四步法革兰染色的步骤详细介绍

 在之前的文章我们已经详细介绍了革兰氏染色原理，这篇文章主要介绍了革兰氏染色的步骤以及关键步骤应该注意的问题和避免方法。革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，经过染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。革兰氏染色属复染法。

革兰染色法一般包括初染，媒染，脱色等四个步骤：

1 ．涂片

将培养的不同菌分别作涂片（注意涂片切不可过于浓厚），干燥、固定。固定时通过火焰l 一2 次即可，不可

过热，以载玻片不烫手为宜。

2 ．染色

( 1 ）初染加草酸铰结晶紫一滴，约一分钟，水洗。

( 2 ）媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。

( 3 ）脱色将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95 ％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20 一30 秒钟，立即用水冲净酒精。

( 4 ）复染用番红液染1 一2 分钟，水洗。

( 5 ）镜检干燥后，置油镜观察．革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。

( 6 ) 同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。

  革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌：而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。

  以上已经就革兰氏染色的步骤做了详细介绍，如果你还对革兰氏染色有疑问可以联系上海金畔生物科技有限公司客服热线，寻求提供技术支持。热线电话400-968-6088。或在线联系上海金畔生物科技有限公司客服。