台盼蓝染色法鉴定细胞活力原理

 正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡，这与中性红作用相反。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。

注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现  象。台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。

用品：

1. 4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。

2. 吸管、血细胞计数板、显微镜

步骤：

1、制备单细胞悬液。并作适当稀释（106 细胞/ml）

2、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。

3、计数：在三分钟内，用计数板分别计数活细胞和死细胞

结果统计：

镜下观察，死细胞被染成淡蓝色，而活细胞拒染。

根据下式求细胞活力：

活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100

注意事项：台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。

台盼蓝染色方法：

A：胎盼蓝母液∶5×生理盐水=4∶1

B：台盼蓝A液∶细胞悬液=1∶2=20 μL∶40 μL

活细胞数=稀释倍数×1.5×104×四个方框总胎盼蓝拒染活细胞数/4