PrimeScript™ II Reverse Transcriptase酶试剂盒Takara Clontech

上海金畔生物科技有限公司代理Takara Clontech酶试剂盒全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

PrimeScript II Reverse Transcriptase
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 2690S PrimeScript II Reverse Transcriptase 2,000 U ¥300 PrimeScript™ II Reverse Transcriptase PrimeScript™ II Reverse Transcriptase PrimeScript™ II Reverse Transcriptase
Takara 2690A PrimeScript II Reverse Transcriptase 10,000 U ¥1,282
¥769
PrimeScript™ II Reverse Transcriptase PrimeScript™ II Reverse Transcriptase PrimeScript™ II Reverse Transcriptase
Takara 2690B (A × 4) PrimeScript II Reverse Transcriptase 10,000 U × 4 ¥4,617
¥2,770
PrimeScript™ II Reverse Transcriptase PrimeScript™ II Reverse Transcriptase PrimeScript™ II Reverse Transcriptase
Takara 2690C (A × 10) PrimeScript II Reverse Transcriptase 10,000 U × 10 ¥10,895
¥6,537
PrimeScript™ II Reverse Transcriptase PrimeScript™ II Reverse Transcriptase PrimeScript™ II Reverse Transcriptase

*红字为促销价格,促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

收藏产品 加入购物车

无标题文档

 
 
PrimeScript™ II Reverse Transcriptase PrimeScript™ II Reverse Transcriptase PrimeScript™ II Reverse Transcriptase PrimeScript™ II Reverse Transcriptase PrimeScript™ II Reverse Transcriptase
 
PrimeScript™ II Reverse Transcriptase
PrimeScript™ II Reverse Transcriptase  
PrimeScript™ II Reverse Transcriptase
 
 
■ 制品内容 (Code No.: 2690A)
PrimeScript II Reverse Transcriptase (200 U/μl) 10,000 U
5X PrimeScript II Buffer 500 μl
 
■ 制品说明
PrimeScript II Reverse Transcriptase在42℃条件下能够有效地合成低背景、高质量的cDNA,无需进行高温反转录反应,高温的反转录反应会导致RNA的降解,且由于引物的有效使用和辅助蛋白质的添加,避免了因RNA二级结构对cDNA合成的抑制及RT引物错配引起的非特异性延伸。辅助蛋白质完全抑制了由于反转录酶冰上放置引起的非特异性延伸反应,因此,即便是反应液配制到反转录反应开始要间隔一段时间,也不会抑制长链cDNA的合成。合成的cDNA可以广泛应用于2nd-strand合成、杂交、终点PCR和定量PCR,而且本酶特别适用于全长cDNA文库构建用的高质量cDNA合成等。
 
保存
-20℃。
 
起源
Purified from an E. coli strain expressing a recombinant enzyme.
 
活性定义
以poly (rA) ·oligo (dT)12-18 为模板/引物,在37℃的条件下,10分钟内掺入1 nmol [3H] dTTP所需要的酶量定义为1个活性单位(unit)。
 
用途
1st-Strand cDNA的合成。
·cDNA Probe的制备。
·RT-PCR。
 
 

PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)酶试剂盒Takara Clontech

上海金畔生物科技有限公司代理Takara Clontech酶试剂盒全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara RR047Q PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time) 10 Rxns ¥263 PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time) PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time) PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)
Takara RR047A PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time) 100 Rxns ¥1,963
¥1,178
PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time) PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time) PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)
Takara RR047B (A × 4) PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time) 100 Rxns × 4 ¥7,456
¥4,474
PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time) PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time) PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)

*红字为促销价格,促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

收藏产品 加入购物车

无标题文档

 
 
PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time) PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time) PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time) PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time) PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)
 
 
■ 制品内容 (Code No.: RR047A: 20 μl反应×100次量)
1. gDNA Eraser 100 μl
2. 5X gDNA Eraser Buffer*1
200 μl
3. PrimeScript RT Enzyme Mix I*2 100 μl
4. 5X PrimeScript Buffer 2(for Real Time)*3 400 μl
5. RT Primer Mix*4 400 μl
6. RNase Free dH2O 1 ml×2
7. EASY Dilution (for Real Time PCR)*5 1 ml
 
