rBC2LCN-FITC (AiLecS1-FITC) 人iPS未分化标记染料rBC2LCN-FITC (AiLecS1-FITC) 品牌:FUJIFILM Wako


rBC2LCN-FITC (AiLecS1-FITC)

人iPS未分化标记染料rBC2LCN-FITC (AiLecS1-FITC)

品牌:FUJIFILM Wako
CAS No.:
储存条件:-20℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

180-02991

for Cell Staining 100uL 2,580.00


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动,恕不另行通知,确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。

rBC2LCN-FITC (AiLecS1-FITC) 人iPS未分化标记染料rBC2LCN-FITC (AiLecS1-FITC) 品牌:FUJIFILM Wako


rBC2LCN-FITC (AiLecS1-FITC)

人iPS未分化标记染料rBC2LCN-FITC (AiLecS1-FITC)

品牌:FUJIFILM Wako
CAS No.:
储存条件:-20℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

186-02993

for Cell Staining 100uL×5 10,740.00


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Anti-Human iPS酶试剂盒Takara Clontech

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Anti-Human iPS
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara M221 Anti-Human Oct4, Monoclonal 0.1 mg Inquire Anti-Human iPS Anti-Human iPS Anti-Human iPS
Takara M222 Anti-Human Lin28, Monoclonal 0.1 mg Inquire Anti-Human iPS Anti-Human iPS Anti-Human iPS
Takara M223 Anti-Human Sox2, Monoclonal 0.1 mg Inquire Anti-Human iPS Anti-Human iPS Anti-Human iPS
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■ 制品内容
单克隆抗体 (冻干品) 0.1 mg
 
■ 制品说明
以基因重组Human Oct4全长蛋白质、Human Lin28全长蛋白质、Human Sox2肽 (219-236) [GSPTYSMSYSQQGTPGMA]-KLH复合物为免疫原获得的小鼠单克隆抗体。
克隆编号 特异性 亚型
Oct4 13-12F 与人Oct4特异性反应 Mouse IgG2b
Lin28 91-12A 与人Lin28特异性反应 Mouse IgG2b
Sox2 9B-12H 与人Sox2特异性反应 Mouse IgG2b
 
■ 保存
4℃。
本制品不含防腐剂。溶解后的抗体溶液 (2.0 mg/ml) 分成小包装后,-20℃可保存1年,添加0.1%NaN3后4℃可保存6个月。避免反复冻融,稀释后尽量不要保存。
 
■ 抗体溶解
使用50 μl灭菌蒸馏水溶解 (2.0 mg/ml,不含防腐剂)。
 
■ 用途
◇ 还原条件下的蛋白质印迹分析。
◇ 免疫细胞化学染色。
 
 

iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System酶试剂盒Takara Clontech

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iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Cellartis Y30055 Cellartis® iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System 1 Kit ¥13,846 iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System
Cellartis Y30051 Cellartis® Hepatocyte Maintenance Medium 100 ml ¥2,198 iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System
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iPS向肝脏细胞定向分化操作系统
(Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System)
以肝脏细胞为模型的实验越来越受到重视,在肝脏病变机理研究、药物代谢研究、药物毒理评估等方面有广阔的应用前景。然而,以个体原代肝细胞为材料来源会产生如取材困难、材料批间差大、无法长期稳定供应等一系列难以克服的问题。因此,通过iPS批量转化生产肝细胞的方法就显示出特别的优势。Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System可以稳定地、规模化地实现iPS向hepatocyte的诱导转化生产,而且诱导转化出的肝细胞能够稳定表达药物代谢相关酶系统和药物转运系统。
Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System是一套Do-It-Yourself系统,客户既可以对某个特殊病人来源的iPS实现转化,也可以利用cellartis供应的iPS进行标准化操作。使用本产品的过程起始于诱导人iPS转化成为确定性内胚层(Definitive Endoderm (DE))细胞,然后诱导转化DE至肝细胞。本产品是All-In-One型产品,实验所需的培养基、基质(coating)等包括在内。应用本产品转化约3 × 106 hiPS cells,可以获得约5 × 106 肝细胞(大约50 cm2面积的单层贴壁细胞)。
利用Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System转化得到的肝细胞除了清晰表现出肝细胞的必备特征外(如肝细胞特异性标志物、CYP系列酶等),还保留了原始细胞供体者的遗传基因背景。另外,相比较从组织切除获得的原代肝脏细胞(通常需要低温保存),通过本产品系统转化获得的肝细胞在更长的时间跨度上保持着生理功能的稳定性。这一点对于毒理学评估和病毒感染评估具有显著的意义。为长时间维持培养hiPS转化而来的肝细胞,我们推荐Cellartis Hepatocyte Maintenance Medium (Cat. No. Y30051)。
 
