protein A原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术酶试剂盒Takara Clontech

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protein A原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 635717 Capturem™ Protein A Miniprep 12 Columns ￥2,545
2,036(终卖) 		protein A原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术 protein A原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术 protein A原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术
Clontech 635720 Capturem™ Protein A Maxiprep 6 Columns ￥3,803
￥3,042 		protein A原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术 protein A原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术 protein A原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术
Clontech 635731 Capturem™ Protein A 24-Well Plate 1 × 24-well plate ￥5,777
￥4,622 		protein A原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术 protein A原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术 protein A原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术
Clontech 635743 Capturem™ Protein A 24-Well Plate – HC 1 × 24-well plate ￥7,788 protein A原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术 protein A原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术 protein A原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术
Clontech 635746 Capturem™ Protein A Buffer 100 ml ￥934
￥747 		protein A原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术 protein A原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术 protein A原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日 *635717从即日起停止销售，推荐使用中等规格纯化柱635720进行替代。

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■ 产品简介
Capturem™ Protein A 系列产品是基于Protein A* 原理，结合新型膜技术的一次性抗体纯化柱，特别适用于单克隆抗体和多克隆抗体的小量快速纯化和筛选。室温下操作即可，小量纯化仅需5 min，因此无须担心抗体的降解或失活。Capturem™ 系列产品以高性能的尼龙膜为介质并对其进行改造，增加了膜孔表面积，对抗体的结合能力≥75 mg/cm3。产品最突出的特点是柱床体积小，可在室温下操作，纯化简单快速，可实现抗体的高浓度、高纯度纯化。产品有小量（miniprep）、中量（maxiprep）以及高通量（24 well和96 well）四种规格可供选择。
*Protein A是金黄色葡萄球菌的表面蛋白质，对许多物种（如人、大小鼠）的IgG型抗体的Fc片段有很强的亲和力。ProteinA与抗体的结合能力根据抗体同种型（isotype）的不同而不同。
 
■ 产品特点
· 快速方便：从上样到洗脱，室温下操作小量纯化仅需5 min，无需孵育
· 一次性使用：有效减少样品间的交叉污染，受protein A性质影响，纯化抗体的产量因物种
   和抗体同种型的不同而有所差别
· 高质量：样品停留时间短，从而有效地防止了抗体降解及失活，保障了下游应用的成功率
· 高纯度、高浓度：柱床体积小，带入污染少，可实现大体积洗涤，小体积洗脱
· 高灵活性：可从广泛来源的样品中纯化抗体，如动物血清、腹水、细胞培养基等
注：Capturem™ Protein A 24-Well Plate-HC（Code No. 635743）经过优化，与旧版本产品（Code No. 635731）相比，收量更高。
 
■ Capturem™ 膜原理
protein A原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术
 
■ 产品主要参数
protein A原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术
 
* 注：Maxiprep需要50 ml tube使用的离心机，24 well、96 well 需要24孔板、96孔板使用的离心机或真空过滤装置
 
Capturem Protein A Miniprep与不同物种来源的抗体的结合能力
 
物种 亲和力 (μg/column)*
Goat 100-150
Horse >150
Human >150
Mouse 100-150
Rabbit 50-100
Rat >150
Sheep >150
 
*使用磷酸盐结合缓冲液(pH8.0)对不同物种来源的总血清进行稀释然后经Capturem Protein A Miniprep 纯化，产物的量通过测定其在280 nm处的吸光度进行计算。
 
■ Protein A和Protein G对于不同来源和亚型抗体的亲和性
Species

Antibody subtype

 Protein A Protein G Protein A/G
Human Total lgG +++ +++ +++
lgG1 +++ +++ +++
lgG2 +++ +++ +++
lgG3 + +++ +++
lgG4 +++ +++ +++
lgM + – +
lgD – – –
lgA1 + – +
lgA2 + – +
Fab + + +
scFv + – +
Mouse Total lgG +++ +++ +++
lgM – – –
lgG1 + ++ ++
lgG2a +++ +++ +++
lgG2b +++ +++ +++
lgG3 +++ +++ +++
Rat Total lgG + ++ ++
lgG1 + ++ ++
lgG2a – +++ +++
lgG2b – + +
lgG2c +++ +++ +++
Rabbit Total lgG +++ +++ +++
+++ strong binding
++ medium binding
+ weak binding
– no binding
 
■ 操作流程
protein A原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术
 
■ 产品性能
protein A原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术
 
■ 实验例
protein A原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术
从杂交瘤培养上清液中筛选Cas9的单克隆抗体。所有克隆均是小鼠IgG1同种型，所以使用高盐法进行纯化。选择Capturem™ Protein A Maxiprep，使用6 ml buffer (配方10 mM sodium borate, pH 8.9, 3 M NaCl)进行平衡，2,000 x g 离心3 min。向抗体上清原液中加入1/10体积的1 M sodium borate（pH8.9）将NaCl浓度调节至3.3 M。取20 ml上清液上样，2,000 x g 离心3 min，流出液重复上样一次，尽可能多的结合抗体。然后使用10 ml wash buffer（配方3 M NaCl, 10 mM sodium borate, pH8.9）洗涤，最后用0.5 ml的elution buffer(配方100 mM glycine, pH3.0)洗脱，收集管中需预先添加有50 μl 的中性buffer（配方1 M tris, pH8.5），使用少量elution buffer洗脱以便获得高浓度抗体产物。图A，SDS-PAGE 凝胶电泳检测纯化产物。图B，将Cas9表达量低(lane #1)和高(lane #2)的细胞裂解液分别进行凝胶电泳并转膜，再使用Capturem™ Protein A Maxiprep纯化得到的抗体对其进行免疫印迹反应。图C，使用筛选到的抗体，对不同比例稀释(从左至右: 20 ng, 10 ng, 5 ng, 2.5 ng, 1.25 ng, 0.625 ng)的Cas9 蛋白质进行免疫印迹反应
 
 
实验操作视频：
https://www.takarabio.com/learning-centers/protein-research/his-tag-purification/protocols/video-capturem-his-miniprep
 
 
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