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5´ DNA 腺苷化试剂盒 货 号 #E2610L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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5´ DNA 腺苷化试剂盒 货 号 #E2610L 5´ DNA 腺苷化试剂盒 货 号 #E2610L

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特性

 酶法对 ssDNA 接头进行 5´ 腺苷化，用于二代测序
 单步反应即可完成定量腺苷化
 比目前其它化学和酶学方法更简便
 产物无需纯化

概述

 5´ DNA 腺苷化试剂盒能将 DNA 寡核苷酸 5´端腺苷化，试剂盒操作简便高效，反应需要 Mth RNA 连接酶、 ATP 和 5´ –磷酸化的单链 DNA。试剂盒经过优化，无论序列有无 3´ 端终止子，都能够生成腺苷化的 DNA。通常该试剂盒能将 95% 的 pDNA转化成 AppDNA。高效的转化，使得反应无需进行胶回收提纯步骤，因此可增加总产量。
 

5′ DNA 腺苷化试剂盒组份

– Mth RNA 连接酶（重组酶）
– 5´ DNA 腺苷化缓冲液（10X）
– 1 mM ATP 

质保声明

无核酸内切酶、核酸外切酶污染。

 

注意事项

该酶转化率低，需要约等量摩尔浓度的酶和底物 DNA 相互作用。在二代测序 cDNA文库构建实验中，预腺苷化 DNA 的连接头可用于 RNA 3´ 末端的连接。
 

参考文献

有关该产品特性和应用的参考文献请联系我们。  

T4 多聚核苷酸激酶（T4 PNK） 货 号 #M0201L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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T4 多聚核苷酸激酶（T4 PNK）                              收藏

T4 多聚核苷酸激酶（T4 PNK） 货 号 #M0201L T4 多聚核苷酸激酶（T4 PNK） 货 号 #M0201L T4 多聚核苷酸激酶（T4 PNK） 货 号 #M0201L T4 多聚核苷酸激酶（T4 PNK） 货 号 #M0201L T4 多聚核苷酸激酶（T4 PNK） 货 号 #M0201L

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相关产品

T4 多聚核苷酸激酶（3´ 磷酸酶活性缺失）

特性

 DNA 或 RNA 5´ 末端的磷酸化，以便进行连接反应
 DNA 或 RNA 的末端标记，用作探针和进行 DNA 测序
 用 T4 多聚核苷酸激酶（NEB #M0201）除去 3´ 磷酸基团
 T4 多聚核苷酸激酶（3´ 磷酸酶活性缺失）（NEB #M0236）将 3´ 端已经磷酸化的单核苷酸 5´磷酸化，制备pNp  底物，用于添加到 DNA 或RNA的 3´ 端
 用 T4 多聚核苷酸激酶（3´ 磷酸酶活性缺失）（NEB #M0236）对 3´ 端有磷酸基团的寡核苷酸的 5´ 端   进行标记

概述

T4 多聚核苷酸激酶能够催化 ATP 的 γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链（双链或单链 DNA 或 RNA）的 5´ -羟基末端以及 3´ -单磷酸核苷上。T4 多聚核苷酸激酶（NEB #M0201）还具有 3´ 磷酸酶活性，将 3´ -磷酸基团从寡核苷酸的 3´ 磷酸末端、脱氧 3´ -单磷酸核苷和脱氧 3´ -二磷酸核苷上水解掉。经修饰后的酶（NEB #M0236）具有所有激酶的活性，但是缺失了 3´ 磷酸酶活性。  

来源

重组 E. coli 菌株，克隆有 T4 多聚核苷酸激酶基因。  

反应条件

1X T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液
[70 mM Tris-HCl（pH 7.6 @ 25℃），10 mM MgCl2，5 mM DTT]，37℃ 温育。
热失活：65℃ 加热 20 分钟。  

注意事项

达到最佳酶活力，需要新鲜缓冲液（在旧缓冲液中，由于氧化造成的 DTT 含量减少会降低酶活力）。  

放射性标记反应：50 μl 反应体系中，用 1X T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液、50 pmol 的 γ-[32P] ATP 和 20 单位的酶 37℃ 温育 30 分钟可催化 1-50 pmol 的 5´ 末端磷酸化。[33P] ATP 可代替 [32P] ATP 作标记反应。

CTP、GTP、TTP、UTP、dATP 及 dTTP 均可替代 ATP 作为磷酸供体。

DNA 或 RNA 磷酸化反应（放射性和非放射性）操作流程请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