关于Cellartis 卓越的iPS Cell to Hepatocyte Differentiation技术的专项说明,请点击:
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■ 产品特点
· Highly reproducible, robust system—the exact same protocol has been shown to work across 25 different iPS cell lines, so no need to optimize for your lines.
· Ideal for drug metabolism and safety studies—consistently generate panels of >90% pure, functional, hiPS cell-derived hepatocytes with diverse genetic backgrounds.
· Customized starting materials—start with any disease-relevant iPS cell lines and create accurate liver disease models.
· Ready for personalized medicine—make patient-specific, disease-specific cells for therapeutic applications.
· Extended experimental window—hepatocytes can be used for a minimum of 11 days for functional tests.
 
■ 产品成分
· Cellartis DEF-CS 100 Culture System (Y30020, not sold separately)
· Cellartis Definitive Endoderm Differentiation Kit (Y30030, not sold separately)
· Cellartis Hepatocyte Differentiation Kit (Y30050)
 
■ 产品详情请点击:iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System
 
iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System
Immunocytochemistry analysis of hepatocyte differentiation. hiPS cells were differentiated into functional hepatocytes using the Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System. Hepatocytes were immunostained to detect early hepatic markers HNF4α (red, nuclear) and CK18 (green) on days 14 and 21. As the hepatocytes matured, expression of liver-specific markers CYP3A (red, cytoplasmic) and Albumin (green) increased as seen on day 28, as expected. Cell nuclei were stained with DAPI (blue).
 
参考文献:
Asplund, Annika, et al.One Standardized Differentiation Procedure Robustly Generates Homogenous Hepatocyte Cultures Displaying? Metabolic Diversity from a Large Panel of Human Pluripotent Stem Cells. Stem Cell Rev and Rep (2015).
 
用户分享:
◆ 东海大学医学部-纸谷聪英教授
   利用人iPS细胞体外构建多囊性肝病(Polycystic liver disease)模型
 
iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System
纸谷聪英教授使用Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System(Y30055)构建肝脏疾病模型的研究成果已刊登在Stem Cell Research。
【论文】
Akihide, K., Hiromi, C., Kinuyo, I., Emi, A., Kota, T., & Tatehiro, K., et al. (2018). An in vitro model of polycystic liver disease using genome-edited human inducible pluripotent stem cells. Stem Cell Research, 32, 17-24.
 
实验数据
 
iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System
 
图:使用 Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System(Y30055)获得的人iPSC来源肝前体细胞(iPS-HPCs)诱导分化为胆管状Cyst结构。
(引用自文献Akihide Kamiya et al., Stem Cell Research, 2018)
 
访谈时间:
1. 开始使用Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System(Y30055)的契机是什么?
很多研究组已经报道了多种从人iPS细胞诱导分化形成肝脏细胞的方法,我们研究组也在做相关工作。由于细胞分化不稳定,我担心使用饲养层细胞培养人iPS细胞会对肝脏分化产生影响,因此决定尝试使用Cellartis iPS细胞无饲养层培养系统Cellartis DEF-CS™ 500 Culture System(Y30010)和肝脏分化系统Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System(Y30055)。
 
2.实际使用后感觉如何?
与之前使用的饲养层培养方法相比,Y30010能更简便高效的进行培养;使用Y30055进行的肝脏分化非常稳定,进一步提升了实验效率。
 
3. 对暂未使用该制品的用户有什么寄语?
人iPS细胞向肝脏细胞分化过程中,细胞密度对分化效率有很大影响,进而影响实验结果。我认为Cellartis系统的优点主要在于各个实验阶段偏差小,结果稳定,适合追求实验效率的人。
 
