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Capturem™ Extracellular Vesicle Isolation Kit酶试剂盒Takara Clontech

发表于2024年11月15日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理Takara Clontech酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

Capturem™ Extracellular Vesicle Isolation Kit
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	635741	Capturem™ Extracellular Vesicle Isolation Kit (Mini)	20 Minipreps	￥7,005
Clontech	635748	Capturem™ Extracellular Vesicle Isolation Kit (Maxi)	8 Maxipreps	￥9,640

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■ 产品概述

本制品是基于Capturem新型膜技术的一次性使用离心柱，可在30 min内实现血浆等多种生物体液样品中细胞外囊泡（EVs）的简单快速提取。其基本原理是根据EVs的生化性质，选择与其特异性结合的凝集素（非抗体）固定于Capturem™膜上，进而对EVs进行提取，产物纯度高、污染少。

■ 产品特点

· 适用范围广— 可应用于全血、血浆、血清、唾液、尿液、脑脊液、母乳、细胞培养上清液等多种生物体液样品中的EVs提取 · 快速、重复性好– 30 min内即可从最高850 μl（Mini）或24 ml（Maxi）生物体液样品中快速提取EVs，不同操作者也可获得具有重复性的EVs收量 · 收量高— EVs最高收量可达1010（Mini）或1011（Maxi），可获得足够的exosomal RNA应用于下游的RT-qPCR、 NGS等研究 · 纯度高— 提取的EVs经Western Blot检测表达exosome蛋白质，而不表达nonexosomal污染蛋白质，如calnexin和 albumin · 完整性好– 基于凝集素的提取原理，EVs不易被破坏，TEM下观察呈经典形态 · 简单易用— 试剂盒组分配备齐全，包含一次性的预清洁柱，一次性的离心柱，以及平衡、洗涤和洗脱缓冲液，且经过优化，操作简便

■ 操作流程

注：1. *过滤步骤使用100-kDa MWCO的过滤装置，过滤时间取决于样品的类型和体积。     2. 本制品最大载样量约为1010 EVs/column（Mini）或1011 EVs/column（Maxi），多次上样收量也不会超过最大值。

■ 实验例

实验例 1

与超速离心法相比，本制品分离得到的EVs浓度和纯度更高。分别使用本制品和超速离心法从500 μl血浆样品中分离EVs，进行三次重复性实验，使用Nanoparticle tracking analysis (NTA) 检测。每种方法的粒径分布计算以平均值（黑线）和标准误差（红线）显示。结果显示，本制品提取的EVs平均粒径大小为81 nm（D90=110 nm），超速离心法提取的EVs平均粒径大小为135 nm（D90=203 nm）。上图可见，使用本制品提取的EVs具有更窄的粒径分布范围，且稳定性更好。

实验例 2

使用本制品成功地从不同生物体液样品中提取EVs。上图NTA结果显示，本制品可以应用于多种生物体液样品的EVs提取，如母乳、唾液、脑脊液、血清、尿液、条件培养基。每种方法的粒径分布计算以平均值（黑线）和标准误差（红线）显示。

实验例 3

对使用本制品与超速离心法提取的EVs中的目的蛋白质进行Western blot分析。结果显示，与超速离心法相比，本制品提取的EVs包含更多的exosome特异性标记物CD63、CD9和Alix，而non-exosome蛋白质（calnexin和albumin）含量较少。因此，本制品提取的EVs纯度更高、污染蛋白质更少。

实验例 4

与超速离心法相比，使用本制品提取的EVs，可获得更高的RNA收量。使用Capturem EV kit（Mini）从50 μl血浆中提取的EVs可以获得约100 pg/μl的RNA，而使用超速离心法，至少需要300 μl血浆才能获得同样收量的RNA。而使用Capturem EV kit（Maxi）从大量样本中提取的EVs，也可以获得稳定的RNA收量。

