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酵母双杂交文库构建
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	630490	Make Your Own “Mate & Plate” Library System	5 Rxns	￥18,726 ￥14,981

文库构建         → →       预制文库                                     → → →             ↓

■ 制品说明

Mate & Plate的优点

如果不使用Clontech的预制Mate & Plate Libraries，构建和筛选一个传统的酵母双杂交文库是非常繁冗的。而使用预制文库，只需将MATα型文库菌株和转入诱饵基因构建体的MATa型酵母菌株共同过夜孵育，然后将接合后的菌液涂板于合适的选择培养基上即可，操作简便。Clontech提供多种组织特异的、均一化的通用文库，适用于绝大多数文库筛选。

需要自己的文库吗？您可以自己制作，简便而且快速。

如果Mate & Plate Libraries中没有适合您需要的文库，您可使用Make Your Own Mate & Plate Library System自己制作文库。利用该系统，一周之内即可构建足够用于数百次酵母双杂交筛选实验的所需文库。文库构建是在Y187文库酵母菌株中通过酵母高效的同源重组机制直接完成的 (图1)，无需传统文库构建过程中的一些繁冗的操作 (比如文库克隆、扩增和大肠杆菌收集等)。

经济有效的操作以及SMART技术

该系统利用Clontech的SMART cDNA合成技术，使用任意组织来源的少至100ng的总RNA，即可构建cDNA文库。SMART技术利用了MMLV (Moloney murine leukemia virus) RT的末端转移酶活性和模板转换机制，合成的一链cDNA序列末端含有已知的通用引物结合位点。因此，SMART一链cDNA可以通过PCR进行扩增，然后与具有末端同源序列的Matchmaker Gold 猎物载体pGADT7-Rec进行重组。基于以上特征，使用纳克级的RNA (例如来源于显微解剖组织、激光捕获细胞或者活检样品) 即可合成cDNA，共转化这些cDNA和pGADT7-Rec到酵母菌株Y187中，即可直接构建文库。

■ 制品特点

1. 利用SMART™技术在酵母中直接构建文库 2. 无需繁琐的克隆或文库扩增 3. 足够用于数百次的双杂交筛选

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酵母双杂交培养基
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	630494	Yeast Media Set 2	Each	￥3,649
Clontech	630495	Yeast Media Set 2 Plus	Each	￥7,732

Code No. 产品名称 630494   Yeast Media Set 2 630495   Yeast Media Set 2 Plus

酵母双杂交培养基套装

■ 制品说明

Matchmaker Media Sets包含Matchmaker Gold Yeast Two-Hybrid操作中所需要的全部培养基。 即用型方便袋包装 培养基以非常方便的袋装形式成套销售。使用时仅需要将袋中的所有组分倒入三角瓶或培养瓶中，加入0.5 L的dH2O，然后灭菌即可。无需称量、混合和调整pH值操作。 “Plus”套装提供更高的性价比 Yeast Media Set 2 Plus同时包含Aureobasidin A和大规格的X-alpha-Gal，这两种试剂在Matchmaker Gold操作中是必需的。

■ 制品特点

1. 用于酵母双杂交筛选的全套培养基。 2. 方便——同一包装中包含Matchmaker Gold System所需的所有组分。 3. 性价比高——比单独购买便宜。 4. 每袋仅需与500 ml水混合后灭菌。

■ 制品用途

1. 酵母双杂交筛选 (Matchmaker Gold)

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酵母双杂交文库载体
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	630404	pBridge Vector	20 μg	￥5,603
Clontech	630442	pGADT7 AD Vector	20 μg	￥5,717
Clontech	630443	pGBKT7 DNA-BD Vector	20 μg	￥5,717

Code No. 产品名称 630404   pBridge Vector 630442   pGADT7 AD Vector 630443   pGBKT7 DNA-BD Vector

