还没有资料记载能够用于干细胞，也听说有少数人用于干细胞培养的，不过，因为本身血红素比较高，所以，最好不要用于干细胞，

四、国产的各种系列胎牛血清

    国产的胎牛血清，国内没有严格意义的胎牛血清，胎牛血清本身是需要穿刺取血的，而国内都是剖腹产出胎牛，8小时左右取血，然后，进行过滤分装。所以，国产的胎牛血清不是严格意义的胎牛血清。不过也很多实验室使用，具体情况那就看实验的要求了。

五、其他血清

    新生牛血清，小牛血清，一般国产的，效果也还是不错的，不过，最好不要用于细胞培养，这些血清，大多是用于封闭液、保护液、缓冲液等等用途的。

V-P半固体琼脂-培养基配方

V-P半固体琼脂是上海金畔生物科技有限公司公司改良的培养基，产品符合中国药典，提供V-P半固体琼脂用途，原理，用法，配方，以及质量控制等信息。
原理：
用途：生化培养基，用于细菌V-P试验（SN标准）
用法：称取本品3.1g,加热搅拌溶解于100ml蒸馏水中,分装小试管,121℃高压灭菌15分钟,备用。
质量控制：

 在36±1℃培养18-24小时。

配方：

溶菌酶的用途及优点都有哪些

溶菌酶是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶，又叫胞壁质酶。溶菌酶是采用生物工程技术进行克隆、提取而制取,以蛋清为原料，在pH6.5条件下用弱酸性阳离子交换树脂732吸附后，再用硫酸铵洗脱，经透析后冷冻干燥得产品。

溶菌酶的优点：

1．溶菌酶是很稳定的蛋白质，有较强的抗热性。蛋清溶菌酶是C型，是已知的最耐热的酶；

2．溶菌酶不会因为有机溶剂的处理而失活，当转移到水溶液中时，溶菌酶的活力可全部恢复；

3．溶菌酶可被冷冻或干燥处理，且活力稳定；

4．溶菌酶适宜pH5.3~6.4，可用于低酸性食品防腐；

5．溶菌酶生产成本较低；

6．溶菌酶的抗菌谱较广，不仅局限于G- 菌，对部分G+菌也有抑制效果；

7．溶菌酶作为防腐剂安全性高。溶菌酶是一种天然蛋白质，1992年FAO/WTO 的食品添加剂协会已经认定溶菌酶在食品中应用是安全的。

溶菌酶的用途：

溶菌酶可参与粘多糖代谢，它能催化革兰氏阳性菌细胞不溶性多糖水解生成可溶性粘肽，是一种具有杀菌作用的天然感染物质，有抗菌、抗病毒、止血、消肿、镇痛及加快组织修复等功能。

近几年，人们根据溶菌酶的溶菌特性，将其应用于医疗、食品防腐及生物工程中，特别是在食品防腐方面，以代替化学合成的食品防腐剂，具有一定的潜在应用价值。因此可用作食品防腐剂。现已广泛应用于水产品、肉食品、蛋糕、清酒、料酒及饮料中的防腐；还可以添人乳粉中，使牛乳人乳化，以抑制肠道中腐败微生物的生存，同时直接或间接地促进肠道中双歧杆菌的增殖。此外，还能利用溶菌酶生产酵母浸膏和核酸类调味料等。