要提高平齐末端或 5´ 凹陷末端的磷酸化效率，可在加入 T4 多聚核苷酸激酶前，先将 DNA 溶液于 70℃ 加热 5 分钟，然后冰上冷却，并加入 5%（w/v）的 PEG-8,000。

T4 多聚核苷酸激酶需要 ATP 才能发挥活性，但是为了适用于高活力的放射性标记反应，在随酶提供的反应缓冲液中不含 ATP。

一般来说，进行激酶反应之后是连接反应。在这种情况下，T4 多聚核苷酸激酶反应在连接酶反应缓冲液中 37℃ 温育 30 分钟即可。反应后的产物可直接进行连接，无需改变缓冲液和进行热失活。如果连接时需要保持其它 DNA 片段的去磷酸化状态，则需要在连接反应前热失活 T4 多聚核苷酸激酶。

 

质保声明

T4 多聚核苷酸激酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。  

单位定义

1 单位即 1 个 Richardson 单位，指 37℃条件下，30 分钟内催化 1 nmol 酸不溶性 [32P] 掺入所需要的酶量（1）。单位活性检测条件请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。  

浓度

10,000 units/ml。  

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献，请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。  

T4 多聚核苷酸激酶反应


T4 多聚核苷酸激酶（T4 PNK） 货 号 #M0201L 
在 50 μl T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液体系中，37℃温育 30 分钟，γ-磷酸基团从 ATP 转移至 d(T)8 的 5´ 羟基末端 [ATP 与 d(T)8 比例是 1:1，量为 50 pmol]，结果显示 20 单位酶量可使超过 90% 的磷酸基团转移。

T4 RNA 连接酶 1（ssRNA 连接酶） 货 号 #M0204L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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T4 RNA 连接酶 1（ssRNA 连接酶）                              收藏

T4 RNA 连接酶 1（ssRNA 连接酶） 货 号 #M0204L T4 RNA 连接酶 1（ssRNA 连接酶） 货 号 #M0204L T4 RNA 连接酶 1（ssRNA 连接酶） 货 号 #M0204L T4 RNA 连接酶 1（ssRNA 连接酶） 货 号 #M0204L

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#M0204L
5,000 units
2,939.00
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#M0204S
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相关产品

5´ -三磷酸腺苷（ATP）
通用 miRNA 克隆接头

特性

 连接单链 RNA 和 DNA
 用 5´ -[32P] pCp 进行 RNA 3´ 末端标记
 RNA 和 DNA 分子内及分子间的连接
 合成单链寡脱氧核苷酸
 蛋白质中掺入非天然氨基酸 

概述

催化 3´ →5´ 磷酸二酯键的形成，使核苷酸的 5´ -磷酸末端和 3´ -羟基末端连接，伴随着 ATP 水解为 AMP 和 PPi。作用底物包括单链 RNA、DNA 及二核苷焦磷酸。 

来源

携带 T4 RNA 连接酶 1 基因的 E. coli 菌株。 

反应条件

1X T4 RNA 连接酶反应缓冲液[50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃)，10 mM MgCl2，1 mM DTT]，加入 1 mM ATP，37℃ 温育。热失活：65℃ 15 分钟或煮沸 2 分钟。 

使用注意事项

pCp 的连接需要加入终浓度为10%（v/v）的 DMSO。 

随酶提供试剂

10X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
10 mM ATP（NEB #M0204中包含）或 100 mM
 ATP（NEB #M0437中包含）
 50% PEG 8000 

质保声明

无单链 DNA 核酸外切酶、核酸内切酶、RNase 和磷酸酶污染。 

单位定义

1 单位指 37℃ 条件下，30 分钟内将 1 nmol 的 5´ -[32P] rA16 转化成磷酸盐不溶物所需要的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb-china.com 或  

浓度

10,000 或 30,000 units/ml。 

参考文献

有关该产品特性和应用的参考文献请联系我们。  

T4 RNA 连接酶 2（dsRNA 连接酶） 货 号 #M0239L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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T4 RNA 连接酶 2（dsRNA 连接酶）                              收藏

T4 RNA 连接酶 2（dsRNA 连接酶） 货 号 #M0239L T4 RNA 连接酶 2（dsRNA 连接酶） 货 号 #M0239L T4 RNA 连接酶 2（dsRNA 连接酶） 货 号 #M0239L T4 RNA 连接酶 2（dsRNA 连接酶） 货 号 #M0239L

