TRIzol（Invitrogen）试剂的性能描述及注意事项

警告：

TRIzol试剂与皮肤接触及吞咽有毒。可导致烧伤。与皮肤接触后，应立即用洗涤剂和大量清水冲洗。如感到身体不适，应就医（如需要，请出示本产品标签）。本产品含有苯酚和其他成分。已经证明TRIzol?在室温下可稳定保存12个月。但我们建议在储存于2-8°C，以保证最佳性能。

性能描述：

TRIzol试剂（美国专利号，5346994）是即用型细胞或组织总RNA提取试剂。该试剂是利用苯酚和异硫氰酸胍一步完成提取RNA的方法，是对Chomczynski和Sacchi开发的单步RNA提取法的改善。在匀质化或裂解样品中，TRIzol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞并溶解细胞成分。加入氯仿离心后，溶液分离成水相和有机相。仅RNA存在于水相中。将水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，样品中DNA和蛋白质可通过相继沉淀回收。用乙醇沉淀可从中间相得到DNA，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。

此技术既可良好的应用于少量组织（50-100mg）和细胞（5×106），也可用于大量的组织（≥1g）和细胞（>107）的处理，组织和细胞不限于人、动物、植物或细菌。TRIzol试剂使用简单方便，可同时处理大量样本。整个过程可在一小时内完成。用TRIZOL提取总RNA可避免蛋白质和DNA污染。提取的RNA可用于Northern?blot分析、斑点杂交、poly（A）+选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。

TRIzol试剂方便提取不同种类、不同分子大小的RNA。例如，从大鼠肝中提取RNA，经琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色，高分子量RNA离散带长度可高达7kb和15kb，(组成mRNA’s和hnRNA’s)，两个主要的核糖体RNA带在~5kB（28S）和~2Kb（18S）。低分子量RNA介于0.1和0.3kB之间（tRNA，5S）。分离出的RNA用TE稀释，其A260/A280比值≥1.8。

防止RNA酶污染的注意事项

在不当的技术操作过程中，RNA酶可在任何提取程序中意外引入RNA的制备中。由于酶的活性难以抑制，所以必须防止其引入。进行RNA工作时，下列准则应予以遵守。

①一直戴着手套。皮肤上通常包含的细菌和霉菌，可污染RNA的制备，同时也是RNA酶的一个来源。良好的微生物操作技术可防止微生物污染。

②使用无菌制品，专为RNA工作准备的一次性塑料器皿和自动吸管避免与共用设备的RNA酶交叉污染。例如，一个实验室正在使用的RNA探针可能用得上RNA酶A或RNA酶T1以减少过滤背景，其中任何非一次性物品（如自动吸管）可能是大量RNA酶的来源。

③TRIzol试剂可保护RNA酶对RNA的污染。下游样品处理要求非一次性的玻璃器皿或塑料器皿无RNA酶。玻璃物品可以在150℃烘烤4小时，塑料制品，可浸泡10分钟的0.5?M?NaOH溶液，然后用清水彻底冲洗，并高压蒸汽灭菌。

其他需要注意的事项：

①用小于2毫升体积的TRIZOL试剂工作时，建议使用一次性透明聚丙烯管。

②对于较大的体积，用玻璃（Corex）或聚丙烯管，并测试以确保该管装满TRIzol试剂和氯仿时可承受12,000×g的离心力，不要使用泄漏或有裂纹的管子。

③离心前平衡管子的重量

④玻璃管必须用封口膜密封，密封时封口膜要覆盖有螺丝处，聚丙烯管离心前必须盖好。

警告：

当使用TRIzol试剂工作时，应使用手套，并保护眼睛（屏蔽、安全护目镜）。避免与皮肤或衣服接触。使用化学通风橱。避免吸入蒸气。除非特别注明，所有程序均在15?-30°C下进行。

