上海金畔生物科技有限公司LB肉汤的用途及注意事项

LB肉汤是一种培养基的名称，应用在微生物培养方面越来越广泛，常用于生化分子试验中，用该培养基来预培养菌种，使菌种成倍扩增，达到使用要求。培养的菌种一般是经过改造的无法在外界环境单独存活和扩增的工程菌。

LB肉汤贮存方法：

培养基由于配制的原料不同，使用要求不同，而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基（如组织培养基），较长时间的贮存，必须放在2~10℃的冰箱内。由于液体培养基不易长期保管，现在均改制成粉末。

LB肉汤用途分类：

运送培养基：在取样后和实验室样品处理前保护和维持微生物活性的培养基。

保藏培养基：用于在一定期限性内保护和维持微生物活性，防止长期保存对微生物不利影响或使微生物长期保存后容易复苏的培养基，如菌种保存培养基等。

复苏培养基：能够使受损或应激的微生物修复，使微生物恢复正常生长能力，但不一定促进微生物繁殖的培养基，如蛋白胨水等。

增菌培养基：大多为液体培养基，为微生物提供特定的生长环境，如营养肉汤、TSB等。

选择性增菌培养基：能够保证特定微生物在其中繁殖，而部分或全部抑制其它微生物生长的培养基。

非选择性增菌培养基：能够保证大多数微生物生长的培养基，如胰酪大豆胨肉汤等。

选择性分离培养基：支持特定微生物生长，而部分或全部抑制其它微生物生长的培养基。

鉴别培养基：能够进行一项或多项微生物生理生化特征鉴定的培养基，如木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂、三糖铁琼脂培养基等。

鉴定培养基：能够产生一个特定的鉴定反应而不需要做进一步确认试验的培养基，如兔血浆、生化鉴定系统等。

多用途培养基：同时可归为多种不同用途的特定培养基，如血琼脂，可为一种复苏培养基，也可为分离培养基，也可为鉴别培养基(溶血试验)。

LB肉汤注意事项：

1、实验应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀释过后的标准品应丢弃，不可保存。

2、实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3、不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

4、使用一次性的吸头以免交叉感染，吸取终止液和底物A,B液时，避免使用带金属部分的加样器。

5、使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混合试剂盒盒里的各种成分及样品。

6、底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴漏于光下。避免用手接，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

7、加入试剂的顺序一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

8、按照说明书中标明的时间,加液的量及顺序进行温育操作。

上海金畔生物科技有限公司是生化试剂供应商，专业生产销售生化试剂、生物试剂、细胞培养基、实验耗材等产品。LB肉汤为上海金畔生物科技有限公司的常备货产品，其货号为ML8280。该产品在细胞的分离、鉴定、计数等方面起着相当重要的作用。

考马斯亮蓝染色步骤

 考马斯亮蓝染色法也称考马斯蓝法(coomassie blue staining)又称Bradford法。是测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。下面就着重介绍下考马斯亮蓝染色法原理。

考马斯亮蓝染色步骤：

1 电泳结束后，切取少量含有MARK蛋白以及少许样品的小部分凝 胶进行染色，其余部分用保鲜膜包好，放在4℃冰箱保存。 取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，确保染色液可以充分覆盖凝 胶。置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色1小时或更长时 间。 注：具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。凝胶较厚， 温度较低，则染色时间宜适当延长。凝胶较薄，温度较高，则染色时 间可以适当缩短。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近， 在染色液中几乎看不清凝胶时，可以认为已染色充分。染色2-4 个小 时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。 

2 倒出染色液。染色液可以回收重复使用至少2-3 次。 

3 加入适量考马斯亮蓝染色脱色液，确保脱色液可以充分覆盖凝胶。 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色 4-24 小时。期间更换脱色液2-4 次，直至蓝色背景基本上全部被脱去，并且蛋白条带染 色效果达到预期。通常蛋白条带在脱色1-2 小时后即可出现。 注：脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸，可以使部分染料吸附 在吸水纸上，加快脱色。脱色时间过长也会导致蛋白条带的颜色变浅。 