实验例 5

使用本制品提取的EVs，可获得足够的RNA用于下游RT-qPCR实验。本实验例是对Capturem分离的EVs进一步提取RNA再进行miRNA筛选。 首先使用PrimeScript RT Master Mix（Perfect Real Time）将RNA反转录为cDNA，然后使用Takara PreAmp Master Mix进行预扩增。应用SmartChip Real Time PCR系统对所得cDNA库进行1,200个miRNA靶标筛选，结果检测到108个miRNA，对表达量前8的miRNA进行了芯片外验证，结果显示miR-548w，miR-496，miR-744-3p，miR-660-3，miR-3167和miR-376A-3p在分离的EVs样品中拷贝数最高，其中很多microRNA已被验证过在血浆来源的EVs中表达量较高。本实验例表明，Capturem分离的EVs包含足够的RNA可用于下游的RT-qPCR实验。

实验例 6

使用本制品提取的EVs，可获得足够的RNA用于下游NGS实验。以本制品提取的EVs中的RNA为样本，使用SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v2 – Pico Input Mammalian进行NGS建库。Bioanalyzer trace表明构建了良好且统一的文库，后续的测序表明，构建得到的NGS文库基因覆盖度良好。

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protein G原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术酶试剂盒Takara Clontech

发表于2024年10月20日由上海金畔生物科技有限公司

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protein G原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	635725	Capturem™ Protein G Miniprep	10 Columns	￥2,545 ￥2,036
Clontech	635726	Capturem™ Protein G 96-Well Plate	1 × 96-well plate	￥5,499
Clontech	635727	Capturem™ Protein G Maxiprep	6 Columns	￥3,803
Clontech	635732	Capturem™ Protein G 24-Well Plate	1 × 24-well plate	￥5,777 ￥4,622
Clontech	635745	Capturem™ Protein G 24-Well Plate – HC	1 × 24-well plate	￥7,788
Clontech	635744	Capturem™ Protein G 24-Well Plate – HC	4 × 24-well plate	￥26,358

