简述tbst与pbst的区别及配置

TBST是TBS+Tween的缩写，生物实验中提到的PBST是指PBS溶液加上Tween-20。那么tbst与pbst都有上面区别呢？

tbst与pbst的区别：

1、TBST的pH值随温度变化大一点，而PBST似乎容易有沉淀，若稀释抗体后需要反复使用的话建议使用TBST溶解。

2、两种洗液用起来没有什么区别，都是提供一个缓冲的PH值环境，加上吐温20有助于蛋白的洗脱。PBST的磷酸盐缓冲液加Tween-20，而TBST是Tris缓冲液加Tween-20。

PBS溶液是指磷酸缓冲液(Phosphate Buffer Solution)，渗透压近似于生理条件又有很强的pH缓冲能力，常用来洗细胞（不易涨裂）和作为细胞培养的基础液(pH缓冲)。

TBS缓冲液是生物学中常使用的等渗缓冲盐溶液，主要用于免疫组化和原位杂交，酶联免疫等实验中，清洗免疫印迹实验中非特异性结合的抗体等。由 Tris-HCl 构成稳定的 PH 缓冲体系，NaCl 提供等渗条件.

TBST的配置

先称量NaCl40g，倒入烧杯中；

加DDW蒸馏水400ml,再称量NaCl?47.6g；倒入刚才的那个烧杯中（PS：由于NaCl的量太多，一次称量不方便，所以分两次称量，且易于溶解）；

往烧杯中加入Tris—HCl缓冲液100ml；

最后加（吐温20）5ml；

转入1000ml容量瓶中，在定容，转移即可。

抗荧光衰减封片剂（含DAPI）和不含DAPI的区别

   抗荧光衰减封片剂是一种用于减缓荧光衰减的封片试剂。以甘油为基础，加入抗荧光衰减剂，有强烈的抗荧光衰减作用，用于对荧光组织和细胞样品的封片。封片后，样品4℃或者-20℃避光可保存2-3周。在封片时用移液枪滴一滴抗荧光衰减封片液，盖上盖玻片就可以了。

封片剂含细胞核DNA荧光染料DAPI，使实验操作更简便；封片剂干燥后会形成一层牢固的涂层，光学透明，非常便于后续观察、拍照与储存。   DAPI即4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole)，是一种能够与DNA强力结合的荧光染料，常用于荧光显微镜观测。因为DAPI可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色，显微镜下可以看到显蓝色荧光的细胞。DAPI和双链DNA结合后，最大激发波长为360nm，最大发射波长为460nm。 北京上海金畔生物科技有限公司科技有限公司自产产品抗荧光衰减封片剂，分为S2100抗荧光衰减封片剂和S2110抗荧光衰减封片剂(含DAPI)两种。常用产品为S2100，能满足大部分实验的要求，而S2110则更便于实验的后续观察。根据不同的要求灵活选择产品，便于实验的操作完成。

产品使用说明：    使用前平衡至室温。

1. 贴壁细胞样品：   

A. 染色完毕后，吸尽液体。   

B. 滴一滴(20-50μl)抗荧光衰减封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，让细胞接触封片液，尽量避免气泡。  

C. 随后即可通过荧光显微镜观察样品。

2. 组织切片：    

A. 染色完毕后，吸尽液体。

B. 滴一滴(20-50μl)抗荧光衰减封片液于组织切片上，盖上盖玻片，让切片接触封片液，尽量避免气泡。   

C. 随后即可通过荧光显微镜观察样品。

3. 其它样品：    其它样品参考细胞样品或组织切片进行操作。

注意事项：    

1. 荧光物质均易发生衰减，染色后的样品宜避光保存。    

2. 在使用抗衰减封片液的情况下可以减缓衰减，但仍宜尽量避光和尽早拍照。    

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

L-谷氨酰胺的作用

L-谷氨酰胺是大部分细胞培养基的基本成分，细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸,在缺少L-谷氨酰胺时,细胞生长不良。

L-谷氨酰胺的作用

L-谷氨酰胺在食品加工中作营养增补剂，调香增补剂。L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有确定。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。

谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质的重要原材料，在细胞培养中，谷氨酰胺缺乏会导致细胞生长不良甚至死亡。在配制多数细胞培养液时都需补加一定量的谷氨酰胺。由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，故应单独配制，置于-20℃ 冰箱中保存，用前加入培养液中。加有谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2周以上时，应重新补加谷氨酰胺。

上海金畔生物科技有限公司为生化试剂供应商，专业生产销售生化试剂、生物试剂、细胞培养基、实验耗材等产品。L-谷氨酰胺是上海金畔生物科技有限公司的常备货产品，其货号为，G0200。L-谷氨酰胺在中性溶液中稳定，在醇、碱或热水中易分解成谷氨醇或丙酯化为吡咯羧醇，无臭，有微甜味。可用于营养增补剂，调味增香剂。医药上用作治疗消化器官溃疡、醇中毒及改善脑功能。L-谷氨酰胺是构成人体蛋白质所必需的20种氨基酸之一。上海金畔生物科技有限公司生产的谷氨酰胺溶液浓度为200mM，经过滤除菌，可以直接用于细胞培养等用途，使用前不必再进行过滤除菌等处理。

酚红的介绍及使用说明

酚红是一种深红色结晶性粉末，几乎不溶于醚和氯仿，溶于氢氧化碱或碳酸碱溶液中呈深红色，在空气中稳定。CAS号：143-74-8。

酚红的作用：

酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂,但是酚红具有一定的固醇类激素样作用,如雌激素样作用,尤其对于所培养的哺乳类动物细胞,可能发生的固醇类反应不可忽视。

苯酚红被用作酸碱指示剂。一种苯酚红溶液，在6.4个或一个值为一个下面和一个红色的颜色在8.2和以上。酚红在培养基中被广泛使用，以确定从中性到酸性PH值的变化。它是通常用在细胞培养基中，在11毫克/ L的苯酚红在组织培养基中可以作为一个弱雌激素，特别是与人乳腺癌细胞，脂溶性杂质，而不是苯酚红染料本身，对于雌激素活性的帐户。95-99%的这些杂质可以从钠去除酚红与雌激素样活性降低。

溶液的配制方法：

取0.1 g苯酚红与5.7 mL 0.05 mol/L的NaOH溶液在研钵中研匀后用纯水溶解制成250 mL试液。

储存/稳定性：

酚红作为一个组件的组织培养基中可蒸压。

准备指令：

苯酚红是微溶于水（3毫克/毫升）和酒精（4毫克/毫升）。酚红容易溶于碱金属氢氧化物或碳酸盐与红色溶液的形成。苯酚红钠盐溶于水（25毫克/毫升）。本品为可溶性（1毫克/毫升），在1的氢氧化钠。

程序：

指示溶液可以溶解0.1克酚红14.20毫升0.02 N NaOH和形成稀释至250 mL去离子水。苯酚红可以用来测量巨噬细胞培养上清中的过氧化氢多孔板，实验使用2个单位的过氧化物酶/量100毫升0.5毫米酚红，pH 737°C.反应停止而开发的颜色加入10毫升1 N NaOH和阅读的氧化苯酚红600-610 nm的吸收。计算完成的比较过氧化氢标准曲线。

注意事项及免责声明：

实验室使用。不为药物，家庭或其他用途。

上海金畔生物科技有限公司为生化试剂供应商，专业生产销售生化试剂、生物试剂、细胞培养、试剂盒、实验耗材等产品。酚红为上海金畔生物科技有限公司的常备货产品，其货号为P8460。酚红多工作细胞培养物，用于细胞培养的应用。

DEAE-Sephadex A-50纯化血清中的γ球蛋白

产品简介

DEAE-SephadexA-50(二乙基氨基乙基葡聚糖A-50)为弱碱性阴离子交换剂。用NaOH将CL-型转变为OH-型后，可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白属于中性蛋白(等电点为PH6.85-7.5)，其余均属酸性蛋白。在PH7.2-7.4的环境中，酸性蛋白均被DEAE-Sephadex?A-50吸附，只有γ球蛋白不被吸附。因此，通过柱层析γ球蛋白便可在洗脱中先流出,而其他蛋白则被吸附在柱上,从而便可分离获得纯化的IgG。