总结刚果红培养基的配制方法及使用方法

纤维素刚果红培养基是固体培养基，主要用于纤维素分解菌的分离和鉴别，纤维素分解菌周围有红色分解圈。也属于鉴别培养基,因为刚果红培养基上也能生长其他微生物,例如有些自养型微生物就能在该培养基上生存；不过只有纤维素分解菌周围才会形成透明圈,从而将该菌落鉴定出来.那么刚果红培养基的配置方法是什么呢？
刚果红的配置：
硝酸钠                         1.0
磷酸氢二钠                   1.2
磷酸二氢钾                   0.9
硫酸镁                         0.5
氯化胛                         0.5
酵母浸出粉                   0.5
酸水解酪蛋白                0.5
刚果红                         0.2
纤维素粉                      5.0
琼脂                            5.0
pH值7.0 ± 0.1 25℃
刚果红的使用方法：
称取本品25.3g,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。

分类介绍蛋白marker的原理及作用

蛋白质marker指的是做western时,用来参照的标准蛋白,显示蛋白大小,用以与自己蛋白进行对比,估计蛋白大小。在免疫印迹（Western blot）试验中，分子量Marker虽不起眼，但意义重大，是阳性对照，是大小的标准，是必须的。

蛋白marker的分类：

一. 未染色(pre mixed)蛋白分子量标准

未染色的蛋白分子量标准是最简单，也是最准确的一种。由于没有附带染料分子或者是标记分子，所示大小正好是蛋白原本的大小，是精确判断蛋白大小必须的。现在的marker多数都选用预混和的Marker，方便不同大小的蛋白比较。预混的Marker通常有几条带加倍浓度作为指示，因为混合的条带越多，越不好记，谁知道哪条是那条!数到眼都花了。所以当看到特别浓的那几条标志带就记得是哪里了。不过要记得，小带通常都不那么容易看清楚的。在选择上来说，当然是选择其中至少有一条条带和自己的目的蛋白大小相近的最好，越近越好。如果你的蛋白不幸在两条跨度较大Marker条带之间，选别的Marker吧。预混的Marker使用上不如预染Marker(pre-stained)好用，因为电泳过程中完全看不到，要和目标蛋白一起等到最后染色才“开蛊”，无法对实验起预示参照作用。完全属于“后知后觉”型的，当然还是比“不知不觉”不做对照的要好。

① 宽分子量蛋白标准

如果从实验室总体考虑的，就选范围尽量宽，条带分布比较均匀的，这样你的蛋白无论在哪个区间都容易判断，避免正好落在一段空白区的危险。不过条带越多，每次上样量也就越费。拿到Marker后，如果买的是大包装，就应该考虑分装。多次反复冻融对于蛋白的危险，不用多说吧。另外要记得，宽谱的Marker不一定每条都能看到的，特别是Mini?Cell。如果侧重大蛋白，那小的可能就已经跑掉了，不是质量不好哦。

② 高分子量蛋白标准

通常在检测大分子量蛋白经常使用到高分子量蛋白标准。

③低分子量蛋白marker标准

在一般的蛋白电泳当中，更常用的是低蛋白标准分子量，除了有指示蛋白大小的作用以外，有时还可以用作粗略的定量。实验室用在一般蛋白电泳的低分子量蛋白标准中。

在低分子量蛋白标准这里还包括可特别小的蛋白标准，比如30kD以下蛋白或者多肽的分离辨别。其中GE的从2kD到16kD之间有6条带的蛋白标准挺不错。

二.预染蛋白分子量标准

预染蛋白分子量是一些纯化好的蛋白混合物，通过与染料共价耦联，在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。预染蛋白分子量的出现方便了我们的实验，这种蛋白分子量标准可以帮助我们在电泳时、电泳后，以及转膜后监测电泳情况和估计迁移率——比如，已知垂直电泳最佳分辨区域大约在胶的2/3处，如果使用预染Marker就可以预测目标蛋白进入最佳分辨区时停止电泳以得到最佳分辨效果;如果观察到Marker电泳异常也可以及时终止电泳;另外在Western Blot转膜以后可以直接观察蛋白转膜是否完全，还可以在膜上标记蛋白分子量，所以吸引了许多实验室人员购买预染蛋白标准。值得注意的是预染蛋白Marker与染料共价耦联，所以在不同的缓冲条件下电泳时迁移特性可能会发生某些变化，可能导致一些偏差，所以不太适合精确定位蛋白——不过多数情况下Marker的条带未必能和我们的目标蛋白完全一样，我们得到的也不过是一种相对Marker指示的参考大小，最后都需要Western来定性，所以如果不是要区分大小相近的条带，预染Marker还是很好用的，而且也可以和未染色的蛋白标准一起使用。

