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| Capturem™ Extracellular Vesicle Isolation Kit | ||||||
| 品牌 | Code No. | 产品名称 | 包装量 | 价格（元） | 说明书 | 数量 |
| Clontech | 635741 | Capturem™ Extracellular Vesicle Isolation Kit (Mini) | 20 Minipreps | ￥7,005 |  |
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| Clontech | 635748 | Capturem™ Extracellular Vesicle Isolation Kit (Maxi) | 8 Maxipreps | ￥9,640 | |
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| ■ 产品概述 |
| 本制品是基于Capturem新型膜技术的一次性使用离心柱，可在30 min内实现血浆等多种生物体液样品中细胞外囊泡（EVs）的简单快速提取。其基本原理是根据EVs的生化性质，选择与其特异性结合的凝集素（非抗体）固定于Capturem™膜上，进而对EVs进行提取，产物纯度高、污染少。 |
| ■ 产品特点 |
| · 适用范围广— 可应用于全血、血浆、血清、唾液、尿液、脑脊液、母乳、细胞培养上清液等多种生物体液样品中的EVs提取 · 快速、重复性好– 30 min内即可从最高850 μl（Mini）或24 ml（Maxi）生物体液样品中快速提取EVs，不同操作者也可获得具有重复性的EVs收量 · 收量高— EVs最高收量可达1010（Mini）或1011（Maxi），可获得足够的exosomal RNA应用于下游的RT-qPCR、 NGS等研究 · 纯度高— 提取的EVs经Western Blot检测表达exosome蛋白质，而不表达nonexosomal污染蛋白质，如calnexin和 albumin · 完整性好– 基于凝集素的提取原理，EVs不易被破坏，TEM下观察呈经典形态 · 简单易用— 试剂盒组分配备齐全，包含一次性的预清洁柱，一次性的离心柱，以及平衡、洗涤和洗脱缓冲液，且经过优化，操作简便 |
| ■ 操作流程 |
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| 注：1. *过滤步骤使用100-kDa MWCO的过滤装置，过滤时间取决于样品的类型和体积。 2. 本制品最大载样量约为1010 EVs/column（Mini）或1011 EVs/column（Maxi），多次上样收量也不会超过最大值。 |
| ■ 实验例 |
| 实验例 1 |
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| 与超速离心法相比，本制品分离得到的EVs浓度和纯度更高。分别使用本制品和超速离心法从500 μl血浆样品中分离EVs，进行三次重复性实验，使用Nanoparticle tracking analysis (NTA) 检测。每种方法的粒径分布计算以平均值（黑线）和标准误差（红线）显示。结果显示，本制品提取的EVs平均粒径大小为81 nm（D90=110 nm），超速离心法提取的EVs平均粒径大小为135 nm（D90=203 nm）。上图可见，使用本制品提取的EVs具有更窄的粒径分布范围，且稳定性更好。 |
| 实验例 2 |
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| 使用本制品成功地从不同生物体液样品中提取EVs。上图NTA结果显示，本制品可以应用于多种生物体液样品的EVs提取，如母乳、唾液、脑脊液、血清、尿液、条件培养基。每种方法的粒径分布计算以平均值（黑线）和标准误差（红线）显示。 |
| 实验例 3 |
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| 对使用本制品与超速离心法提取的EVs中的目的蛋白质进行Western blot分析。结果显示，与超速离心法相比，本制品提取的EVs包含更多的exosome特异性标记物CD63、CD9和Alix，而non-exosome蛋白质（calnexin和albumin）含量较少。因此，本制品提取的EVs纯度更高、污染蛋白质更少。 |
| 实验例 4 |
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| 与超速离心法相比，使用本制品提取的EVs，可获得更高的RNA收量。使用Capturem EV kit（Mini）从50 μl血浆中提取的EVs可以获得约100 pg/μl的RNA，而使用超速离心法，至少需要300 μl血浆才能获得同样收量的RNA。而使用Capturem EV kit（Maxi）从大量样本中提取的EVs，也可以获得稳定的RNA收量。 |
| 实验例 5 |
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| 使用本制品提取的EVs，可获得足够的RNA用于下游RT-qPCR实验。本实验例是对Capturem分离的EVs进一步提取RNA再进行miRNA筛选。 首先使用PrimeScript RT Master Mix（Perfect Real Time）将RNA反转录为cDNA，然后使用Takara PreAmp Master Mix进行预扩增。应用SmartChip Real Time PCR系统对所得cDNA库进行1,200个miRNA靶标筛选，结果检测到108个miRNA，对表达量前8的miRNA进行了芯片外验证，结果显示miR-548w，miR-496，miR-744-3p，miR-660-3，miR-3167和miR-376A-3p在分离的EVs样品中拷贝数最高，其中很多microRNA已被验证过在血浆来源的EVs中表达量较高。本实验例表明，Capturem分离的EVs包含足够的RNA可用于下游的RT-qPCR实验。 |
| 实验例 6 |
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| 使用本制品提取的EVs，可获得足够的RNA用于下游NGS实验。以本制品提取的EVs中的RNA为样本，使用SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v2 – Pico Input Mammalian进行NGS建库。Bioanalyzer trace表明构建了良好且统一的文库，后续的测序表明，构建得到的NGS文库基因覆盖度良好。 |
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