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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■ 产品简介 Capturem™ Protein G 系列产品是基于Protein G* 原理，结合新型膜技术的一次性抗体纯化柱，特别适用于单克隆抗体和多克隆抗体的小量快速纯化和筛选。室温下操作即可，小量纯化仅需5 min，因此无须担心抗体的降解或失活。Capturem™ 系列产品以高性能的尼龙膜为介质并对其进行改造，增加了膜孔表面积，对抗体的结合能力≥75 mg/cm3。产品最突出的特点是柱床体积小，可在室温下操作，纯化简单快速，可实现抗体的高浓度、高纯度纯化。产品有小量（miniprep）、中量（maxiprep）以及高通量（24 well、96 well）四种规格可供选择。 *Protein G是来源于Staphylococcus aureus的细胞壁蛋白质，与许多物种（人、大小鼠等）的单克隆或多克隆IgG型抗体分子的Fc段有高亲和性。本制品使用的是重组protein G，去掉了白蛋白结合结构域、细胞壁和细胞膜结合结构域，从而提高了与抗体Fc片段的结合特异性。   ■ 产品特点 · 快速方便：从上样到洗脱，室温下操作小量纯化仅需5 min，无需上样后孵育 · 结合力强：膜与抗体的结合能力≥75 mg/cm3 · 高质量：样品停留时间短，从而有效地防止了抗体降解及失活，保障了下游应用的成功率 · 高纯度、高浓度：柱床体积小，带入污染少，可实现大体积洗涤，小体积洗脱 · 高灵活性：可从广泛来源的样品中纯化多种类型的抗体，如动物血清、腹水、细胞培养基等 · 一次性使用：有效减少样品间的交叉污染，单孔的纯化产量因样品类型、物种以及抗体同种型的不同而有所差别。 注：Capturem™ Protein G 24-Well Plate-HC（Code No. 635745/635744）经过优化，与旧版本产品（Code No. 635732）相比，收量更高   ■ Capturem™ 膜原理   ■ 操作流程   ■ 产品主要参数     Capturem™ Protein G Miniprep Capturem™ Protein G Maxiprep Capturem™Protein G 24-Well Plate-HC Capturem™Protein G 96-Well Plate 包装量 10次 6次 24 well 96 well 样品上样量*1 100～800 μl 2～20 ml 0.5～4.3 ml/well 200～1,000 μl/well 操作时长 5 min 15 min 15 min 15 min 收量*2 60 μg protein/column 1.2 mg protein/column 600 μg*3 protein/well 60 μg protein/well 洗脱液使用量 100-300 μl 0.5-1.5 ml 1.8 ml 100-300 μl   *1. 样品与binding buffer的稀释比例为1:2～1:15。建议杂交瘤样品1:2～1:4稀释，血清样品1:15稀释。 *2. 收量多少取决于样品的类型、物种以及抗体同种型（isotype）。 *3. 这是在HEK293细胞上清液中添加1 mg小鼠IgG1时获得的收量。   ■ Protein A和Protein G对于不同来源和亚型抗体的亲和性 Species Antibody subtype Protein A Protein G Protein A/G Human Total lgG +++ +++ +++ lgG1 +++ +++ +++ lgG2 +++ +++ +++ lgG3 + +++ +++ lgG4 +++ +++ +++ lgM + – + lgD – – – lgA1 + – + lgA2 + – + Fab + + + scFv + – + Mouse Total lgG +++ +++ +++ lgM – – – lgG1 + ++ ++ lgG2a +++ +++ +++ lgG2b +++ +++ +++ lgG3 +++ +++ +++ Rat Total lgG + ++ ++ lgG1 + ++ ++ lgG2a – +++ +++ lgG2b – + + lgG2c +++ +++ +++ Rabbit Total lgG +++ +++ +++ +++ strong binding ++ medium binding + weak binding – no binding   ■ 各试剂盒组成   Capturem™ Protein G Miniprep（635725） Miniprep Column      10个   Capturem™ Protein G Maxiprep（635727） Maxiprep Column      6个   Capturem™ Protein G 96-Well Plate（635726） 96 well plate          1块   Capturem™ Protein G 24-Well Plate（635732） 24 well plate          1块   Capturem™ Protein G 24-Well Plate-HC（635745） 24 well plate          1块   Capturem™ Protein G 24-Well Plate-HC（635744） 24 well plate          4块   【注】由于Capturem Protein G系列产品不包含buffer和收集管，请按以下建议配制buffer和准备材料。 1. 纯化buffer 本制品可搭配使用磷酸盐、柠檬酸盐缓冲液等抗体纯化常用试剂。标准的buffer配方请参考说明书中内容，需要注意的是，buffer的盐浓度和pH值对纯化抗体的收量和纯度的影响会因抗体的同种型不同而不同。 2. 收集tube/plate 使用Miniprep产品进行1次纯化，需要额外准备4个2 ml tube 使用Maxiprep产品进行1次纯化，需要额外准备4个50 ml tube 使用96 well产品进行1次纯化，需要额外准备4个96 well collection plate 使用24 well产品进行1次纯化，需要额外准备4个24 well collection plate     更多产品信息请点击：

Capturem™ Trypsin （质谱级）酶试剂盒Takara Clontech

发表于2024年5月23日由上海金畔生物科技有限公司

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Capturem™ Trypsin （质谱级）
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	635737	Capturem™ Trypsin 96-Well Plate (Mass Spectrometry Grade)	1 × 96-Well Plate	￥6,030
Clontech	635736	Capturem™ Trypsin 96-Well Plate (Mass Spectrometry Grade)	4 × 96-Well Plates	￥21,610
Clontech	635739	Capturem™ Trypsin Activation Buffer	50 ml	￥629
Clontech	635740	Capturem™ Trypsin Miniprep Kit (Mass Spectrometry Grade)	20 Rxns	￥3,213

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■ 产品简介

Capturem™ Trypsin能在室温下快速、高效并且完整的酶解消化蛋白质用于质谱分析，与需要4小时甚至过夜的传统蛋白质酶解消化操作流程相比，可以使蛋白质组学分析流程更加连贯、流畅。本制品基于新型Capturem™ 膜技术，膜上固定trypsin（猪胰腺来源，且经过还原甲基化修饰，稳定性和抗自溶能力都显著增强），有小型离心柱以及96孔板的形式可供选择，能在短短几分钟内完成独立或高通量样品的蛋白质酶解消化，不需要溶液法的长时间孵育（长时间孵育易造成蛋白质的氧化或非特异性修饰，最终导致鉴定困难并且重复性低），并且自溶片段很少，效率更高。此外，使用小离心柱或plate的方法操作速度快，更能避免溶液法易出现的过度酶解消化的情况。每个小离心柱或96 well plate的单孔最大上样量为80 μg的蛋白质或25 μg的抗体。