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#M0239L
750 units
3,549.00
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无
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#M0239S
150 units
889.00
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特性

 连接粘性末端接头
 连接双链 RNA 中切刻的最佳选择
 可用于 DNA/RNA 杂交链中，RNA 3´ 羟基与 DNA 5´ 磷酸基的连接 

概述

T4 RNA连接酶 2，也被称为 T4 Rnl2（gp24.1），同时具有 RNA 链分子间和分子内连接活性。与 T4 RNA 连接酶 1（NEB #M0204）不同的是， T4 RNA 连接酶 2 对双链 RNA 切刻的连接活性要明显高于对单链 RNA 的末端连接。该酶也可用于连接双链结构中 RNA 3´ 羟基和 DNA 5´ 磷酸基的切刻。
 

来源

纯化自携带 T4 RNA 连接酶 2 基因的重组 E. coli 菌株。 

反应条件

1X T4 RNA 连接酶 2 反应缓冲液[50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃)，2mM MgCl2，1 mM DTT，400 μM ATP]，37℃ 温育。 

质保声明

无单链和双链 DNA 核酸内切酶、外切酶、 RNase 以及磷酸酶污染
 

单位定义

1 单位指 20 μl 反应体系中， 37℃ 条件下， 30 分钟完全连接 0.4 μg 的 23-mer 和 17-mer RNA等摩尔混合物所需的酶量。单位活性检测的检测条件请登录 www.neb-china.com 或 www.neb.com。
 

浓度

10,000 units/ml。 

参考文献

有关该产品特性和应用的参考文献请联系我们。 www.neb-china.com 或  

T4 RNA 连接酶 2，截短型 货 号 #M0242L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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T4 RNA 连接酶 2，截短型                              收藏

T4 RNA 连接酶 2，截短型 货 号 #M0242L T4 RNA 连接酶 2，截短型 货 号 #M0242L T4 RNA 连接酶 2，截短型 货 号 #M0242L T4 RNA 连接酶 2，截短型 货 号 #M0242L

货 号
规 格
价 格(元)
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#M0242L
10,000 units
3,219.00
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#M0242S
2,000 units
799.00
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相关产品

通用 miRNA 克隆接头

特性

 将预腺苷化的 DNA 或 RNA 序列标签连接到任何 RNA 3´ 末端
 将单链腺苷化引物连接至小 RNA 上，用于 cDNA 文库构建
 将单链腺苷化引物连接至 RNA 上，用于链特异 cDNA 文库构建 

概述

T4 RNA 连接酶 2，截短型（T4 Rnl2 截短型）可特异性地将 5´ 端预腺苷化的 DNA 或 RNA连接到 RNA 3´ 末端。该酶连接时不需要 ATP，但需要预腺苷化底物。 T4 Rnl2 截短型的表达来自E. coli 质粒，该质粒编码 T4 RNA 连接酶 2 基因的前 249 个氨基酸。与全长的 T4 RNA 连接酶 2 不同， T4 Rnl2 截短型不能将底物的 5´ 末端腺苷化，因此无法将 RNA 或 DNA 的 5´ 磷酸末端连接到 RNA的 3´ 端。该酶即 Rnl2（1-249），可用于 microRNA 克隆中接头连接的优化，因为此酶只能利用腺苷化的引物，因此可以降低连接背景。
 

来源

携带 T4 RNA 连接酶 2， 截短型基因的重组 E. coli 菌株。 

反应条件

1X T4 RNA 连接酶反应缓冲液[50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃)，10 mM MgCl2，1 mM DTT]，25℃ 温育。热失活：65℃ 20 分钟。 

随酶提供的试剂

10X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
50% PEG 8000 

质保声明

无单链和双链 DNA 核酸内切酶、外切酶、 RNase 以及磷酸酶的污染。
 

单位定义

200 单位指 20 μl 反应体系中， 25℃ 条件下， 1 小时将 80% 的 31-mer RNA 连接到预腺苷化 17-mer DNA 末端[miRNA 通用性克隆接头（NEB#S1315） ]末端所需的酶量。单位活性检测条件见www.neb-china.com 或 www.neb.com。
 

浓度

200,000 units/ml。 

参考文献

有关该产品特性和应用的参考文献请联系我们。 www.neb-china.com 或