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生物体组织透明化新技术
SCALEVIEW®-A2
宮脇敦史博士等人开发了一种水溶状态下不会损坏荧光蛋白,可简便使生物体组织透明化的方法。
对于福尔马林固定的样本,SCALEVIEW®-A2是不破坏其光吸收和荧光,同时可减少光散射的水溶性溶液。仅需将哺乳类动物大脑等生物体组织浸泡于SCALEVIEW®-A2中,即可透明化。
SCALEVIEW®-A2光学特性——折射率ne(20℃)为1.377-1.381。
HP数据:理化学研究所 脑科学综合研究中心细胞机能探索技术开发小组濱裕先生、宮脇敦史提供
合作:奥林巴斯(Olympus)株式会社
参考文献:Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 14, 1481(2011).
◆SCALEVIEW®-A2 操作案例
以透明化小鼠大脑为样本,SCALEVIEW®-A2透明化方法操作如下:
1. 固定
① 用4% 多聚甲醛(PFA)/PBS(pH 7.5~8.0)对小鼠进行灌流固定。
② 取出小鼠大脑后,用4%PFA/PBS固定(4℃、10h), 20% 蔗糖/PBS置换(4℃、24h)。
③ 用OCT复合物对小鼠大脑进行包埋处理后,液氮进行冷冻。
④ 用PBS对冷冻脑组织解冻、清洗后,再用4% PFA/PBS进行再固定(室温、20min)
2. 透明化处理
⑤ 将固定好的小鼠大脑浸泡在SCALEVIEW®-A2中(室温)。
注意点:
1.每个成年小鼠大脑需要使用30mL以上的SCALEVIEW®-A2。
2.透明化需要1周以上时间。浸泡过程中,需在混匀器等设备中慢慢轻晃溶液。每天更换一次
2.SCALEVIEW®-A2溶液,效果更佳。
3.通过SCALEVIEW®-A2溶液浸泡后,小鼠大脑体积会单方向膨胀10~30%水平。
3. 观察
⑥ 观察SCALEVIEW®-A2处理后的小鼠大脑样品使用双光子激光显微镜、奥林巴斯(Olympus)公司
XLPLN25SVMP多光子专用物镜。或使用激光共聚焦显微镜进行观察。
⑦ 观察结束后,可将小鼠大脑再次浸泡于SCALEVIEW®-A2溶液中,保存温度4℃。
◆SCALEVIEW®-A2处理案例
图1. SCALEVIEW®-A2透明化小鼠大脑案例
从左往右: SCALEVIEW®-A2处理前的小鼠大脑;SCALEVIEW®-A2浸泡两周后的小鼠大脑
◆SCALEVIEW®-A2观察案例
图2. 双光子激光显微镜下获取的Thy1-H小鼠大脑深层观察图像
使用奥林巴斯(Olympus)公司XLPLN25XWMP多光子专用物镜观察图像
比例尺:50μm
图3. 双光子激光显微镜下获取的Thy1-H小鼠大脑深层观察图像
使用奥林巴斯(Olympus)公司XLPLN25XSVMP(NA.1.0 WD4mm)多光子专用物镜观察图像
图4. 激光共聚焦显微镜下获取的小鼠胰脏透明化图像
对小鼠进行灌流固定处理前,先使用Lectin Texas red对流入血管进行标记处理。灌流固定后,取出胰脏并用SCALEVIEW®-A2进行处理。图为奥林巴斯(Olympus)公司物镜:UPLSAPO30XS观察下的图像。
◆相关视频(欲观看视频请点击文字)
YFP-H小鼠海马部成像视频
使用奥林巴斯(Olympus)公司XLPLN25XSVMP(NA1.0,WD4mm)多光子专用物镜观察图像
YFP-H小鼠大脑的成像视频
使用奥林巴斯(Olympus)公司XLSLPLN25XSVMP(NA0.90,WD8mm)多光子专用物镜观察图像
组织透明化配套耗材:成像用透明室
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