*1 5X gDNA Eraser Buffer在反转录反应前使用,请务必进行基因组DNA的除去反应。
*2 含有RNase Inhibitor。
*3 含有dNTP Mixture。
*4 含有Oligo dT Primer和Random 6 mers。
*5 制作标准曲线时梯度稀释cDNA或RNA标准品的稀释液。模板cDNA或RNA如果用水或TE Buffer稀释时,由于受Microtube吸附作用等的影响,往往不能准确地进行稀释,导致实验结果精度降低。使用本制品时,即使稀释至低浓度也能够进行准确地稀释,容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。本制品不影响反转录和PCR反应,用其稀释后的样品可直接使用。EASY Dilution (for Real Time PCR) (Code No. 9160/9160Q) 也可以单独购买。
注意:EASY Dilution (for Real Time PCR) 请与本公司Real Time PCR试剂组合使用,对于其他公司的同类制品的适用性本公司尚未进行确认。
 
■ 制品说明
为了准确地进行基因表达量分析,必须满足只有cDNA作为模板检出的先决条件,但Total RNA中常常混有基因组DNA,并可以直接作为PCR反应的模板进行扩增,因此会造成解析结果不准确。为了避免这种情况发生,通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上,使基因组DNA得不到扩增。但是,此方法不适合具有单个外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因,同时当基因组上有伪基因存在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析的生物种等也同样不适合于本方法。在这种情况下,我们常常需要对Total RNA样品进行DNase I处理,以除去残存的基因组DNA。而DNase I处理通常要进行复杂的纯化操作,同时会造成RNA的降解和损失。
PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因组DNA进行Real Time RT-PCR反应的专用反转录试剂。Kit中使用了具有较强DNA分解活性的gDNA Eraser,通过42℃,2 min即可除去基因组DNA。同时由于反转录试剂中含有抑制DNA分解酶活性的组分,经过gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行15 min的反转录反应合成cDNA,因此,20 min内即可迅速完成从基因组DNA去除到cDNA合成的全过程。
使用本制品合成的cDNA适用于嵌合法和探针法qPCR分析,可以根据实验目的,选择与TB Green® Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR820Q/A/B)*、TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420A/B)*、Probe qPCR Mix (Code No. RR391S/A/B) 组合使用。
*:Takara嵌合法Real Time PCR(qPCR)产品的名称从2017年12月下旬开始,将逐步变更为「TB Green系列」。产品Code、性能和原有产品相比没有变化,请继续放心使用。
产品名称将随新lot的产品逐步变更,产品网页或操作说明书可能会先于产品标签变更,望知悉!
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 试剂盒特长
1. 含有去除基因组DNA的gDNA Eraser,只需2 min即可除去基因组DNA。
2. 只需15 min即可高效合成Real Time PCR反应用模板cDNA,是进行2 Step Real Time RT-PCR反应的理想试剂。
3. 反转录引物使用了Random 6 mers和Oligo dT Primer混合的RT Primer Mix,可以均匀合成样品中的各种cDNA。
4. 本制品提供了TB Green qPCR分析法和探针qPCR分析法各自适合的反应体系,可以根据分析方法选择体系。
TB Green qPCR分析法和探针qPCR分析法区别如下:
(1) 反转录反应中RT Primer Mix的用量。
(2) 反转录反应中总RNA的用量。
5. Real Time RT PCR定量需要建立标准曲线,建立标准曲线的条件就是需要将总RNA和反转录cDNA稀释到较低的浓度。如果用水或TE Buffer稀释时,由于模板浓度低不稳定,因而会缩小曲线范围,结果准确度降低。本制品中附加了标准曲线制作用稀释液EASY Dilution (for Real Time PCR) ,将Total RNA或cDNA稀释至低浓度时也能够进行准确稀释,容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。
 
■ 注意事项
1.使用本制品合成的cDNA与TB Green关联制品组合使用时,建议使用:
TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus) (Code No.RR820Q/A/B)
TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420Q/A/B)
以上制品与本制品组合使用,可以得到可信度高的结果。
本制品与TB Green Fast qPCR Mix (Code No. RR430S/A/B) 组合使用时,有时反应性能不好,不推荐使用。
2. 当同时需要进行数次反应时,应先配制各种试剂的混合液 (Master Mix;其中包括RNase Free dH2O、Buffer、酶等),然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的试剂体积更准确,减少试剂损失,避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
3. gDNA Eraser和PrimeScript RT Enzyme Mix I 在使用前要小心地离心收集到反应管底部。由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取时应慢慢吸取。同时,要使用精确、量程适合的移液枪,并且不要使Tip插入液面过深,否则会因Tip壁粘着造成损失,而使酶量不足。
4. 5X gDNA Eraser Buffer和5X PrimeScript Buffer 2(for Real Time)在使用前需Vortex振荡混匀,轻轻离心后使用。
5. 分装试剂时务必使用新的枪头 (Tip),以防止样品间污染。
 
