hepes缓冲液的配制步骤

 HEPES缓冲液是细胞培养实验中经常用到的缓冲液。在开放式的培养条件中，加入HEPES缓冲液，可防止培养基内pH氧化升高，从而将PH维持在7.0左右。那么，HEPES缓冲液的配制步骤和方法是怎样的，下面就给大家详细介绍。

HEPES分子量为238.31，化学名：4-羟乙基哌嗪乙磺酸，分子式: C8H18N2O4S。

HEPES常用于生物缓冲剂，pH值缓冲范围：6.8-8.2，用在生化诊断试剂盒、DNA/rna提取试剂盒及PCR诊断试剂盒里。对细胞无毒性作用。它是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的pH范围。使用终浓度为10-50mmol/L。

关于HEPES 缓冲溶液的配制，不同的文献资料有不同的说法。根据用途，一种是单纯的HEPES+NaOH，另一种是HEPES+盐。各种配制方法总结如下：

一、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制

119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸馏水中，加0.5~1M 的NaOH水溶液调节至少所需pH(HEPES的有效pH 范围是6.8~8.2)，然后用蒸馏水定容至500ml，于4摄氏度保存。

二、加少量盐的HEPES Buffer配方(500ml)

HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液调节pH值，最后定容。

三、2×HEPES缓冲盐溶液的配制

将1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸馏水，用0.5M NaOH调节至所需pH值，再用蒸馏水定容至100ml即可。

上海金畔生物科技有限公司是国内知名生化试剂公司。现货HEPES缓冲液供应。免除了各位老师和同学手工配置HEPES的步骤。帮助您更快实现实验。欢迎选购。另外如果在细胞培养过程中如果有任何疑问可以拨打上海金畔生物科技有限公司技术支持电话4009686088,上海金畔生物科技有限公司将为您提供全力技术服务。

5-氮杂胞嘧啶核苷（5-Azacytidine）应用及原理

5-氮杂胞嘧啶核苷的原理：

      5-氮杂胞嘧啶核苷为科研试剂，广泛应用于分子生物学，药理学等科研方面。5-氮杂胞嘧啶核苷为一种低甲基化的强效生长抑制剂及细胞毒素剂，抑制 DNA 甲基转移酶。也是作用于S期的细胞周期特异性药，能迅速磷酸化并掺入RNA，通过破坏核酸顺利翻译为蛋白质，而抑制蛋白质的合成。还可通过抑制乳清酸核苷酸脱羧酶而影响嘧啶的合成。是一种基因表达、基因激活和沉默的重要调节剂。

5-氮杂胞嘧啶核苷的应用：

      本产品是一种核苷类似物，能够有选择地激活真核基因表达并且在某些情况下改变细胞的分化状态。其有强大的抑菌、抗肿瘤和诱变作用，被用作癌症的化学治疗剂，用于治疗实体肿瘤。

      据报道，5-氮杂胞嘧啶核苷能显著改变小鼠胚胎分化状态，抑制新合成DNA甲基化。这个产品也被用于性染色体的细胞周期的活化研究和其对于胚胎细胞与动植物个体的表型性状的表达影响。

5-氮杂胞嘧啶核苷的溶解使用：

      可以溶于乙酸水溶液(1:1 v/v)，溶解度为5 mg/ml。也可以溶于组织培养基中（1.2 mg/10 ml)，具体使用浓度根据实验来进行稀释。其在水溶液中不稳定，需要现配现用，过滤除菌。

如何配置溴酚蓝指示剂

溴酚蓝即3,3′,5,5′-四溴苯酚磺酞，是一种浅黄色到棕黄色粉末；易溶于氢氧化钠溶液，溶于甲醇、乙醇和苯，微溶于水(约0.4g/100ml)；最大吸收波长422nm。溴酚蓝是pH 指示剂，在pH 3.0-4.6范围，颜色由黄变蓝。常用做电泳指示染料，凝胶中电泳迁移速度在小分子核酸或蛋白质区域。

