动物基因组DNA提取方法及步骤介绍

基因组DNA提取是最常见分子生物学实验之一。今天给大家介绍的是动物基因组DNA提取。DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，为了进行测序、杂交、基因表达、文库构建等实验，获得高分子量和高纯度的基因组DNA是非常重要的前提，因此基因组DNA的提取也是分子生物学试验技术中最重要、最基本的操作之一。

动物基因组DNA提取实验步骤：

1、取新鲜或冰冻动物组织块0.1g（0.5cm3），尽量剪碎。置于玻璃匀浆器中，加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块，转入1.5ml 离心管中，加入蛋白酶K （500ug/ml）20μl，混匀。在65℃恒温水浴锅中水浴30min，也可转入37℃水浴12～24h，间歇振荡离心管数次。于台式离心机以12000 rpm离心5min，取上清液入另一离心管中。

2、加2倍体积异丙醇，倒转混匀后，可以看见丝状物，用100ul 吸头挑出，凉干，用200ul TE 重新溶解。（可进行PCR反应等，需要进一步纯化的按下列步骤进行）

3、加等量的酚：氯仿：异戊醇振荡混匀，离心12000 rpm，5min。

4、取上层溶液至另一管，加入等体积的氯仿?异戊醇，振荡混匀，离心12000 rpm，5min。

5、取上层溶液至另一管，加入1/2体积的7.5mol/L乙酸氨加入2倍体积的无水乙醇，混匀后室温沉淀2min ，离心12000 rpm ,10min。

6、小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将附于管壁的残余液滴除掉。

7、用1ml 70%乙醇洗涤沉淀物1次，离心12000 rpm ， 5min。

8、小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将附于管壁的残余液滴除掉，室温干燥。

9、加200ul TE重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?C20℃保存备用。

10、吸取适量样品于GeneQuant上检测浓度和纯度。

在动物基因组DNA提取试验中要特别注意以下几点：

1、尽量简化操作步骤，缩短提取过程。

2、减少化学因素对核酸的降解。

3、减少物理因素对核酸的降解：机械剪切力和高温。

4、防止核酸的生物降解：排除核酸酶。 想要查看动物基因组DNA提取更详细信息，请点击查看上海金畔生物科技有限公司实验库： 动物基因组DNA提取 。全面介绍了本实验原理、操作步骤、注意事项等。提供全部本实验生化试剂、耗材、仪器。欢迎选购。

丙酮酸钠在细胞培养中的作用是什么

丙酮酸钠是最常见的丙酮酸盐，是一类内源性小分子物质，丙酮酸钠和丙酮酸均是天然存在于人体内，并参与全身各组织和器官的代谢。丙酮酸钠在医学上、诊断试剂以及医疗器械中被广泛用作缓冲剂、赋形剂和抗氧化剂。此外丙酮酸钠在细胞培养中也是常用到的试剂之一，那么丙酮酸钠在细胞培养中的作用是什么呢？

酮酸钠在细胞培养中的作用：

丙酮酸钠在人体日常生活中，是惹你进行代谢生命活动所必须的，它是一种能量物质，在科学研究进行的细胞培养试验中，科学研究工作人员还发现了有作用类似的物质，类似参与身体代谢活动的为人体提供行动的能量的物质还有葡萄糖，乳酸钠等，在人体中大多数细胞只利用葡萄糖就够了，在细胞培养中丙酮酸钠是必须的物质。丙酮酸钠在培养基中起到替代碳源的作用，参与细胞营养代谢。

丙酮酸钠制备：

将领取的丙酮酸在车间内放置一小时以上，将抽料管用干净的聚酯纤维布包住管口，缓缓插入桶底部，用真空将丙酮酸 280kg抽入丙酮酸钠反应罐内，抽毕，开搅拌，开搅拌，将预处理好的38~42℃碳酸钠溶液缓缓压至反应罐内（控制压力在0.03~0.06MPa），控制反应罐内温度不超过35℃（若反应过程中，温度超过35℃，应采取降温措施），反应过程中应进行pH值检测，当反应液pH值达到4.8~5.3（用精密试纸测定）时停止加料，控制加料时间约1小时，反应完毕，将1440kg 95％乙醇缓缓抽入（管口应用干净的聚酯纤维布包住）反应罐内（加入时速度应先慢后快，开始50%的量加入时间应控制在60分钟内，后50%的量加入时间控制在30分钟内），抽毕，离心甩干，放入专用不锈钢桶内送入烘房，倒入双锥真空干燥箱内，控制真空度≥－0.09Mpa，热水温度为75~80℃，真空干燥器内温上升为65℃时，记录起烘时间，控制真空干燥器内温度为65~70℃，保温2小时，自起烘2小时后，请验，干失≤0.5%，冷却约20分钟，出料，用20目过筛，包装，入库。收率应在105±5%之间。

