NEBNext 文库稀释缓冲液

二代测序文库的精确定量对于每次测序得 到 的 数 据 量 及 数 据 的 质 量 至 关 重 要 。 特 别是  Illumina 平台，精确的文库定量对于优化簇密度，从而得到最好的测序结果非常重要。实时定量  PCR（qPCR） 是最精确及有效的文库定量方法，与测量总核苷酸浓度的电泳法和分光光度计法相比，qPCR 有更高的一致性和重复性。基于扩增的定量方法只测量包含两个接头序列的分子，从而提供更为精准的可测序文库分子的浓度。

NEBNext  文库定量试剂盒对二代测序中基于 qPCR 的文库定量提供了显着的提升。NEBNext  文库定量试剂盒优化了针对 Illumina 平台基于 qPCR 定量组分。NEBNext  文库定量试剂盒包含 P5 和 P7 Illumina 接头序列的引物，以及一组高质量预稀释的 DNA 标准品，对 150-1000 bp 之间稀释的 DNA 文库进行可靠的定量。

 

图 1. 使用 NEBNext 文库定量试剂盒定量文库大小浓度，实现最佳簇密度。

使用 NEBNext，可以从具有广泛的文库大小 和 GC 含量的量化文库获得最佳簇密度。 使用 NEBNext 文库定量试剂盒定量来自指定来源的 310-963bp 的文库，然后稀释至8pM 并加载到 MiSeq（v2 化学; MCS v2.4.1.3） 上。文库浓度范围为 7-120 nM，文库的原始簇密度为 965-1300 k / mm 2（ave。= 1199）。 

 

图 2.  使用 NEBNext 文库定量试剂盒，文库定量结果一致性更好。

 文库定量试剂盒（通用），对 3 个 340-400 bp 的文库进行定量重复 2 – 4 次。 如图所示NEBNext 试剂盒（橙色）比 Kapa 试剂盒 （灰色）对文库浓度定量的一致性有显著改善。

 

 –  NEBNext 文库定量预混液 

 简单方便的操作流程 – 产品可用于快速操作和低样本起始量。
 简单方便的剂型 – 试剂盒包含的酶、核苷酸和缓冲液都按照操作所需的浓度和体积提供；
    许多产品都有预混液形式；客户可根据需要个性化选择模块试剂。
 严格的质量监控 – 更多的质量监控确保产品的质量及纯度
 功能验证 – 每种试剂盒和模块都经过相应的文库制备，再通过相应测序平台测序验证（Illumina、
    Ion torrent、454 或 SOLiD）。
 更高性价比   

使用下面的图表，选择最适合 454 文库制备的 NEBNext 产品。 

适用于 454 的 NEBNext DNA 文库制备试剂以试剂盒的形式提供，您可以选择以下两种方法中的任何一种，DNA 快速文库制备法：其中包括末端修复、加 dA 尾、连接接头和片段筛选；也可以选择经典 DNA 文库制备法：其中包括末端修复、连接接头、缺口填充和 ssDNA 筛选步骤。每批次试剂盒都经过构建基因组 DNA 文库，再在 454 测序平台测序进行验证。下表列出了用于 454 DNA 测序文库制备的试剂盒，根据文库制备流程，每个步骤所需试剂也列在表中。适用于 SOLiD 的 NEBNext Small RNA 文库制备试剂以试剂盒形式提供。根据文库制备流程，每个步骤所需试剂也列在表中。