 
◆ 东京医科齿科大学-柿沼晴教授
   先天性肝纤维化模型的开发和病理阐明的研究
 
iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System
柿沼晴教授使用Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System(Y30055)构建肝脏疾病模型的研究成果已刊登在Journal of Hepatology。
 
【论文】
Tsunoda, T., Kakinuma, S., Miyoshi, M., Kamiya, A., Kaneko, S., & Sato, A., et al. (2019). Loss of fibrocystin promotes interleukin-8-dependent proliferation and ctgf production of biliary epithelium. Journal of Hepatology.
 
访谈时间:
1.开始使用Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System(Y30055)的契机是什么?
一起进行研究的老师使用后能够进行稳定的培养,我们研究室也正好想利用无饲养层培养系统,所以开始使用了Cellartis DEF-CS™ 500 Culture System(Y30010)和肝脏分化系统Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System(Y30055)。
 
2.实际使用后感觉如何?
Y30010无饲养层培养系统使用比较简便,同时能够稳定的培养人iPS细胞。这次实验中,利用Y30055分化至肝前体细胞(iPS-HPCs),进一步诱导分化成了胆管细胞,我认为诱导分化的再现性好。不仅分化至成熟肝细胞谱系,同时相比于以往报道的方法,再现性更稳定。
 
3. 对暂未使用该制品的用户有什么寄语?
在人iPS细胞的培养和分化至肝细胞谱系的诱导中,即使是对人iPS细胞使用经验尚浅的实验者,也能够进行培养并得到稳定的再现。
 
 

Human iPS Cell Generation™ All-in-One Vector酶试剂盒Takara Clontech

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Human iPS Cell Generation All-in-One Vector
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 3671 Human iPS Cell Generation All-in-One Vector 10 μg ¥10,014 Human iPS Cell Generation™ All-in-One Vector Human iPS Cell Generation™ All-in-One Vector Human iPS Cell Generation™ All-in-One Vector
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□ 浓度 0.5 μg/μl
     
□ 贮存溶液  
     Tris-HCl (pH 8.0) 10 mM
     EDTA 1 mM
Limited Use Label License: [L44], [M71]
 
■ 制品说明
本制品是制备Human iPS细胞诱导用逆转录病毒所使用的载体。在高效、高表达逆转录病毒载体pDON-5 DNA(Code No.: 3658)上,插入了iPS细胞诱导用基因OCT3/4SOX2KLF4LIN28NANOG,各基因以Thosea asigna virus 的2A*1序列连接在一个载体上。本载体与Retrovirus Packaging Kit Ampho(Code No.: 6161)中的pGP Vector以及pE-ampho Vector共转染至逆转录病毒制备用细胞G3T-hi(Code No.: 6163)后,可以制备iPS诱导用逆转录病毒。如此制备的重组逆转录病毒由于和RetroNectin®(Recombinant Human Fibronectin Fragment)(Code No.: T100A/B)有高亲和性,所以在向目的细胞中导入基因时,使用经RetroNectin®处理后的培养皿或平板,可以得到较高的基因导入率,有效提高iPS细胞的诱导效率。
*1 5种基因转录在同一个mRNA上,翻译时在2A序列的特定位点被分割,使5种蛋白质可以等量表达。
 
■ 保存
-20
 
■ 各载体的遗传信息
  基因名   GenBank Accession No.
  OCT4   NM_002701.4
  SOX2   NM_003106.2
  KLF4   NM_004235.3*2
  LIN28   NM_024674.4
  NANOG   NM_024865.2
*2 更新的NM_004235.4中,CDS的5’端追加了对应9个氨基酸的碱基。本制品的KLF4基因中不含N端的这9个氨基酸的序列,已经确认可以有效诱导iPS细胞。
 
■ 载体图谱
Human iPS Cell Generation™ All-in-One Vector
 
 
 
 