 

PrimeScript™ RT-PCR Kit酶试剂盒Takara Clontech

上海金畔生物科技有限公司代理Takara Clontech酶试剂盒全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

PrimeScript RT-PCR Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara RR014A PrimeScript RT-PCR Kit 50 Rxns ¥1,261 PrimeScript™ RT-PCR Kit PrimeScript™ RT-PCR Kit PrimeScript™ RT-PCR Kit
Takara RR014B (A × 4) PrimeScript RT-PCR Kit 50 Rxns × 4 ¥4,546 PrimeScript™ RT-PCR Kit PrimeScript™ RT-PCR Kit PrimeScript™ RT-PCR Kit
收藏产品 加入购物车

无标题文档

 
 
PrimeScript™ RT-PCR Kit PrimeScript™ RT-PCR Kit PrimeScript™ RT-PCR Kit PrimeScript™ RT-PCR Kit
 
 
■ 制品内容 (Code No. RR014A ; 50 次量*1)
PrimeScript RTase (for 2 Step) 25 μl
5 × PrimeScript Buffer 200 μl
RNase Inhibitor (40 U/μl) 25 μl
dNTP Mixture (10 mM each) 150 μl
Oligo dT Primer (2.5 μM) 50 μl
Random 6 mers (20 μM) 50 μl
TaKaRa Ex Taq HS (5 U/μl) 25 μl
10 × PCR BufferⅡ 250 μl
Control F-1 Primer*2 (20 μM) 10 μl
Control R-1 Primer*3 (20 μM) 10 μl
Positive Control RNA (2 × 105 copies/μl) 20 μl
RNase Free dH2O 1 ml
 
*1 反转录反应20 μl 、PCR反应50 μl体系时可使用50次。
*2 Positive Control RNA用上游引物。
*3 Positive Control RNA用下游引物。
 
 
■ 制品说明
PCR (Polymerase Chain Reaction;聚合酶链式反应) 是一种使用两条引物在目的DNA序列两侧扩增特异性DNA片段的过程。它是一种体外扩增DNA的简单而有效的方法,但RNA不能直接被扩增。经过反转录酶的作用把RNA反转录成cDNA后,PCR法便可应用于RNA的解析了。目前,此方法已广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。
PrimeScript RT-PCR Kit是具有良好的延伸性能与高扩增效率的2 Step RT-PCR试剂盒。反转录反应使用了Takara Bio Inc.特别开发的M-MLV由来的新型反转录酶PrimeScript RTase;PCR反应使用了扩增性能良好的Hot Start 型DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS。本试剂盒具有以下优点:
1. 进行高效的RT-PCR扩增。
2. 在标准的RNA反转录反应温度 (42℃) 下,便可使具有复杂结构的RNA进行良好的延伸,可以避免RNA在高温条件下的降解。
3. 能有效抑制非特异性的PCR扩增。
本试剂盒含有反转录反应及PCR扩增反应所需的全部试剂。
 
■ 各种引物的序列
引物名称 各引物序列
Random 6 mers
       pd (N)6
Oligo dT Primer
       Takara Bio特别设计的dT区域*
Control F-1 Primer
       5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′
Control R-1 Primer
       5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′
* 该序列和TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver. 3.0 (Code No. : RR019A/B) 的Oligo dT Adaptor Primer不同,不含有与M13 Primer M4匹配的序列。
 
■ Positive Control RNA
本试剂盒中的Control RNA是以pSPTet3质粒 (质粒中的SP6启动子下游插入长约1.4 kb的pBR322来源的DNA片段,其DNA片段上含有抗四环素基因) 为模板由SP6 RNA聚合酶经体外转录而得到的。
 
PrimeScript™ RT-PCR Kit
图1. Positive Control RNA:使用Control Primer可以扩增462 bp的DNA片段
 
■ 保存
-20℃。
 
■ RNA PCR 的原理
PrimeScript RT-PCR Kit首先用PrimeScript RTase将RNA合成cDNA,再取一部分1st strand cDNA作为模板,由TaKaRa Ex Taq HS进行PCR扩增。将RNA反转录成cDNA的引物可以使用Random 6 mers、Oligo dT Primer或特异性下游引物。
 
PrimeScript™ RT-PCR Kit
图2. PrimeScript RT-PCR Kit原理图
 
 
 
