无动物参与的皮肤致敏试验方法

ADRA试剂盒

　　ADRA（Amino acid Derivative Reactivity Assay，氨基酸衍生物反应法）是应用了N-(2-(1-naphthyl) acetyl)-L-cysteine【NAC】和α-N-(2-(1-naphthyl) acetyl)-L-lysine【NAL】的化学品皮肤致敏试验方法，能替代原有的动物检测方法。

　　使用本试剂盒能使ADRA试验更简便、顺利地进行。

◆原理
 

　　ADRA原理的是先让被测物质和NAC、NAL在25℃下反应24小时，然后分别对反应溶液中剩余的NAC和NAL的浓度进行定量，最后评估皮肤是否发生过敏现象。

◆优点

●　在相对长的波长下（281 nm）检测NAC和NAL，可防止待测样品和亲核试剂的共洗脱。

●　ADRA试验所需反应物的浓度仅为现有方法的1%，可避免沉淀的产生。

●　在HPLC分析前，通过添加终止液（2.5％TFA）来停止反应，因此检测的可重复性好。

●　ADRA试验使用96孔板和多通道移液器，可在短时间内测定多个样品。

◆试剂盒组成
 

◆使用方法
 

　　用水将预混合缓冲液溶解，再将NAC和NAL溶于其中，然后在96孔板与待测物反应24小时后，通过HPLC即可进行分析。

　　预混缓冲液、NAC和NAL都已经按照反应所需的量分装好，只需进行溶解即可用于ADRA试验。

◆其他需要用到的试剂·实验器材
 

试剂
 

* 蒸馏水或更高级别的水（ADRA试验需要使用金属含量低的水。）

* * 请勿在被测物质溶于水或Acetonitrile时使用。

※ 需要用苯乙醛 (CAS RN^® 122-78-1)作为阳性对照化合物。

实验器材
 

● 电子天平：精确到0.1 mg

● 微量移液枪：量程为2～10 µL、10～100 µL和100～1000 µL的3种移液枪

● 12道移液枪：量程为50～150 µL

● HPLC系统：配套96孔用遮光自动进样器，以0.3 mL/min流速进样

● UV检测器：二极管阵列检测器（PDA检测器）或吸光度检测器（281 nm）

● HPLC柱：CAPCELL CORE C18 column（2.7 µm, 3.0×150 mm）【产品编号：51112】或同类型产品

● pH计：pH可读取到±0.01，并配套校准用缓冲液

● 孵育箱：温度可设定为25℃

● 96孔板

● 500 mL PE瓶

● 试管混合器

● 微孔板封板膜：岛津GLC封板膜【产品编号：568-RES001】或同类型具有高密封性和耐溶剂性的产品

● 微孔板振荡器

● 微孔板离心机

※ ADRA中用到的所有容器或器具（HPLC组件除外），要求使用PP或PE制的一次性用品。金属离子的混入会使NAC二聚化从而导致无法正确进行评估。

◆产品列表
 

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