上海金畔生物科技有限公司EDTA抗原修复液的使用方法及作用
抗原修复是利用化学试剂和热的作用将封闭的抗原或肽链发生扭曲的抗原重新暴露出来或修正过来的过程。EDTA抗原修复液是一种常用的抗原修复液，可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。可以有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。
在免疫组化染色后，出现假阴性、时隐时现等现象的基本原因：
1.组织在用甲醛固定的过程中所形成的醛键可封闭抗原的决定族。甲醛与组织蛋白质类的反应是多样而复杂的，因为它能和多种不同的功能基团结合，在多数情况下在其间形成桥键8。这也是甲醛的一个作用，因为它是一种聚合固定剂，因而能在相邻的蛋白质键间形成桥键的作用。
2. 甲醛在保存进程中会形成羟甲基，也可封闭抗原决定族。据French和Edsall的研究认为，最常遇到的甲醇反应，就是加到一个含反应性氢原子的化合物中，形成一个羟甲基化合物。
3.在组织固定过程中，甲醛与蛋白质发生交联，形成醛交联蛋白，这种化合物封闭了抗原，使之无法表达出来。
抗原修复的集中方法
1. 真空负压抗原修复法：
① 切片脱蜡至水。
②0.3%H2O2甲醇真空负压处理5分钟。
③自来水洗，蒸馏水洗。
④0.01M柠檬酸盐缓冲液（PH6.0），真空负压干燥箱预先调至95℃，真空负压处理10分钟。
⑤待修复注降至室温的一，PBS洗3次，随后按选好的免免疫组化染色方法进行染色。
2.微波辐射抗原修复法：
①切片脱蜡至水。
②0.3%H2O2甲醇处理10分钟。
③自来水洗，蒸馏水洗。
④ 0.01M柠檬酸盐缓冲液（PH6.0），于微波炉内微波辐射10分钟，如检测Er和Pr则需要20辐射分钟左右。
⑤待修复液降至室温后，PBS洗3次，随后按选好的免疫组化学的染色方法进行染色。
3.高压抗原修复法：
①切片脱蜡至水。
②0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。
③自来水洗，蒸馏水洗。
④切片放入抗原修复液中，边同容器放入高压锅中加热至沸腾。盖上压力阀至喷汽后持续1－4分钟。
⑤待修复液恢复至室温后，PBS洗3次，随后按选好的免疫组织化学染色方法进行染色。
4.隔水热抗原修复法：
①切片脱蜡至水。
②0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。
③自来水洗，蒸馏水洗。
④切片放入0.01M柠檬酸盐缓冲液（PH6.0）中，边同容器一起放入水溶锅中加热，其间应不断用温度计测其温度，待抗原修复液的温度达到有效温度后（92℃↑）。即开始计时，持续40分钟。
⑤待抗原修复液恢复至室温后，PBS洗3次，随后按选定好的免疫组化染色方法进行染色。
5.电炉加热抗原修复法：
①切片脱蜡至水。
②0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。
③自来水洗，蒸馏水洗。
④ 将切片放入抗原修复液中于电炉上加热，不时用温度计测量温度，当达92℃后，即可拔离电源，当温度低于92℃时，再插上电源，如此反复持续至10分钟左右。
⑤待抗原修复液降至室温后，PBS洗3次，随后按选定的免疫组化染色方法进行染色。
EDTA抗原修复液的使用方法
1. 对于石蜡切片：a. 脱蜡：二甲苯3次，每次3-5min→ 无水乙醇2次，每次3-5min→ 95％乙醇1次，3-5min→ 90%乙醇1次，3-5min→ 75％乙醇1次，3-5min→ 蒸馏水洗2次，每次3-5min。b. 抗原修复：将切片浸泡在抗原修复液(1×)中，95-100℃加热约15 min (加热时间可以控制在10-20 min内，最佳的加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索)。抗原修复液(1×)使用前需预热到95-100℃。加热可以使用普通的水浴锅，也可以使用微波炉加热。如果使用微波炉加热，需注意避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在20-30 min内冷却至室温。用免疫染色洗涤液洗涤1-2次，每次3-5 min。随后即可进行封闭等后续的免疫染色步骤。
2. 对于冰冻切片：用免疫染色洗涤液洗涤切片5 min。将切片浸泡在抗原修复液(1×)中，95-100℃加热约15 min (加热时间可以控制在10-20 min内，最佳的加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索)。抗原修复液(1×)使用前需预热到95-100℃。加热可以使用普通的水浴锅，也可以使用微波炉加热。如果使用微波炉加热，需注意避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在20-30 min内冷却至室温。用免疫染色洗涤液洗涤1-2次，每次3-5 min。随后即可进行封闭等后续的免疫染色步骤。
3. 对于其它样品的抗原修复，可以参考石蜡切片或冰冻切片的步骤进行。
EDTA抗原修复液的注意事项：
1、抗原修复时应选择最佳温度。（温度在92℃－98℃是合适的，尤其在95℃为最好）
2、抗原修复液必须遵循自然降温规律，否则效果不好或达不到抗原修复的目的。
3、抗原修复的方法，都采用加热的方法，尤其是微波辐射加热法，该法由于产热快。液体容易挥发直至干涸。因此，应用于抗原修复的液体，一定要充足，防止切片干涸。
4、用于抗原修复的切片，必须附贴牢固，否则发生掉片，则前功尽弃。
北京上海金畔生物科技有限公司科技有限公司长期备货EDTA抗原修复液（50×），其货号为C1034。抗原修复可以提高石蜡切片的免疫染色效果，亦可以不同程度的提高冰冻切片的染色效果。当冰冻切片免疫染色效果不理想时，考虑进行抗原修复。抗原修复过程可以使用上海金畔生物科技有限公司的的抗原修复盒进行操作。