Mouse ES and iPS cell culture medium (2i)酶试剂盒Takara Clontech

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Mouse ES and iPS cell culture medium (2i)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Cellartis Y40031 Cellartis® 2i mES/iPSC Culture Medium 200 ml ¥3,158 Mouse ES and iPS cell culture medium (2i) Mouse ES and iPS cell culture medium (2i) Mouse ES and iPS cell culture medium (2i)
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小鼠ES/iPS细胞培养基(2i Medium)
Cellartis 2i mES/iPSC Culture Medium是一款无血清的、成分确定的细胞培养基,可用于小鼠ES和iPS细胞建系。该培养基含有两种小分子抑制剂(基于2i技术:CHIR99021、PD0325901),分别是用于抑制GSK3β和ERK/MEK介导的分化诱导信号通路,以及促进细胞增殖。
单独使用Cellartis 2i mES/iPSC Culture Medium,可以长期维持小鼠ES细胞处于原始状态和基态(Naive, ground state)或者小鼠iPS细胞处于完全多能性(Fully pluripotent)的状态。添加LIF(Leukemia Inhibitory Factor),可以通过调节Nanog信号通路使得Partial-iPS细胞或Pre-iPS细胞有效转化为具有完全多能性的iPS细胞(Silva et al. 2008; Silva et al. 2009).
2i技术也应用于从难获得具有生殖系能力(germline-competent)ES细胞的小鼠品系中建立ES细胞系(Nichols et al. 2009),以及用于从人类和家畜物种中诱导iPS细胞(Wang et al. 2011; Malaver-Ortega et al. 2012)。
 
■ 产品特点
· 成分确定、无血清,促进细胞增殖并维持多能性状态
· 通过添加小分子抑制剂来阻断GSK3β和 ERK/MEK介导的分化诱导通路,并维持小鼠ES细胞和iPS细胞长期具备生殖系能力
· 添加 LIF,使Partial-iPS细胞或Pre-iPS细胞有效转化为具有完全多能性的iPS细胞
 
■ 产品应用
· 建立小鼠ES细胞系和iPS细胞系
· 长期维持纯的ES细胞或iPS细胞
· 使Partial-iPS细胞或Pre-iPS细胞转化为具有完全多能性的iPS细胞(需添加 LIF)
 
■ 产品组成
· 1 bottle (200 ml) of Cellartis mES/iPSC Culture Basal Medium
· 1 tube (200 μl) Cellartis 2i mES/iPSC Supplement
 
 
■ 产品详情请点击:Mouse ES and iPS cell culture medium (2i)
 
■ 参考文献
1. Malaver-Ortega, L. F. et al. The state of the art for pluripotent stem cells derivation in domestic ungulates. Theriogenology 78, 1749–1762 (2012).
2. Nichols, J. et al. Validated germline-competent embryonic stem cell lines from non-obese diabetic mice. Nat. Med15, 814–818 (2009).
3. Silva, J. et al. Promotion of reprogramming to ground state pluripotency by signal inhibition. PLoS Biol. 6, e253 (2008).
4. Silva, J. et al. Nanog is the gateway to the pluripotent ground state. Cell 138, 722–37 (2009).
5. Wang, W. et al. Rapid and efficient reprogramming of somatic cells to induced pluripotent stem cells by retinoic acid receptor gamma and liver receptor homolog. PNAS 108, 18283–18288 (2011).
 