■ 产品特点

·操作快速，步骤简单，Miniprep产品4 min内即可在室温下酶解蛋白质样品，无需过夜处理 ·比溶液法效率更高，酶解更彻底，且不易出现过度酶解 ·Trypsin经过修饰稳定性更高，样品中自溶片段更少，蛋白质非特异性修饰几率更低 ·可以使整个蛋白质组学分析流程更加连贯，实现更有效的肽和蛋白质的质谱鉴定 ·有独立的小型离心柱和高通量的96 well plate形式可供选择，满足不同的实验需求

* 4 × 96-Well Plates包装的产品不包含Activation Buffer，需要搭配购买635739或自行配制，每个plate需要搭配使用25 ml Activation Buffer

■ 操作流程

Capturem™ Trypsin消化流程。 在用活化buffer激活Capturem™ Trypsin后，将天然状态或经变性处理的样品溶液（50-800 μl）加入孔中，通过2 min的离心使样品过柱。在柱上进行胰蛋白酶消化，随后肽片段再次进行2 min的离心洗脱。与传统溶液法需要过夜消化的时长相比，Capturem™ Trypsin进行完全的抗体消化仅需3-6 min。*本流程不包括变性/还原/烷基化的时间。

■ 产品应用

·蛋白质鉴定 ·蛋白质组学分析 ·质谱样品制备 ·抗体鉴定

■ 实验例

在天然条件下用Capturem™ Trypsin消化80 μg的肌红蛋白（Apo）的HPLC图谱。由图可见，Capturem™ Trypsin酶解消化的产物具有很高的重复性。

对使用Capturem™ Trypsin消化的SILuLite进行定量。Trypsin离心法消化SILuLite可产生ng级别（1, 10, 50 ng）的可检测替代肽段。特异性肽段的AUCs具有线性相关性。

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镍离子快速纯化柱—Capturem™ 膜技术酶试剂盒Takara Clontech

发表于2024年4月27日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理Takara Clontech酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

镍离子快速纯化柱—Capturem™ 膜技术
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	635710	Capturem™ His-Tagged Purification Miniprep Kit	20 Purifications	￥2,545 ￥2,036
Clontech	635713	Capturem™ His-Tagged Purification Maxiprep Kit	6 Purifications	￥3,316 ￥2,653
Clontech	635715	Capturem™ His-Tagged Purification Maxiprep Columns	25 Columns	￥7,311
Clontech	635719	Capturem™ His-Tagged Purification Maxiprep Columns	50 Columns	￥13,160
Clontech	635714	Capturem™ His-Tagged Purification 96	96 well	￥4,691 ￥3,753
Clontech	635724	Capturem™ His-Tag Large Volume	4 Purifications	￥5,462 ￥4,370
Clontech	635730	Capturem™ His-Tagged Purification 24-Well Plate	24 well	￥4,888 ￥3,910

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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■ 产品简介

Capturem™ His-Tagged Purification Kit是以镍离子为配基，结合Capturem™ 新型膜技术开发的用于His标签蛋白质快速分离纯化的产品。与传统的固定化金属离子树脂相比，Capturem™ 系列产品以高性能的尼龙膜为介质并对其进行改造，增加了膜孔表面积，对His标签蛋白质的结合能力≥75 mg/cm3。产品最突出的特点是柱床体积小，可在室温下操作，纯化简单快速，比传统树脂的应用范围更加灵活广泛。有小量（miniprep）、中量（maxiprep）、大量（large volume）以及高通量（24 well和96 well）五种规格可供选择。