PrimeScript™ RT-PCR Kit
图3. PrimeScript RT-PCR Kit 的操作流程
 
■ 特点
RNA模板
      适用于所有RNA
扩增片段大小
      ~12 kb
反转录酶
      PrimeScript RTase (反转录反应最适温度42℃)
DNA Polymerase
      TaKaRa Ex Taq HS
RNase Inhibitor
      Kit中含有
合成第一条cDNA链的引物
      Random 6 mers、Oligo dT Primer和特异性下游引物
 
■ 反转录反应时Primer的选择
反转录引物的选择,应结合实验的具体情况,选择以下三种引物,即:Random 6 mers、Oligo dT Primer或特异性下游引物。对没有发夹结构的短链mRNA,上述三种引物都可以使用;一般情况下的反转录引物的选择请参照以下说明。
Random 6 mers
  适用于长的或具有Hairpin构造的RNA。包括rRNA、mRNA、tRNA等在内的所有RNA的反转录反应都可使用本引物。
Oligo dT Primer
  适用于具有PolyA Tail的RNA。(注意:原核生物的RNA、真核生物的rRNA、tRNA以及某些种类的真核生物的mRNA等不具有PolyA Tail)。
特异性下游引物
(PCR时的下游引物)
  必须与模板序列互补,需了解Target序列。
 
■ 使用注意
1. 当同时需要进行数次RT-PCR反应时,应先配制各种试剂的混合液,然后再分装到每个反应管中。这样,可使所取的试剂体积更准确,减少试剂损失,避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
2. 用PrimeScript RTase、RNase Inhibitor、TaKaRa Ex Taq HS等酶类时,应轻轻混匀,避免起泡;分取之前要小心地离心收集到反应管底部;由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取时应慢慢吸取。
3. 酶制品应在实验前才从-20℃中取出,使用后也应立即放入-20℃保存。
4. 为了防止Positive Control RNA分解,应尽量避免反复冻融。有条件的实验室最好保存于-70℃~-80℃。
5. 分装试剂时务必使用新的枪头,以防止样品间污染。
 
 

PrimeScript™ RT reagent Kit (Perfect Real Time)酶试剂盒Takara Clontech

上海金畔生物科技有限公司代理Takara Clontech酶试剂盒全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

PrimeScript RT reagent Kit (Perfect Real Time)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara RR037Q PrimeScript RT reagent Kit (Perfect Real Time) 20 Rxns ¥263 PrimeScript™ RT reagent Kit (Perfect Real Time) PrimeScript™ RT reagent Kit (Perfect Real Time) PrimeScript™ RT reagent Kit (Perfect Real Time)
Takara RR037A PrimeScript RT reagent Kit (Perfect Real Time) 200 Rxns ¥1,963
¥1,178
PrimeScript™ RT reagent Kit (Perfect Real Time) PrimeScript™ RT reagent Kit (Perfect Real Time) PrimeScript™ RT reagent Kit (Perfect Real Time)
Takara RR037B (A × 4) PrimeScript RT reagent Kit (Perfect Real Time) 200 Rxns × 4 ¥7,456
¥4,474
PrimeScript™ RT reagent Kit (Perfect Real Time) PrimeScript™ RT reagent Kit (Perfect Real Time) PrimeScript™ RT reagent Kit (Perfect Real Time)

*红字为促销价格,促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

收藏产品 加入购物车

无标题文档

 
 
PrimeScript™ RT reagent Kit (Perfect Real Time) PrimeScript™ RT reagent Kit (Perfect Real Time) PrimeScript™ RT reagent Kit (Perfect Real Time) PrimeScript™ RT reagent Kit (Perfect Real Time) PrimeScript™ RT reagent Kit (Perfect Real Time)
 
 
■ 制品内容 (Code No.: RR037A)
5X PrimeScript Buffer (for Real Time)*1 400 μl
PrimeScript RT Enzyme Mix I*2 100 μl
Oligo dT Primer (50 μM) 100 μl
Random 6 mers (100 μM) 400 μl
RNase Free dH2O 1 ml
EASY Dilution (for Real Time PCR)*3 1 ml
 
*1 含有dNTP Mixture 和 Mg2+
*2 含有RNase Inhibitor。
*3 用于制作标准曲线时梯度稀释total RNA和cDNA。EASY Dilution (for Real Time PCR) 可以将其稀释至很低浓度也能够得到准确地稀释。本制品不影响反转录和PCR反应,用其稀释后的样品可直接使用。EASY Dilution (for Real Time PCR) 也可以单独购买(Code No. 9160/9160Q)。
注意:EASY Dilution请与本公司Real Time PCR试剂组合使用,对于其他公司的同类制品的适用性本公司尚未进行确认。
 