Mouse ES and iPS cell culture medium (3i)酶试剂盒Takara Clontech

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Mouse ES and iPS cell culture medium (3i)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Cellartis Y40011 Cellartis® 3i mES/iPSC Culture Medium 200 ml ¥4,226 Mouse ES and iPS cell culture medium (3i) Mouse ES and iPS cell culture medium (3i) Mouse ES and iPS cell culture medium (3i)
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小鼠ES/iPS细胞培养基(3i Medium)
Cellartis 3i mES/iPSC Culture Medium是一款无血清的、成分确定的细胞培养基,可用于小鼠ES细胞的建系、多能性维持和增殖培养。该培养基含有三种小分子抑制剂(基于3i技术:ERK/MEK inhibitor、GSK3β inhibitor、FGFR-TK inhibitor),用于抑制分化诱导信号通路和促进细胞增殖,以及可以在无需额外添加细胞因子刺激的情况下维持多能性基态(Pluripotent ground state)。因此,Cellartis 3i mES/iPSC Culture Medium可以应用于多能性分子机制研究和分析。
Cellartis 3i mES/iPSC Culture Medium也应用于从标准条件下难建立ES细胞的小鼠品系中建立ES细胞系(Ying et al. 2008)。相较于LIF(Leukemia Inhibitory Factor)+血清或BMP(Bone Morphogenetic Protein)条件下培养的小鼠ES细胞,使用Cellartis 3i mES/iPSC Culture Medium培养的小鼠ES细胞可以持续地以双倍速度扩增 (Ying et al. 2008; Kiyonari et al. 2010; Iijima et al. 2010)。此外,同样与LIF+血清或BMP条件下培养的小鼠ES细胞相比,使用Cellartis 3i mES/iPSC Culture Medium培养的小鼠ES细胞表现出更高的多能性克隆形成效率(Clonogenicity)。
 
■ 产品特点
· 成分确定、无血清、无饲养层、无细胞因子
· 通过添加小分子抑制剂来抑制分化诱导通路并维持小鼠ES细胞处于多能性状态
· 支持小鼠ES细胞增殖并维持≥99%纯度
 
■ 产品应用
· 维持小鼠ES细胞处于多能性状态
· 从难建系的小鼠品系中制备小鼠ES细胞
· 高效制备具有完全多能性的小鼠ES细胞
 
■ 产品组成
· 1 bottle (200 ml) of Cellartis mES/iPSC Culture Basal Medium
· 1 tube (200 μl) of Cellartis 3i mES/iPSC Supplement
 
 
■ 产品详情请点击:Mouse ES and iPS cell culture medium (3i)
 
Cellartis 3i mES/iPSC Culture Medium维持小鼠ES细胞处于同质化、未分化状态。
Mouse ES and iPS cell culture medium (3i)
小鼠ES细胞系ES-E14TG2a分别使用Cellartis 3i mES/iPSC Culture Medium(A)和 GMEM-based medium(B)培养,通过碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase, AKP)染色检测ES细胞多能性,左边为染色前,右边为AKP染色后结果,可以看出Cellartis 3i Medium培养的小鼠ES细胞为均一的、未分化细胞。
 
Cellartis 3i mES/iPSC Culture Medium培养建立的小鼠ES细胞系具备高嵌合率。
Mouse ES and iPS cell culture medium (3i)
将ES细胞注射并植入胚胎后,通过出生小鼠个体的毛色来判断ES细胞的嵌合率。从Cellartis 3i medium培养建立的ES细胞所获得的小鼠均为黑色毛,即在单代内就获得了完全是ES细胞来源的嵌合体小鼠(A),具备高嵌合率。而从常规培养基培养建立的ES细胞所获得的嵌合体小鼠毛色混杂,未完全嵌合(B)。
 
■ 参考文献
1. Ying, Q. L. et al. The ground state of embryonic stem cell self-renewal. Nature 453, 519–23 (2008).
2. Kiyonari, H. et al. Three inhibitors of FGF receptor, ERK, and GSK3 establishes germline-competent embryonic stem cells of C57BL/6N mouse strain with high efficiency and stability. Genesis 48, 317–327 (2010).
3. Iijima, S. et al. Effect of different culture conditions on establishment of embryonic stem cells from BALB/cAJ and NZB/BINJ mice. Cell Reprogram. 12, 679–688 (2010).
 
 

iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System酶试剂盒Takara Clontech

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iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Cellartis Y50300 MiraCell® iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation Kit 1 Kit ¥13,273 iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System
Cellartis Y50301 MiraCell® iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation Kit with DEF-CS 500 Culture System 1 Kit ¥18,627 iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System
Cellartis Y50053 MiraCell® EC Culture Medium 500 ml ¥4,148 iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System
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iPS向血管内皮细胞定向分化系统
(iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System)
MiraCell iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation Kit用于人iPS细胞向血管内皮细胞定向分化诱导,试剂盒中包含2种包被剂、2种分化用基础培养基和6种培养基添加剂,足够支持1个T25培养瓶 (1.5×105 Cells)或3个6孔板单孔(1.8×105 cells)的iPS细胞进行内皮方向分化诱导,分化周期为12天(Day0至Day11)。建议分化起始的iPS细胞先使用Cellartis® DEF-CS 500 Culture System(Y30010)驯化3-5代,以确保iPS细胞处于良好的多能性状态。
诱导分化获得的高纯度(CD31阳性率>80%*)血管内皮细胞,经鉴定表达CD31、CD144、Tie2、VEGFR2等血管内皮标志物和具备小管(Tube)形成能力。分化好的血管内皮细胞(Day12以后)可以使用MiraCell EC Culture Medium(Y50053)长期扩大培养,也可以冷冻保存备用。(*起始的人iPS细胞株不同,得到的血管内皮细胞性能可能不同。)
 
本产品使用京都大学iPS细胞研究所开发的人血管内皮细胞的制备技术,由Takara和iHeart Japan公司共同研发,由Takara制造并销售。
 
■ 产品特点
· 完整的试剂盒,支持人iPS细胞-中胚层细胞-血管内皮细胞定向分化
· 多个iPS细胞株测试验证,支持高效分化诱导(>80%)
· 无需基因修饰和药物筛选过程,操作简便
· 获得的血管内皮细胞,可冷冻保存和扩大培养
 
■ 产品组成
MiraCell® iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation Kit,Y50300
· Coating Reagent 1 (Day0 & 2);Coating Reagent 2 (Day11)
· EC Differentiation Basal Medium 1 (Day3~9);EC Differentiation Basal Medium 2 (Day11)
· Supplement 1 (Day3);Supplement 2 (Day4);Supplement 3 (Day7);Supplement 4 (Day8);Supplement 5 (Day9);Supplement 6 (Day11)
 
iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System
 
MiraCell® iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation Kit with DEF-CS 500 Culture System,Y50301
· MiraCell® iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation Kit,Y50300
· Cellartis® DEF-CS 500 Culture System,Y30010
 
iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System
 
■ 实验例
iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System
图1. 3种人iPS细胞株使用MiraCell iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation Kit分化诱导,获得的血管内皮细胞的形态比较(A)和标志蛋白质(B)比较。
 
iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System
图2. 3种人iPS细胞株使用MiraCell iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation Kit分化诱导,获得的血管内皮细胞继续使用MiraCell EC Culture Medium维持培养,可长时间维持高纯度。()内的数值表示Day32的细胞扩大倍数,以Day8的细胞数为1。
 
iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System
图3. 冷冻保存的、使用MiraCell iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation Kit分化诱导的血管内皮细胞(Day16),在解冻复苏培养Day8后的小管形成实验结果。
 
 
 
产品详情请点击:http://catalog.takara-bio.co.jp/product/basic_info.php?unitid=U100009383
 
 

Human iPS Cell Editing Systems酶试剂盒Takara Clontech

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Human iPS Cell Editing Systems
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Cellartis Y30021 Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit 1 kit ¥7,860 Human iPS Cell Editing Systems Human iPS Cell Editing Systems Human iPS Cell Editing Systems
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无标题文档

 
从开始到结束:人iPS细胞基因编辑和单细胞克隆系统
Start-To-Finish hiPSC Editing and Single-Cell-Cloning Systems
人诱导多能干细胞(Human induced pluripotent stem cells,hiPSCs)是一个功能强大的研究工具和疾病模型,因为其具备增殖、自我更新、分化为多种细胞类型的能力。此外,人iPS细胞还可以再现细胞来源个体的疾病表型和基因型。将人iPS细胞结合基于CRISPR/Cas9的基因编辑技术,可以在同基因的细胞系中研究特定基因改变引起的功能影响,因为基因编辑过的人iPS细胞能提供可再生的、无遗传变异的患病细胞和健康细胞资源。
CRISPR/Cas9系统已经成为一个强大的基因编辑工具,因为其高的靶向特异性,编辑效率和易用性。该技术的强大主要源于它的简单,因为全部只需要一个Cas9核酸酶结合一个单链向导RNA(single guide RNA,sgRNA) 就可以决定靶向特异性(Jinek et al. 2012)。这种RNA编程的(RNA-programmable)方法利用了非同源末端连接(non-homologous end joining,NHEJ) DNA修复途径的易错特性,进而产生基因敲除(通过插入/删除)。这种方法也可以通过同源重组(homology-directed repair,HDR)途径被用于基因敲入。
 