暗夜明灯之维生素A

月黑风高夜，正是行凶时。人无影，树无形，这就是漆黑一片的黑暗世界。

今天我们不说武侠故事，不谈玄幻世界。今天来讲讲生活小常识。

（转变是不是有点生硬？请不要在意这些细节）

（额……好吧）

是什么小常识呢？了解什么呢？

维生素A（V8090-Jinpanbio），一种维生素，是最早被发现的维生素。从植物和动物中都能获取。

那获取维生素A又有什么好处呢？

那我们先来了解一下缺乏维生素A有什么危害吧！

“人体缺乏维生素A，影响暗适应能力，如儿童发育不良、皮肤干燥、干眼病、夜盲症，老年斑等。”这是百度百科上提到的。这里就回到我们今天的题目“暗夜明灯”了。因为缺乏维生素A导致夜盲症，也就是说一到晚上，患有夜盲症的患者就会出现轻者看不清楚，重者看不见。但是只要我们在日常生活中定时的摄入维生素A或者能在体内转化成维生素A的物质，那么我们就不用担心会患上夜盲症了。

那有朋友就会问了，怎么才知道我们已经获取了维生素A或者能在体内转化成维生素A呢？

对于这一点，大家大可不必担心，因为日常生活中的大部分瓜果蔬菜都含有。大家只要经常吃些蔬菜水果就可以了。

虽然我们今天只讲维生素A的明灯效果，其实维生素A还有很多其他的效果。比如：维护上皮组织的健康，促进骨骼的生长，促进正常的生长于生殖，抑制肿瘤的生长。

好了，今天的小常识就讲到这里。我们以后再见吧！

（请不要在意这些细节！！！）

简述TBST缓冲液的配制及应用

TBST中含有Tris-Hcl， NaCl，Tween20这三种物质，是做WESTERN BLOT中常用的一种缓冲液。

TBST缓冲液的配制

1000ml×TBST的配置

先称量NaCl 40g ，倒入烧杯中，加DDW蒸馏水400ml,再称量NaCl 47.6g，倒入刚才的那个烧杯中（PS：由于NaCl的量太多，一次称量不方便，所以分两次称量，且易于溶解）。往烧杯中加入Tris—HCl缓冲液100ml，最后加（吐温20） 5ml,转入1000ml容量瓶中，在定容，转移即可。

TBST缓冲液的应用：

1.TBST缓冲液主要用于免疫组化和原位杂交，酶联免疫等实验中，清洗免疫印。

2.还可以用于迹膜；

注意事项：

1.TBST缓冲液，PH 7.2-7.5； 

2.颜色为无色透明液体； 

3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴防护手套操作；

琼脂糖凝胶电泳缓冲液配制有哪几点

琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。在琼脂糖凝胶电泳缓冲液又几种适用于天然双链DNA的电泳。

琼脂糖凝胶电泳缓冲液配置

常见琼脂糖凝胶电泳缓冲液配制（如图）

TBE通常作为5×或10×的贮存液配制和贮存。这种浓的贮存液pH应为8.3左右，它在应用前稀释，并用同一种贮存液制备凝胶溶液和琼脂糖凝胶电泳缓冲液。

上述三种电泳缓冲液都比较好用，三者中TAE的缓冲容量最低，长时间电泳会被消耗。此时的凝胶的阳性一侧将发生酸性化，凝胶中向阳极迁移的溴酚蓝的颜色呈蓝紫色到黄色的变化，所以需要定期更换缓冲液。

琼脂糖凝胶电泳缓冲液配方注意事项

a.TBE浓储存液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温条件下用玻璃瓶保存5X溶液，出现沉淀后则予以废弃。以往都以lX作为使用液(即1：5稀释浓储存液)进行琼脂糖凝胶电泳。但0．5X的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖凝胶电泳都以1：1

稀释的储存液作为使用液。进行聚丙烯酰胺凝胶电泳使用的lXTBE，是琼脂糖凝胶电泳时使用液浓度的2倍。聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1XTBE以提供足够的缓冲容量

b.碱性琼脂糖凝胶电泳缓冲液应现用现配

在配制琼脂糖凝胶电泳缓冲液时，不论哪一种都需要加适量的EDTA，以除去2价金属离子。另外，硼酸与琼脂糖易形成复合物，使凝胶带负电荷，可能会吸附带正电荷的物质。