■ 产品特点

· 室温下操作，可应用于哺乳动物细胞和细菌样品 · 操作简单快速，蛋白质小量纯化5 min即可完成，大量纯化也仅需15-30 min · 操作时间短，有利于蛋白质样品保持活性 · 柱床体积小、带入污染少，与传统的镍离子树脂相比，产物纯度更高 · 一次性使用纯化柱，避免样品之间交叉污染 · 除了部分产品中提供的xTractor Buffer以外，还兼容其他的裂解buffer，通用性强 · 兼容多种添加剂（如β-ME、EDTA、DTT、甘油、TCEP等），可在变性或非变性条件下进行纯化

■ Capturem™ 膜原理

■ 产品主要参数

*收量多少取决于样品的类型、物种以及抗体同种型（isotype）。

上图A图红色方框部分为Capturem His-Tagged Purification Large Volume Units（白底的瓶顶装置），B图红色方框部分为滤瓶螺纹接头 (可用于33-45 mm直径的瓶口)。图A为纯化装置直接与直径为33 mm的螺纹滤瓶直接连接。图C为纯化装置通过螺纹接头连接了45 mm的滤瓶。图D为纯化装置与50 ml的tube直接连接。

上图为使用Capturem™ His-Tagged Purification Large Volume Unit从细菌裂解液中纯化过表达的6×His-GFPuv的演示示例。图A.将纯化装置与直径为33 mm的螺纹滤瓶直接连接。图B.将含有目的蛋白质的澄清裂解液上样。图C.膜在上样和洗涤操作后结合了目的蛋白质，因此呈现出绿色荧光蛋白（GFP）特征性的黄绿色，在洗脱操作之后恢复为初始的白色。图D.目的蛋白质6×His-GFPuv被洗脱进50 ml的收集tube中。

■ 操作流程

■ 实验例

实验例1

Capturem纯化柱对不同浓度的多种类添加试剂有良好的兼容性。上图为使用miniprep kit对不同种类不同浓度添加剂的检测结果，操作按照产品说明书进行。每项实验的样品、平衡液、洗涤液及洗脱液中均有所要检测的添加试剂，样品最终进行两次300 μl的洗脱操作。

兼容试剂一览表

Reagent Compatibility*   MOPS 200 mM   HEPES 200 mM   Tris 200 mM   EDTA 10 mM   Beta-mercaptoethanol 30 mM   DTT 10 mM   TCEP 5 mM   Guanidine-HCl 6 M   Urea 8 M   Nonionic detergent (Triton X-100) 2%   Nonionic detergent (Tween 20) 2%   Anionic detergent (SDS) 1%   Arginine 500 mM   Glycine 100 mM   Histidine 20 mM   Sodium chloride 2 M   Imidazole 40 mM   Glycerol 10%

* 表中数据为本产品经测试能够兼容的试剂的最高浓度。

实验例2

Capturem纯化柱在变性条件下纯化效果良好。使用miniprep kit按照产品说明书进行操作。根据变性和非变性条件添加适当的buffer，每个纯化柱上样均为800 μl表达6×his-GFPuv的细胞裂解上清液，样品中按需要添加8 M尿素或6 M盐酸胍。

实验例3

Capturem纯化柱纯化哺乳动物细胞表达的6×His标签蛋白质。图A和B，将编码6×his-tagged MAPK1或 6×his-tagged ADRB2的质粒转染293T细胞进行培养。细胞裂解后取澄清的上清液上样，然后用400 μl wash buffer洗涤，再使用300 μl elution buffer洗脱。将各步骤组分通过4-20%的聚丙烯凝胶电泳检测，并做硝酸纤维素膜印记检测。图A左图，丽春红染色显示不同组分中的所有蛋白质。图A右图，用MAPK1特异性抗体做免疫印迹实验可检测到对应条带。图B左图，丽春红染色显示不同组分中的所有蛋白质。图B右图，用ADRB2特异性抗体做免疫印迹实验可检测到产物中富集的ADRB2。图C，使用编码DsRed-Express2和6×his-tagged Metridia luciferase的双顺反子质粒转染293T细胞，在10 cm的培养皿中培养。取细胞培养上清液用maxiprep柱纯化，6 ml wash buffer洗涤，1 ml elution buffer洗脱。所有离心操作的参数为2,000×g离心5 min，最后通过Ready-to-Glow™ 对各组分中的荧光素酶的活性进行分析。