CRISPR/Cas9系统的组件可以通过多种方法成功导入至靶细胞,包括基于载体的表达系统,RNA转染, 导入Cas9/sgRNA核糖核蛋白(ribonucleoprotein,RNP)复合物(Sander and Joung 2014)等。与基于载体的方法相比,直接导入Cas9/sgRNA RNPs提供了一种快速转入基因编辑实验的方法,同时脱靶效应的可能性更小(Kim et al. 2014)。
 
一旦Cas9/sgRNA RNP复合物被导入,为了分离和筛选感兴趣的基因型,单细胞必须被分离并扩增为克隆细胞系。传统上,从基因编辑的hiPS细胞建立一个克隆群是低效的、具有挑战性的和耗时的,因为hiPS 细胞是以集落生长和传代的。通常,这会导致细胞死亡和提前分化。然而,Cellartis单细胞克隆系统包含一个成分确定的培养系统(由基础培养基,包被剂,和添加剂组成),用于有效形成单细胞克隆和扩增基因编辑后的hiPSC克隆。DEF-CS culture system (Asplund et al. 2016)是一个基于单层培养的系统,规避了集落状培养带来的挑战,允许单细胞传代和促进接种的单细胞存活和后续扩增。
 
Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021) 是一个完整的,在无饲养层和成分确定条件下,用于hiPSCs有效扩增和扩大生产的系统。试剂盒包含了从接种单细胞至96孔板到扩增至48孔板过程中所有必要的试剂。单细胞克隆扩增后,hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)继续培养。
 
关联基因编辑系统:
一、电穿孔法基因编辑
通过电穿孔的方法对hiPSCs进行有效的基因编辑,Takara提供重组Cas9蛋白质和产生大量sgRNAs所有必要的试剂,用于电穿孔hiPSCs。后续与Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021)一起使用,用于进行基因编辑后的单细胞克隆形成和扩增。单细胞克隆扩增后,hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)继续培养。
二、Gesicle法基因编辑
Gesicles法是一种无毒的、高效的、替代电穿孔的方法,不依赖昂贵的设备或耗材。通过Gesicle法导入Cas9/sgRNA复合物进行有效的基因编辑,Takara提供所有的必要试剂用于产生细胞衍生的纳米囊泡(Gesicles),来转导Cas9和sgRNA至hiPSCs。后续可与Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021)一起使用,用于进行基因编辑后的单细胞克隆形成和扩增。单细胞克隆扩增后,hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)继续培养。
 
■ 产品特点
· Highly efficient gene editing in hiPSCs—use either electroporation or gesicles to deliver Cas9 protein and sgRNA with no genomic integration and reduced off-target effects
· Superior single-cell survival—edited hiPSCs exhibit high (typically ~50%) survival when seeded as single cells in a 96-well plate
· Maintenance of pluripotency after editing and during single-cell cloning—hiPSCs maintain high levels (>90%) of pluripotency markers Oct-4, TRA-1-60, and SSEA-4
· Stable karyotype from start to finish—maintain a normal and stable karyotype throughout editing, single-cell cloning, and expansion
· Flexibility to perform gene editing experiments your way—choose from complete kits that provide editing and single-cell cloning solutions using either electroporation-based or utilize the culture media kit (Code No. Y30021) to perform efficient single-cell cloning following your own editing experiments
· Continuous use of DEF-CS technology throughout gene editing/single-cell cloning experiments—use the Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010) before and during gene editing experiments, then during scale-up after single-cell cloning experiments
 
■ 产品组成
Cellartis® iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit
(Code No. Y30021,1 kit)
· Cellartis DEF-CS 500 Basal Medium (Code No. Y30011; 500 ml)
· Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS COAT-1 (Code No. Y30018; 2 × 800 μl)
· Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Additives
   (Code No. Y30019; 2 × 750 μl, 1 × 500 μl, 1 × 500 μl)
 