■ 制品说明 酵母双杂交载体 pGBKT7是酵母双杂交bait表达载体，旨在表达GAL4 DNA结合结构域（DNA-BD, 1-147 aa）与bait蛋白质的融合蛋白质。融合蛋白质在ADH1启动子下高水平表达，同时融合蛋白质含有一个c-Myc表位标签。为了促进体外转录和翻译，在pGBKT7的GAL4 DNA-BD和表位标签之间添加了T7启动子 。 · pGADT7 ——酵母双杂交 Prey 载体 pGADT7是酵母双杂交表达载体，旨在表达GAL4激活结构域（AD, 768-881 aa）与目的蛋白质的融合蛋白质。融合蛋白质在全长ADH1启动子下高水平表达，同时融合蛋白质含有一个血凝素（HA）表位标签。为了促进体外转录和翻译，在pGADT7的GAL4 AD和表位标签之间添加了T7启动子（1,2）。 · pBridge ——三杂交bait载体 pBridge载体与基于GAL4的双杂交系统组合，可以用于研究三个蛋白质之间的相互作用。在Matchmaker Gold系统中，pBridge相当于替代了pGBKT7。由于它的两个不同的多克隆位点，pBridge载体可以表达一个DNA-BD融合蛋白质和另一个在bait和prey之间起“Bridge”作用的蛋白质。 与标准双杂交分析相比，三杂交系统更有可能用于研究更加复杂的蛋白质之间的互作。系统中的第三个蛋白质可以通过多种方式参与互作： 1. 作为桥梁，连接两个原本没有直接互作的蛋白质，使它们发生互作。 2. 稳定两个蛋白质之间的弱相互作用。 3. 修饰或抑制一个或两个蛋白质（3）。 4. 抑制双杂交互作。 额外蛋白质的表达受甲硫氨酸诱导型启动子调控——甲硫氨酸不存在的条件下蛋白质才能够表达。蛋白质的表达与否由外源培养基中是否含有甲硫氨酸决定，而第三个蛋白质的表达效应则由报告基因或营养标记基因的表达来指示。我们提供的酵母培养基（Code. No：630430 &630429）缺少甲硫氨酸，非常适用于携带pBridge载体的酵母菌株。   ■ 制品特点 1. 非常受欢迎并被广泛使用的酵母双杂交载体。 2. pGBKT7和pGADT7是Matchmaker Gold Yeast Two-Hybrid System的组分。 3. pBridge表达双杂交之外的第三个蛋白质。   ■ 制品用途 1. 酵母双杂交筛选 2. 酵母三杂交筛选   ■ 文献 1. Tirode, F. et al. (1997) J. Biol. Chem. 272:22995–22999. 2. Brachmann, R. & Boeke, J. (1997) Curr. Opin. Biotechnol. 8:561–568. 3. Osborne, M. et al. (1995) Biotechnology 13:1474–1478.

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哺乳动物双杂交系统
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	630305	Matchmaker Mammalian Assay Kit 2	Each	￥9,407

酵母双杂筛选       互作蛋白质验证   →         ↓ 插入片段确认 →                 ↓     →               ↓                     ↓                       ↓

■ 制品说明 哺乳动物双杂交系统 Matchmaker Mammalian Two-Hybrid Assay Kit 2 可以快速简便的分析在哺乳动物细胞内表达的蛋白质之间的相互作用，试剂盒采用分泌型的报告子SEAP检测感兴趣的两个蛋白质之间的互作，避免了裂解细胞的操作。 由于双杂交检测发生在哺乳动物细胞内，哺乳动物cDNA编码的蛋白质更接近于天然构象，因此，转录后修饰及实验结果更能代表生物过程中的重要互作。 Matchmaker Mammalian Two-Hybrid Assay Kit 2与Matchmaker Gold Two-Hybrid System基于同样的原理，即表达的两个融合蛋白质分别包含DNA结合结构域或激活结构域。若蛋白质之间发生互作，则pG5-SEAP质粒上的SEAP报告基因被激活而发生转录。   ■ 制品特点 1. 在哺乳动物细胞内简便迅速地分析蛋白质之间的互作 2. 分泌型的SEAP报告子避免了细胞裂解的繁琐操作 3. 分析结果更加真实   ■ 制品用途 1. 哺乳动物细胞内确认蛋白质的互作 2. 确定互作区域   ■ 实验操作流程图 图1 Matchmaker Mammalian Two-Hybrid Assay Kit 2操作流程   图2 化学发光法检测蛋白质之间的相互作用 诱饵载体pM-53表达的p53蛋白质融合GAL4 DNA结合结构域。将bait载体与SV40大抗原prey载体（pVP16-T）共转化到HEK293细胞中，由于大T抗原与p53发生互作，可以检测到SEAP的高强度表达。CP蛋白质与p53蛋白质没有较强的互作，作为阴性对照。

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