产品参数

产品名称：DEAE-Sephadex A-50

货号：17-0180-02

基质：Sephadex

颗粒大小：40-120μm

最大流速：45cm/h

工作pH：2-9

操作温度：室温

保存条件：室温

实验步骤

1、预处理

称DEAE-SephadexA-50(下称A-50)5克，悬于500ml蒸馏水，1小时后倾去上层细粒。按每克A-50加0.5M NaOH15ml的比例，将A-50浸泡于0.5MNaOH中，搅匀，静置30分钟，装入布氏漏斗(垫有2层滤纸)中抽滤，并反复用蒸馏水抽洗至PH呈中性；再以0.5MHCl同上操作过程处理，最后以0.5M?NaOH再处理一次。处理完后，将A-50浸泡于0.1M，PH7.4?PB中过夜。

2、装柱

(1)将层析柱垂直固定于滴定铁架上，柱底垫一园尼龙纱，出水口接一乳胶或塑料管并关闭开关。

(2)将0.1M，PH7.4?PB沿玻璃棒倒入柱中至1/4高度，再倒入经预处理并以同上缓冲液调成稀糊状的A-50。待A-50凝胶沉降2-3cm厚时，启开出水口螺旋夹，控制流速1ml/分钟，同时连续倒入糊状A-50凝胶至所需高度。

(3)关闭出水口，待A-50凝胶完全沉降后，柱面放一园形滤纸片，以橡皮塞塞紧柱上口，通过插入橡皮塞之针头及所连接的乳胶或塑料管与洗脱液瓶相连接。

3、平衡

启开出水口螺旋夹，控制流速12-14滴/分钟，使约2倍床体积的洗脱液流出。并以PH计与电导仪分别测定洗脱液及流出液之PH值与离子强度是否相同。达到一致时关闭出水口，停止平衡。

4、加样及洗脱

启开上口橡皮塞及下口螺旋夹，使柱中液体缓慢滴出，当柱面液体与柱面相切时，立即关闭出水口，以毛细滴管沿柱壁加入样品(体积应<床体积的2％，蛋白浓度以<100mg为宜)。松开出水口螺旋夹使柱面样品缓慢进入柱内，至与柱面相切时，立即关闭下口，以少量洗脱液洗柱壁2-3次；再放开出水口，使洗液进入床柱，随后立即于柱面上加入数ml洗脱液，紧塞柱上口，使整个洗脱过程成一密闭系统。并控制流速12～14滴／分钟。

5、收集

开始洗脱的同时就以试管进行收集。每管收集3～5ml。共收集10～15管。

6、测蛋白

以751-G型紫外分光光度计分别测定每管OD280nm，与OD260nm，按前述公式计算各管蛋白含量。并以OD280nm为纵座标，以试管编号为横座标，绘制洗脱曲线。

7、合并、浓缩

将洗脱峰的上坡段与下坡段各管收集液分别进行合并，以PEG(MW6000)洗缩至所需体积，加入0.02％NaN３防腐剂，于4℃保存备用。

8、A-50凝胶的再生

在柱上先以2MNaCl洗柱上的杂蛋白至流出液的OD280nm<0.02，再以蒸馏水洗去柱中盐。然后按预处理过程将A-50再处理一遍即达再生。近期用时泡于洗脱缓冲液中４℃保存；近期不用时，以无水酒精洗2次，再置50℃温箱烘干，装瓶内保存。

(四)注意事项

1.柱的选择：从理论上说，只要柱足够长，就得获得理想的分辨率，但由于层析柱流速同压力梯度有关，柱长增加使流速减慢，峰变宽，分辨率降低。柱的直径增加，使液体流动的不均匀性增加，分辨率明显下降。

2.纯化过程必须严格控制脱缓冲液的PH及离子强度。样品与A-50凝胶必须用洗脱缓冲液彻底平衡后，才能进行柱层析。

3.所装的柱床必须表面平整，无沟流及气泡，否则应重装。

4.洗脱过程中应严格控制流速，且勿过快。

5.样的体积要小，浓度不宜过高。

6.加样及整个洗脱过程中，严防柱面变干。