玻璃纸透析培养观察法-技术文章

玻璃纸透析培养观察法

⑴ 玻璃纸的选择与处理:要选择能够允许营养物质透过的玻璃纸。也可收集商品包装用的玻璃纸,加水煮沸,然后用冷水冲洗。经此处理后的玻璃纸若变硬,必定是不可用的,只有那些软的可用。将那些可用的玻璃纸剪成适当大小,用水浸湿后,夹于旧报纸中,然后一起放入平皿内121℃灭菌30min备用。
⑵ 菌种的培养:按无菌操作法,倒平板,冷凝后用灭菌的镊子夹取无菌玻璃纸贴附于平板上,再用接种环沾取少许霉菌孢子,在玻璃纸上方轻轻抖落于纸上。然后将平板置28~30℃下培养3~5天,曲霉和青霉即可在玻璃纸上长出单个菌落(根霉的气生性强,形成的菌落铺满整个平板)。
⑶ 制片与观察:剪取用玻璃纸透析法培养3~4d 后长有菌丝和孢子的玻璃纸一小块,先放在50%乙醇中浸一下,洗掉脱落下来的孢子,并赶走菌体上的气泡,然后正面向上贴附于干净载玻片上,滴加1~2滴乳酸石炭酸棉蓝液,小心地盖上盖玻片,注意不要产生气泡,不要移动盖玻片,以免搞乱菌丝。
标本片制好后,先用低倍镜观察,必要时再换高倍镜。注意观察菌丝有无隔膜,有无假根、足细胞等特殊形态的菌丝。注意其无性繁殖器官的形状和构造,孢子着生的方式和孢子的形态、大小等。