琼脂糖凝胶电泳缓冲液配制有哪几点-技术文章

琼脂糖凝胶电泳缓冲液配制有哪几点

琼脂糖凝胶具有网络结构,物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大,因此在凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大小,这就大大提高了分辨能力。在琼脂糖凝胶电泳缓冲液又几种适用于天然双链DNA的电泳。

琼脂糖凝胶电泳缓冲液配置

常见琼脂糖凝胶电泳缓冲液配制(如图)

琼脂糖凝胶电泳缓冲液配制有哪几点-技术文章

TBE通常作为5×或10×的贮存液配制和贮存。这种浓的贮存液pH应为8.3左右,它在应用前稀释,并用同一种贮存液制备凝胶溶液和琼脂糖凝胶电泳缓冲液

上述三种电泳缓冲液都比较好用,三者中TAE的缓冲容量最低,长时间电泳会被消耗。此时的凝胶的阳性一侧将发生酸性化,凝胶中向阳极迁移的溴酚蓝的颜色呈蓝紫色到黄色的变化,所以需要定期更换缓冲液。

琼脂糖凝胶电泳缓冲液配方注意事项

a.TBE浓储存液长时间存放后会形成沉淀物,为避免这一问题,可在室温条件下用玻璃瓶保存5X溶液,出现沉淀后则予以废弃。以往都以lX作为使用液(即1:5稀释浓储存液)进行琼脂糖凝胶电泳。但0.5X的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖凝胶电泳都以1:1

稀释的储存液作为使用液。进行聚丙烯酰胺凝胶电泳使用的lXTBE,是琼脂糖凝胶电泳时使用液浓度的2倍。聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小,通过缓冲液的电流量通常较大,需要使用1XTBE以提供足够的缓冲容量

b.碱性琼脂糖凝胶电泳缓冲液应现用现配

在配制琼脂糖凝胶电泳缓冲液时,不论哪一种都需要加适量的EDTA,以除去2价金属离子。另外,硼酸与琼脂糖易形成复合物,使凝胶带负电荷,可能会吸附带正电荷的物质。

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