预染蛋白标准可以分为两种：单色预染和多色预染，其实区别就在于帮助在实验过程中辨认某个条带的大小——Marker条带越多参考价值越大，可就越难辨认区分，如果用不同的颜色来区别就比较好辨认啦。如果沉闷的电泳实验中跑出五颜六色的彩虹Marker，此时心情想必会愉快一些!单色的Marker通常是利用其中某些条带加倍浓度来提示其大小的。还有一点特别要注意，由于转膜是一个将胶里的Marker浓缩在洁白的膜上，所以需要的上样量相对少一些，如果想要在电泳过程中看到美丽的“彩虹”，或者单色的Marker往往需要比说明书里多加一些Marker的。

三、Western专用的蛋白分子量标准

①生物素标记蛋白标准

未染色的Marker在做Western时，需要在印迹前先用丽春红或者是SYPRO荧光蛋白染色液等不干扰Western Blot的染色方法显色，在胶上做标记最后才能“拼”在最后的结果中，如果是预染的Marker就要在转膜后标记膜，或者剪膜，最后在“拼上”。要是想直接将Marker结果显示在最后结果上，不用手工作图或者拼接，那就要Western专用的Marker了。比如生物素标记的蛋白标准。这种方法主要是配合化学发光法：在蛋白分子量上标记生物素，通过带有抗生物素的抗体或者偶联链亲霉素的抗体，在化学发光检测到目的蛋白带时就可以同时看到相应的分子量标准一起发光显影了。不同于普通蛋白分子量标准的便宜、预染蛋白分子量的方便，这一方法的优点是与Marker和目的蛋白对应性好，同时在同张片上显示，不用拼接，利于分析。缺点是如果样品中带有生物素背景，那个抗生物素抗体有可能影响结果，而且反应体系太过复杂也会干扰实验结果。

②特殊标记蛋白标准

在经过修饰的蛋白标准中，除了生物素标记以外，近些年由于下游蛋白操作的丰富化与复杂化，也出现带有“尾巴”的蛋白标准。比如His-Tag，如果每个Marker条带都有His –tag，那二抗添加His-Taq抗体很容易将Marker条带显示在Western结果上。很方便，问题就是有可能有潜在的干扰，比如样品中正好有类似Histag的结构。不过这可以通过对照检测的。

上海金畔生物科技有限公司为生化试剂供应商，生产销售生化试剂、生物试剂、实验耗材、细胞培养基等产品。蛋白marker为上海金畔生物科技有限公司的常备货产品，其产品种类齐全，是广大科研工作者的信赖直选。

免疫球蛋白的具体分类有哪些？

免疫球蛋白指有抗体活性的动物蛋白，主要存在于血浆中，也见于其他液体、组织和一些分泌液中。免疫球蛋白因结构不同可分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE 5种，多数为丙种球蛋白。

免疫球蛋白的分类：

免疫球蛋白可分为五类，即免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E（IgE），IgG，IgA和IgM还有亚类。

IgG，IgD，IgE均为单体，分泌液中IgA（SIgA）是双体，IgM是五聚体。

免疫球蛋白IgG

人体血清免疫球蛋白的主要成分是IgG ，它占总的免疫球蛋白的70-75%，尽管免疫球蛋白千变万化，但都有类似的结构。IgG分子由4条肽链组成。其中分子量为2.5万（23kD）的肽链，称轻链（L链），分子量为5万的肽链（50～60kD），称重链（H链）。轻链与重链之间通过二硫键（—S—S—）相连接。免疫球蛋白的作用人体血清免疫球蛋白IgG是初级免疫应答中最持久、最重要的抗体，它仅以单体形式存在。大多是抗菌性、抗毒性和抗病毒抗体属于IgG，它在抗感染中起到主力军作用，它能够促进单核巨噬细胞的吞噬作用（调理作用），中和细菌毒素的毒性（中和毒素）和病毒抗原结合使病毒失去感染宿主细胞的能力（中和病毒）。IgG 在机体合成的年龄要晚于IgM，在出生后第3 个月开始合成，3-5 岁接近成年人水平。它是唯一能通过胎盘的Ig，在自然被动免疫中起重要作用。

