上海金畔生物科技有限公司瑞氏染液的原理及使用方法

瑞氏染液由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料，溶于甲醇，后解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。伊红通常为钠盐，有色部分为阴离子。美蓝通常为氯盐，有色部分为阳离子。甲醇的作用：一是溶解美蓝和伊红，使其解离为有色美蓝正离子的和伊红负离子。后两者可以选择性地吸附于血细胞内的不同成分而使其着色；二是固定细胞形态，加速染色反应，增强染色效果。

瑞氏染液染色原理：

瑞氏染色法使细胞着色既有化学亲和反应，又有物理吸附作用。瑞氏染料由酸性染料伊红和碱性染料美蓝的氧化物（天青）组成,其深于甲醇后,解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。各种细胞由于所含化学成分不同，对染料的亲和力也不一样，因此，染色后各种细胞呈现出各自的染色特点。

瑞氏染液配置方法：

瑞士染料830gm或1g；

甲醇（AR） 500ml或600ml；

先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内，用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着。再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入一清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口。存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存3个月以上为佳。

瑞氏染液使用说明：

1、取涂片、自然干燥。

2、滴加瑞氏染液染3分钟,使标本被其中甲醇所固定。

3、加等量PH6.4的磷酸盐缓冲液(或等量超纯水)轻轻晃动玻片, 与瑞氏染色液混匀，静置5分钟。

4、水洗、吸干、镜检。

5、细菌染成蓝色，组织细胞胞浆红色，细胞核蓝色。

注意事项：

1、PH对细胞染色有影响。由于细胞中各种蛋白均为两性电解质，所带电荷随溶液PH而定。对某一蛋白质而言，如环境PH<PI（蛋白质的等电点），则该蛋白质带正电荷，即在酸性环境中正电荷增多，易与酸性伊红结合，染色偏红；相反，则易与美蓝天青结合，染色偏蓝。为此，应使用清洁中性的玻璃片，稀释液必须用PH6.4～6.8的确良缓冲液。冲洗玻片必须用流水。

2、未干透的血膜不能染色，否则染色时血膜易脱落。

3、染色时间与染液浓度、染色温度成反比；而与细胞数量成正比。

4、冲洗时不能先倒掉染液，应用流水冲去，以防染料沉淀在血膜上。

5、如血膜上有染料颗粒沉积，可加少许甲醇溶解，但需立即用水冲洗掉甲醇，以免脱色。

6、染色过淡，可以复染。复染时应先加缓冲液，创造良好的染色环境，而后加染液，或加染液与缓冲液的混合液，不可先加染液。

7、染色过深可用水冲洗或浸泡水中一定时间，也可用甲醇脱色。

8、染色偏酸或偏碱时，均应更换缓冲液再重染。

瑞氏染液为上海金畔生物科技有限公司常备货产品，货号为G1040。瑞氏染料是由碱性染料美蓝（Methvlem blue）和酸性染料伊红（Eostm Y）组成的复合染料，溶于甲醇 。在正常情况下，血膜外观染成淡紫红色。显微镜下，红细胞呈粉红色，在厚薄均匀处，略有碟状感。白细胞浆中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩。细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。