DA-64

◆储存条件

2-10℃（冷藏运输）

 

◆分子式

C₁₉H₂₃N₄NaO₃

◆分子量

378.39

 

◆外观

白色~绿褐色或灰绿色，结晶性粉末~粉末（引用文献：和光纯药产品规格）

 

◆溶解性

可溶于水（10 mg/25 mL）

以1 mM以上的浓度溶于水

 

◆产品概要

检测波长

λmax（显色波长）= 727 nm，ε/H₂O₂（一个H₂O₂分子的消光系数）=9×10⁴

分类

酶·底物·抑制剂>>酶底物>>其他底物

原理

过氧化氢是生物体中痕量组分分析、食品质量监控、环境物质检测等过程的重要中间代谢物。DA-64、DA-67是在有过氧化物酶的存在下高灵敏度地检测出过氧化氢的水溶性氧化显色试剂。传统的水溶性过氧化氢显色试剂由于显色色素的分子吸光系数较低以及虽具有高灵敏度，但是因其微溶性难以处理。DA-64，DA-67首次兼容了水溶性和高灵敏度。以往，为了追求高灵敏度，不得不使用发光、荧光试剂。现在，特殊的专用检测机的检测对象也可通过采用DA-64，DA-67，用简便的比色计就可以获取结果。

 

◆特点

兼容高灵敏度和水溶性（引用文献：和光纯药情报）

◆使用例

定量H₂O₂

1.　制备显色溶液  

把3.78 mg DA64和1 mL 100 units/mL的过氧化物酶 (Peroxidase，下文简称POD)放到PIPES缓冲液（0.1mol/L, pH=7, Triton X-100 0.5%）中溶解，定容至100 mL（得到DA64 100 μmol/L溶液）

2.　将上述制备的溶液3 mL与10 μL样本溶液（H₂O₂:0~5 mmol/L）混合，并在37°C下孵育5分钟。

3.　用分光光度计检测727 nm处的吸光度，以空白（用蒸馏水替换样本溶液混合成的溶液）的吸光度差作为检测值，用单独制备的校准曲线确定样本中的含量。

检测POD活性

1.　制备显色溶液

把40 mg DA64和1 mL H₂O₂（2%）放到Mcllvaine缓冲液（柠檬酸0.05 mol/L、磷酸二钠0.1 mol/L， pH=5.7）中溶解，定容至100 mL（得到DA64 100 mmol/L溶液）

2.　将上述制备的溶液2 mL与2 mL样本溶液（1 fmol~1 pmol/tube POD）在37°C下孵育。

3.　用分光光度计检测727 nm处的吸光度，以减去空白的吸光度差作为检测值，用单独制备的校准曲线确定样本中的含量。

 

◆用途

过氧化氢比色定量（引用文献：和光纯药情报）

◆产品列表

产品编号	产品名称	等级	包装
043-22351	DA-64 N-（羧甲基氨基羰基）-4,4'-双（二甲氨基）二苯胺钠	生化学用	100 mg

[1]　橋爪利至:日本化学会、第60回秋季年会講演予稿集2P576 (1990)
[2]　佐方由嗣,橋爪利至,岩田勉,向井豊治:公開特許公報、昭63-24356