4 完成脱色后，用ddH2O浸泡，至于未染色凝胶长度相等时，参照 MARK 蛋白，与未染色凝胶对比，切下所需蛋白成分的凝胶，收集起来。然后把所要提纯的蛋白从凝胶中分离出来。

8-羟基喹啉的生物学应用

8-羟基喹啉

英文名称： 8-Hydroxyquinoline

性状：8-羟基喹啉是一种白色或淡黄色结晶或结晶性粉末。不溶于水和乙醚，溶于乙醇、丙酮、氯仿、苯或稀酸，能升华。腐蚀性较小。

8-羟基喹啉的生物学应用：

（1）是核糖核酸酶的部分抑制剂，加入到含有苯酚的有机抽提缓冲液中，防止苯酚氧化生成苯醌,使用浓度通常为0.1%(1g/L)。8-羟基喹啉的加入使苯酚：氯仿呈亮黄色，有助于核酸分离纯化时区分有机相和水相。与VDR结合后8-羟基喹啉从亮黄色变成深绿色。如果抽提的有机苯酚黄色说明所有的VDR都已经除去。

（2）广泛用于金属的测定和分离。能与Cu+2、Mg+2、Ca+2、Sr+2、Ba+2、Zn+2、Cd+2、Al+3、Ga+3、In+3、Yt+3、La +3、Pb+2、Cr+3、Mn+2、Fe+3、Co+2、Ni+2、Pd+2等多种金属离子络合。

贮存条件：密封阴凉干燥保存；

急性毒性：有毒，小鼠腹腔半数致死量48mg/kg。

注意事项：8-羟基喹啉有毒，使用时要小心做好个体防护。

上海金畔生物科技有限公司质粒小量提取试剂盒的使用方法

质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA，是DNA重组的常用载体，在DNA重组中，质粒或经过改造后的质粒载体可通过连接外源基因构成重组体。在质粒提取过程中，多数质粒粗提取物中含有三种构型的质粒：共价闭合环状DNA（cccDNA）、质粒的两条链没有断裂、超螺旋开环DNA（ocDNA）、质粒的一条链断裂、松弛的环状分子线形DNA（lDNA）：质粒的两条链均断裂；线性分子质粒DNA的分子构型。

质粒小量提取的方法

1.将3~5ml菌液13,000rpm离心30秒收集沉淀（菌体）。 如果用1.5ml或2ml离心管则需反复离心2～3次。

2.倒掉上清，将沉淀（菌体）完全悬浮于100μl悬 浮液（溶液I）中。上清要尽可能去除干净，可用滤纸吸干。沉淀要 用混旋器完全悬浮，否则将直接导致下一步的裂 解不彻底，进而影响质粒DNA的产量和纯度。

3.加入150μl裂解液（溶液II），轻柔地颠倒混匀10 次左右，溶液逐渐变得粘稠、清亮。不可用混旋器剧烈振荡，否则会使质粒DNA断裂； 裂解时间不宜超过5分钟，否则会造成染色体DNA 的污染及质粒DNA的产率降低。

4.加入150μl中和液（溶液III），轻柔地颠倒混匀10 次左右。 此时可见到白色絮状的染色体DNA及细菌碎片。

5.13,000rpm离心8~10分钟，将上清液小心转入一 37个新的1.5ml离心管中，加入0.4ml纯化树脂（使 用前充分混匀），颠倒混匀3分钟。此步是通过离心去除染色体DNA及细菌碎片，并使处于高盐状态下的质粒DNA与纯化树脂结合。

6.将纯化树脂及上清液的混合物吸入离心纯化柱中，13.000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液。

7.将离心纯化柱重新套入废液收集管中，加入600μl 80%异丙醇（或80%乙醇），13.000rpm离心1分 钟，倒掉收集管中的废液。 如果离心纯化柱底部残留有异丙醇（或乙醇），可 用滤纸吸干，否则将影响以后的酶促反应。此步 是洗涤质粒DNA中混有的杂质及盐类。