关联基因编辑产品
电穿孔法基因编辑
Guide-it™ sgRNA In Vitro Transcription Kit (632635; 1 kit)
Guide-it™ Recombinant Cas9 (Electroporation-Ready) (632641; 100 μg)
Gesicle法基因编辑
Guide-it™ CRISPR/Cas9 Gesicle Production System (632613;1 kit)
 
■ 产品应用
· CRISPR/Cas9-mediated gene editing of hiPSCs
· Single-cell cloning of hiPSCs
· Disease modeling
 
■ 参考文献
Asplund, A. et al. One Standardized Differentiation Procedure Robustly Generates Homogenous Hepatocyte Cultures Displaying Metabolic Diversity from a Large Panel of Human Pluripotent Stem Cells. Stem Cell Rev. Reports 12, 90-104 (2016).
Jinek, M. et al. A Programmable Dual-RNA-Guided DNA Endonuclease in Adaptive Bacterial Immunity. Science 337, (2012).
Kim, S., Kim, D., Cho, S. W., Kim, J. & Kim, J.-S. Highly efficient RNA-guided genome editing in human cells via delivery of purified Cas9 ribonucleoproteins. Genome Res. 24, 1012-9 (2014).
Sander, J.-D. & Joung, J.-K. CRISPR-Cas9 systems for genomic editing, regulation and targeting. Nat. Biotechnol. 32, 347-55 (2014).
 
■ 产品详情请点击:Human iPS Cell Editing Systems
 
 
 
Human iPS Cell Editing Systems
Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) growing in DEF-CS medium were edited with Cas9 and sgRNA specific to CD81. Pluripotency is maintained in edited human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) that have been seeded as single cells. 12 clonal lines created from single-seeded hiPSCs exhibit high levels of Oct-4 (97-99%), TRA-1-60 (98-99%), and SSEA-4 (98-99%).
  (图片来源于Takara Bio USA, Inc.)
 
 
 

Human iPS Cell Generation™ All-in-One Vector酶试剂盒Takara Clontech

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Human iPS Cell Generation All-in-One Vector
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□ 浓度 0.5 μg/μl
     
□ 贮存溶液  
     Tris-HCl (pH 8.0) 10 mM
     EDTA 1 mM
Limited Use Label License: [L44]
 
■ 制品说明
本制品是制备Human iPS细胞诱导用逆转录病毒所使用的载体。在高效、高表达逆转录病毒载体pDON-5 DNA(Code No.: 3658)上,插入了iPS细胞诱导用基因OCT3/4SOX2KLF4LIN28NANOG,各基因以Thosea asigna virus 的2A*1序列连接在一个载体上。本载体与Retrovirus Packaging Kit Ampho(Code No.: 6161)中的pGP Vector以及pE-ampho Vector共转染至逆转录病毒制备用细胞G3T-hi(Code No.: 6163)后,可以制备iPS诱导用逆转录病毒。如此制备的重组逆转录病毒由于和RetroNectin®(Recombinant Human Fibronectin Fragment)(Code No.: T100A/B)有高亲和性,所以在向目的细胞中导入基因时,使用经RetroNectin®处理后的培养皿或平板,可以得到较高的基因导入率,有效提高iPS细胞的诱导效率。
*1 5种基因转录在同一个mRNA上,翻译时在2A序列的特定位点被分割,使5种蛋白质可以等量表达。
 
■ 保存
-20
 
■ 各载体的遗传信息
  基因名   GenBank Accession No.
  OCT4   NM_002701.4
  SOX2   NM_003106.2
  KLF4   NM_004235.3*2
  LIN28   NM_024674.4
  NANOG   NM_024865.2
*2 更新的NM_004235.4中,CDS的5’端追加了对应9个氨基酸的碱基。本制品的KLF4基因中不含N端的这9个氨基酸的序列,已经确认可以有效诱导iPS细胞。
 
■ 载体图谱
Human iPS Cell Generation™ All-in-One Vector