■ 各种试剂盒组成

· Capturem™ His-Tagged Purification Miniprep Kit （635710）

Capturem His-Tagged Purification Miniprep Column 20 个 xTractor Buffer 15 ml × 2 Wash Buffer 10 ml Elution Buffer 10 ml

· Capturem™ His-Tagged Purification Maxiprep Kit （635713）

Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Column 6 个 Capturem Maxiprep Filters 6 个 xTractor Buffer 200 ml Wash Buffer 40 ml Elution Buffer 15 ml

· Capturem™ His-Tagged Purification Maxiprep Columns（635715）*

Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Column 25 个

· Capturem™ His-Tagged Purification Maxiprep Columns（635719）*

Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Column 50 个

· Capturem™ His-Tagged Purification 96（635714）*

Capturem His-Tagged Purification 96-Well Plate 1 块

· Capturem™ His-Tagged Purification Large Volume（635724）*

Capturem His-Tagged Purification Large Volume Unit 4 个（每个盒子中2个） Bottle Thread Adaptor 1 个

· Capturem™ His-Tagged Purification 24-Well Plate（635730）*

Capturem His-Tagged Purification 24-Well Plate 1 块

*注：Capturem™ His-Tagged Purification 24-well、96-well、Maxiprep Columns以及Large Volume中不含buffer，请使用以下组分的buffer：

缓冲液 组成 Lysis Buffer   推荐使用xTractor Buffer（Code No. 635625），   也可使用其他标准的裂解buffer Wash Buffer   150 mM NaCl,20 mM Na3PO4,pH7.6 Elution Buffer   500 mM NaCl,20 mM Na3PO4,500 mM imidazole, pH7.6

参考文献

[1] Stephanie S. Pavlovich, Sean P. Lovett,Galina Koroleva, et al. The Egyptian Rousette Genome Reveals Unexpected Features of Bat Antiviral Immunity[J]. Cell, 2018, 173(5):1098–1100. [2] Sandra Luz Martínez-Hernández, Daniel Cervantes-García, Martín Munoz-Ortega, et al. An anti-amoebic vaccine: generation of the recombinant antigen LC3 from Entamoeba histolytica linked to mutated exotoxin A (PEDIII) via the Pichia pastoris system[J]. Biotechnology Letters, 2017, 39 (8):1149-1157. [3] Min Kong, Fengjuan Wang, Liuying Tian, et al. Functional identification of glutamate cysteine ligase and glutathione synthetase in the marine yeast Rhodosporidium diobovatum[J]. Science of Nature, 2018, 105 (1-2):4. [4] Ariana Kariminejada, Mohammadreza Barzgarb, Bita Bozorgmehra, et al. Novel mutations and a severe neurological phenotype in Sjogren-Larsson syndrome patients from Iran[J]. European Journal of Medical Genetics, 2018, 61 (3):139. [5] Naho Mugita, Takayuki Nambu, Kazuya Takahashi, et al. Proteases, actinidin, papain and trypsin reduce oral biofilm on the tongue in elderly subjects and in vitro[J]. Archives of Oral Biology, 2017, 82:233-240. [6] Xiao-Xiao Cheng, Li-Hong Zhao, Steven J.Klosterman, et al. The endochitinase VDECH from Verticillium dahliae inhibits spore germination and activates plant defense responses[J]. Plant Science, 2017, 259:12.

实验操作视频：

https://www.takarabio.com/learning-centers/protein-research/his-tag-purification/protocols/video-capturem-his-miniprep

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Capturem™ Pepsin酶试剂盒Takara Clontech

发表于2024年4月27日由上海金畔生物科技有限公司

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Capturem™ Pepsin
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	635728	Capturem™ Pepsin	20 Rxns	3,213（暂不销售）