8.重复第7步1~2次，尽可能将杂质去除。

9. 取出离心纯化柱，将其套入一个干净的1.5ml离 心管，开盖放置2~3分钟，将残留的异丙醇(或乙 醇)挥发干净。加入50μl TE缓冲液(若用于测序， 则加50μl超纯水)于纯化树脂上，不能粘在管壁 上。室温下放置3分钟后，13,000rpm离心1分钟。 此步是将纯化树脂上的DNA洗脱下来。如果对质粒DNA的需求量较大，则重复此步骤1～2次，这 样可以获得高产量的质粒DNA。TE缓冲液或无菌 超纯水的用量视用户对浓度的要求而定。离心纯化柱放入离心管中，若盖不上盖子，亦没有关系,可开盖离心。

10.离心管中收集的液体即是洗脱下来的质粒 DNA，取1～2μl电泳（0.8%琼脂糖，120V，15～ 20分钟）检测其纯度并目测定量。 若发现有RNA 污染，可加入0.5μl RNase A （10mg/ml），37℃保温30分钟。此操作不影响其 后续实验。

质粒小量提取注意事项

1、使用前请先检查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出现混浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，待溶液恢复澄清后再使用。溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和漂洗液使用后应立即拧紧盖子。

2、洗脱缓冲液体积不应少于50ul，体积过小影响回收效率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有影晌，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH值低于7. 0会降低洗脱效率，DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

3、如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应加大菌体使用量，使用5-10ml过夜培养物，同时按照比例增加溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量，吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率。

4、DNA浓度及纯度检测：得到的质粒DNA纯度与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。得到的DNA可用琼脂糖疑胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。 DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50ug/ml双链DNA、 40ug/ml单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响吸光值，但并不表示纯度低。

 上海金畔生物科技有限公司为生化试剂供应商，专业生产销售生化试剂、生物试剂、细胞培养、试剂盒、实验耗材等产品。质粒小量提取试剂盒是上海金畔生物科技有限公司自产产品，本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的原理特异性提取质粒DNA。 离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。 使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。

动物基因组DNA提取方法及步骤介绍

基因组DNA提取是最常见分子生物学实验之一。今天给大家介绍的是动物基因组DNA提取。DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，为了进行测序、杂交、基因表达、文库构建等实验，获得高分子量和高纯度的基因组DNA是非常重要的前提，因此基因组DNA的提取也是分子生物学试验技术中最重要、最基本的操作之一。

动物基因组DNA提取实验步骤：

1、取新鲜或冰冻动物组织块0.1g（0.5cm3），尽量剪碎。置于玻璃匀浆器中，加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块，转入1.5ml 离心管中，加入蛋白酶K （500ug/ml）20μl，混匀。在65℃恒温水浴锅中水浴30min，也可转入37℃水浴12～24h，间歇振荡离心管数次。于台式离心机以12000 rpm离心5min，取上清液入另一离心管中。

2、加2倍体积异丙醇，倒转混匀后，可以看见丝状物，用100ul 吸头挑出，凉干，用200ul TE 重新溶解。（可进行PCR反应等，需要进一步纯化的按下列步骤进行）

3、加等量的酚：氯仿：异戊醇振荡混匀，离心12000 rpm，5min。

4、取上层溶液至另一管，加入等体积的氯仿?异戊醇，振荡混匀，离心12000 rpm，5min。

5、取上层溶液至另一管，加入1/2体积的7.5mol/L乙酸氨加入2倍体积的无水乙醇，混匀后室温沉淀2min ，离心12000 rpm ,10min。

6、小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将附于管壁的残余液滴除掉。

7、用1ml 70%乙醇洗涤沉淀物1次，离心12000 rpm ， 5min。

8、小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将附于管壁的残余液滴除掉，室温干燥。

9、加200ul TE重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?C20℃保存备用。

10、吸取适量样品于GeneQuant上检测浓度和纯度。

在动物基因组DNA提取试验中要特别注意以下几点：

1、尽量简化操作步骤，缩短提取过程。

2、减少化学因素对核酸的降解。

3、减少物理因素对核酸的降解：机械剪切力和高温。

4、防止核酸的生物降解：排除核酸酶。 想要查看动物基因组DNA提取更详细信息，请点击查看上海金畔生物科技有限公司实验库： 动物基因组DNA提取 。全面介绍了本实验原理、操作步骤、注意事项等。提供全部本实验生化试剂、耗材、仪器。欢迎选购。