免疫球蛋白lgE

是一类具有δ链的亲同种细胞抗体，是参与过敏性鼻炎、过敏性哮喘和湿疹等发病机制调节的主要抗体。自1966年日本学者Ishizaka发现IgE以来，有关IgE的研究已取得重大进展，并先后在肥大细胞、嗜碱细胞、嗜酸细胞和巨噬细胞表面发现了IgE受体，还分别从各种过敏性疾病患者包括过敏性哮喘患者血清中分离出针对多种花粉、尘螨、霉菌和动物皮毛的特异性IgE，近年证实许多细胞因子如IL-4、γ-干扰素均参与了IgE合成的调节。IgE抗体既能启动速发相过敏反应，也可诱发迟发相过敏反应。

上海金畔生物科技有限公司瑞氏染液的原理及使用方法

瑞氏染液由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料，溶于甲醇，后解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。伊红通常为钠盐，有色部分为阴离子。美蓝通常为氯盐，有色部分为阳离子。甲醇的作用：一是溶解美蓝和伊红，使其解离为有色美蓝正离子的和伊红负离子。后两者可以选择性地吸附于血细胞内的不同成分而使其着色；二是固定细胞形态，加速染色反应，增强染色效果。

瑞氏染液染色原理：

瑞氏染色法使细胞着色既有化学亲和反应，又有物理吸附作用。瑞氏染料由酸性染料伊红和碱性染料美蓝的氧化物（天青）组成,其深于甲醇后,解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。各种细胞由于所含化学成分不同，对染料的亲和力也不一样，因此，染色后各种细胞呈现出各自的染色特点。

瑞氏染液配置方法：

瑞士染料830gm或1g；

甲醇（AR） 500ml或600ml；

先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内，用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着。再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入一清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口。存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存3个月以上为佳。

瑞氏染液使用说明：

1、取涂片、自然干燥。

2、滴加瑞氏染液染3分钟,使标本被其中甲醇所固定。

3、加等量PH6.4的磷酸盐缓冲液(或等量超纯水)轻轻晃动玻片, 与瑞氏染色液混匀，静置5分钟。

4、水洗、吸干、镜检。

5、细菌染成蓝色，组织细胞胞浆红色，细胞核蓝色。

注意事项：

1、PH对细胞染色有影响。由于细胞中各种蛋白均为两性电解质，所带电荷随溶液PH而定。对某一蛋白质而言，如环境PH<PI（蛋白质的等电点），则该蛋白质带正电荷，即在酸性环境中正电荷增多，易与酸性伊红结合，染色偏红；相反，则易与美蓝天青结合，染色偏蓝。为此，应使用清洁中性的玻璃片，稀释液必须用PH6.4～6.8的确良缓冲液。冲洗玻片必须用流水。

2、未干透的血膜不能染色，否则染色时血膜易脱落。

3、染色时间与染液浓度、染色温度成反比；而与细胞数量成正比。

4、冲洗时不能先倒掉染液，应用流水冲去，以防染料沉淀在血膜上。

5、如血膜上有染料颗粒沉积，可加少许甲醇溶解，但需立即用水冲洗掉甲醇，以免脱色。

6、染色过淡，可以复染。复染时应先加缓冲液，创造良好的染色环境，而后加染液，或加染液与缓冲液的混合液，不可先加染液。

7、染色过深可用水冲洗或浸泡水中一定时间，也可用甲醇脱色。

8、染色偏酸或偏碱时，均应更换缓冲液再重染。

瑞氏染液为上海金畔生物科技有限公司常备货产品，货号为G1040。瑞氏染料是由碱性染料美蓝（Methvlem blue）和酸性染料伊红（Eostm Y）组成的复合染料，溶于甲醇 。在正常情况下，血膜外观染成淡紫红色。显微镜下，红细胞呈粉红色，在厚薄均匀处，略有碟状感。白细胞浆中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩。细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。