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■ 产品简介

蛋白质质谱分析前的样品消化步骤，通常需要4个小时甚至过夜，如果使用Capturem™ Trypsin 或 Capturem™ Pepsin，可在室温下快速，高效和完全的消化蛋白质，从而使蛋白质组学分析流程更加连贯。这两款产品是一次性小型离心柱的形式，应用新型膜技术，膜上固定有胰蛋白酶（Trypsin）或胃蛋白酶（Pepsin），在短短几分钟内即可高效、完全地酶解蛋白质样品，与传统的溶液法过夜处理相比，时间更短、效率更高、重复性更好、胰蛋白酶自溶片段更少，避免发生过度消化。

■ 快速、简单的操作流程

Capturem™ Trypsin 和 Capturem™ Pepsin包含小型离心柱和活化buffer，操作流程简单、快速，只需要加入200 μl活化buffer离心1 min，然后加入蛋白质样品再离心1 min，即可洗脱获得可用于下游分析的肽段。

■ 产品特点

·操作快速，2 min-3 min内即可酶解蛋白质样品，无需过夜处理 ·比溶液法效率更高，酶解更彻底 ·样品中自溶片段更少，蛋白质非特异性修饰几率更低 ·可以使整个蛋白质组学分析流程更加连贯，实现更有效的肽和蛋白质的质谱鉴定

■ 应用

·蛋白质鉴定 ·蛋白质组学分析 ·质谱样品制备 ·抗体鉴定

■ 实验例

使用Capturem™ Trypsin对BT474全细胞裂解液进行酶解消化并做蛋白质组学分析。通过RP-HPLC将裂解液分成19个独立的组分（图A），然后再使用Capturem™ Trypsin对每个组分单独酶解，并使用LC/MS-MS分析，每个组分中带有2个或以上的特异性肽段的蛋白质总数被鉴定并绘制出，如B图所示。

使用Capturem™ Trypsin可以实现快速完全的Apomyoglobin（Apo）酶解。上图为使用RP-HPLC分析Capturem™ Trypsin和常规溶液法酶解蛋白质的结果，图A为未酶解的完整蛋白质，图B为溶液法室温酶解16 h的蛋白质，图C为使用Capturem™ Trypsin酶解1 min的蛋白质，结果显示使用Capturem™ Trypsin酶解的非常彻底。

使用Capturem™ Trypsin可以酶解紧密折叠的蛋白质Myoglobin (Myo)。使用RP-HPLC对Capturem™ Trypsin和常规溶液法酶解的产物进行分析，图A为未酶解的完整蛋白质，图B为溶液法室温酶解16 h的蛋白质，图C为使用Capturem™ Trypsin酶解1 min的蛋白质，结果显示使用Capturem™ Trypsin可以快速有效地酶解紧密折叠的蛋白质。

Capturem™ Pepsin的操作流程。在酶消化之前，抗体样品被变性和还原。使用附带的活化buffer初次活化柱子后，将还原处理后的抗体样品溶液（50-800 μl）加入离心柱中，离心1分钟。 在这个过程中，柱上发生胃蛋白酶消化，随后再一次离心洗脱即可获得肽片段，加入NaOH中和洗脱的肽片段，即可用于下游分析。

使用Capturem™ Pepsin消化不同的小鼠抗体同种型。小鼠的IgG1, IgG2a, IgG2b, 和 IgG3各取 100 μg，使用TCEP和醋酸于75℃处理15 min进行变性操作，然后用5%甲酸buffer稀释。使用Capturem™ Pepsin对稀释的样品进行消化，通过SDS-PAGE对消化和未消化的样品（各取4 μg）进行检测，如上图所示。

不同批次的Capturem™ Pepsin消化产物HPLC图谱比较。使用5%的甲酸稀释50 μg的Apo，选择3个不同批次的Capturem™ Pepsin对其进行消化，HPLC结果显示三组消化产物具有相同的片段，说明Capturem™ Pepsin具有良好的重复性。

Capturem™ Pepsin与pepsin溶液法消化结果比较。对50 μg 的anti-HER2单克隆抗体使用3种方法进行消化，分别是Capturem™ Pepsin，pepsin溶液法孵育4小时，pepsin溶液法孵育过夜。然后进行质谱分析。由上图可以看出，使用溶液法的消化产物峰左移并且总体峰的数量较多，说明产生了过度消化，而使用Capturem™ Pepsin则没有这个问题。

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