SMCC的偶联方法

SMCC：4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯?，白色粉末，难溶于水，能溶于有机试剂。SMCC是一种双功能偶联剂，偶联的基团是氨基和巯基。常用于抗原制备。

在制备抗原过程中，SMCC活化的蛋白同常是载体蛋白（例如：KLH和BSA），活化过程也叫马来酰化，就是先由载体蛋白的氨基与SMCC连接，形成半偶联物，然后与需要偶联的小分子或者多肽混合，室温偶联。该连接需要有巯基基团。这里利用多肽为例讲解。

首先配置溶液：

改良版PBS（pH7.4），称取3mg的KLH溶于600ul的PBS中；

称取0.5mg的sulf-SMCC同样溶于100ul的PBS中；

然后将溶解的SMCC溶液缓慢滴加进入KLH溶液中，边滴加边轻混匀，然后室温反应2小时；

将溶液加入透析袋中，用改良版的PBS透析，除去多余的SMCC，透析过夜；

第二天，更换1-2透析液后，将溶解好的4mg多肽缓慢滴入半偶联物中，边滴加边混匀，室温反应4小时；

待反应完全后，如果多肽是有机溶剂溶解的，测需要透析，将有机试剂透析除去，如果没有，则不用透析，直接分装保存。

SMCC的偶联效果可以利用巯基检测试剂盒检测。该检测试剂盒是由DTNB与巯基反应形成黄色底物，在412波长处测其吸光度。即可判断检测效率。