配置溴酚蓝指示剂方法：

配置western blot用的2*SDS上样缓冲液需要用到0.1%的溴酚蓝，2-DE中溴酚蓝一般也是配成0.1%母液。实际上，溴酚蓝在水中的溶解度不高，直接将0.1g溴酚蓝溶于100ml水是有困难的。下面是其较合适的配制方法：

0.05%的溴酚蓝配制方法：

取溴酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.0ml使其溶解，再加水稀释至200ml，即得。 变色范围pH2.8～4.6（黄→蓝绿）。

1%溴酚蓝配制方法：

将1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。溴酚蓝其钠盐易溶解在水里。

北京上海金畔生物科技有限公司科技有限公司是长期从事生化试剂耗材生产和销售的厂家。备有大量现货产品，其中包括蛋白电泳染色用试剂溴酚蓝，货号为B8120，常卖规格为5g和10g两种规格。作为科研实验用产品,溴酚蓝可用作pH指示剂，pH=3.0时呈黄色，pH=4.6时呈蓝紫色。酸碱指示剂；非水滴定用指示剂，蛋白电泳染色；病毒化验等。

甲基橙的制备操作流程及注意事项

 甲基橙在分析化学中是一种常用的酸碱滴定指示剂，其浓度为0.1%的水溶液pH为3.1（红）～4.4（黄），适用于强酸与强碱、弱碱间的滴定。下面介绍甲基橙的制备流程及注意事项。

1、对氨基苯磺酸是两性化合物，其酸性略强于碱性，所以它能溶于碱中而不溶于酸中。

2、重氮化反应中，溶液酸化时生成亚硝酸，同时，对氨基苯磺酸钠变为对氨基苯磺酸从溶液中以细粒状沉淀析出，并立即与亚硝酸作用，发生重氮化反应，生成粉末状的重氮盐。为了使对氨基苯磺酸完全重氮化，反应过程必须不断搅拌。

3、重氮化反应过程中控制温度很重要，若温度高于5℃，则生成的重氮盐易水解成酚类，降低产率。

4、滴加（1）完毕用淀粉－碘化钾试纸检验，若不显蓝色，尚需酌情补加亚硝酸钠溶液。若亚硝酸已过量，可用尿素水溶液使其分解。2HNO­2+2KI+2HCl→I­2+2NO+2H2O+2KCl

5、偶合反应结束后反应液呈弱碱性，若呈中性，则继续加入少量碱液至恰呈碱性，因强碱性又易产生成树脂状聚合物而得不到所需产物。

6、重结晶操作应迅速，否则由于产品呈碱性，温度高易使产物变质，颜色变深。

7、湿的甲基橙在空气中受光照射后，颜色会很快变深，故一般得紫红色粗产物，如再依次用水、乙醇、乙醚洗涤晶体，可使其迅速干燥。

8、溶解少许产品于水中，加几滴稀盐酸，然后再用稀氢氧化钠溶液中和，观察溶液颜色有何变化。

甲基橙制备所需试剂和耗材列举。

对氨基苯磺酸  2.1g (0.01mol)    N,N-二甲基苯胺  1.3mL(1.2g, 0.01mol)  5%氢氧化钠溶液

亚硝酸钠0.8g(0.011mol) 浓盐酸  冰醋酸  乙醇  乙醚 冰 淀粉－碘化钾试纸 滤纸等。

葡萄糖铵培养基-培养基配方

葡萄糖铵培养基是上海金畔生物科技有限公司公司改良的培养基，产品符合中国药典，提供葡萄糖铵培养基用途，原理，用法，配方，以及质量控制等信息。
原理：氯化钠维持均衡的渗透压；硫酸镁提供生长必须的微量元素；磷酸氢二钾是缓冲剂；能利用磷酸二氢铵作为唯一氮源且不需要尼克酸和氨基酸作为生长因子的微生物分解葡萄糖使培养基变酸性；溴麝香草酚兰是指示剂，产酸时培养基由绿色变为黄色；琼脂是培养基的凝固剂。
用途：用于志贺氏菌的葡萄糖铵试验（GB标准）
用法：称取本品21.28g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装试管,121℃高压灭菌15分钟,放成斜面,备用。
质量控制：

在36±1℃培养24小时。

配方：