■ 制品说明
本制品是Real Time RT-PCR用的理想反转录反应试剂。使用具有较强延伸能力的PrimeScript RTase可以在较短时间内高效合成Real Time PCR用cDNA。操作简单,适合进行高通量分析。进行2 Step Real Time RT-PCR反应时,与TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)(Code No. RR820Q/A/B)*、TB Green Fast qPCR Mix (Code No. RR430S/A/B)* , TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420Q/A/B)* 、 或Probe qPCR Mix (Code No. RR391S/A/B) 试剂配合使用,能进行高性能的基因表达分析。 本制品提供了TB Green分析法和探针分析法各自适合的反应体系,可以根据分析方法选择体系。
*:Takara嵌合法Real Time PCR(qPCR)产品的名称从2017年12月下旬开始,将逐步变更为「TB Green系列」。产品Code、性能和原有产品相比没有变化,请继续放心使用。
产品名称将随新lot的产品逐步变更,产品网页或操作说明书可能会先于产品标签变更,望知悉!
 
■ 保存
-20℃
 
■ 试剂盒特长
1. 可以快速、高效合成Real Time PCR用cDNA,是进行2 Step Real Time RT-PCR反应的理想试剂。
2. 含有Oligo dT Primer和Random 6 mers两种反转录引物,可根据实际情况区别使用。反转录反应可以使用Random 6 mers或Oligo dT Primer,也可以Oligo dT Primer和Random 6 mers同时使用。只扩增一种目的基因时,也可以使用Specific Primer作为反转录引物。
3. 本制品提供了TB Green qPCR分析法和探针qPCR分析法各自适合的反应体系,可以根据分析方法选择体系。
    注意:以下是TB Green qPCR分析法和探针qPCR分析法进行反转录实验的区别
    ① 用于反转录实验RT Primer Mix添加量。
    ② 用于反转录实验total RNA的添加量。
4. Real Time RT PCR定量需要建立标准曲线,建立标准曲线的条件就是需要将总RNA和反转录cDNA稀释到较低的浓度。如果用水或TE Buffer稀释时,由于模板浓度低不稳定,因而会缩小曲线范围,结果准确度降低。本制品中附加了标准曲线制作用稀释液EASY Dilution (for Real Time PCR),将Total RNA或cDNA稀释至低浓度时也能够进行准确稀释,容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。
 
■ 使用注意
1. 当同时需要进行数次反应时,应先配制各种试剂的混合液 (Master Mix;其中包括RNase Free dH2O、Buffer、酶等),然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的试剂体积更准确,减少试剂损失,避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
2. 用PrimeScript RT Enzyme Mix I 时使用前要小心地离心收集到反应管底部。由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取时应慢慢吸取。同时,要使用精确、量程适合的移液枪,并且不要使Tip插入液面过深,否则会因Tip壁粘着造成损失。
3. 分装试剂时务必使用新的枪头 (Tip),以防止样品间污染。
 
 
Technote:
  Fast reverse transcription from mouse blood samples using
  PrimeScript Reverse Transcriptase
   
 
  Fast synthesis of cDNA templates for real-time RT-PCR
 

PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit酶试剂盒Takara Clontech

上海金畔生物科技有限公司代理Takara Clontech酶试剂盒全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

PrimeScript Double Strand cDNA Synthesis Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 6111A PrimeScript Double Strand cDNA Synthesis Kit 10 Rxns ¥1,582 PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit
收藏产品 加入购物车
 
■ 制品内容 (10 次量)
PrimeScript RTase (200 U/μl) 10 μl
RNase Inhibitor (40 U/μl) 10 μl
Oligo(dT)18 Primer (1 μg/μl) 20 μl
Random Primer (9mer) (0.3 μg/μl) 20 μl
5 × 1st Strand Synthesis Buffer 40 μl
dNTP Mixture (10 mM each) 40 μl
E. coli RNase H/E. coli DNA Ligase Mixture 20 μl
E. coli DNA Polymerase I (20 U/μl) 20 μl
5 × 2nd Strand Synthesis Buffer 300 μl
T4 DNA Polymerase (1 U/μl) 40 μl
RNase free dH2O 600 μl × 2
Control RNA (1 μg/μl)* 5 μl
 
*【Control RNA】
本试剂盒中的Control RNA是以pSPTet3质粒 (质粒中的SP6启动子下游插入长约1.4 kb的pBR322来源的DNA片段,其DNA片段上含有抗四环素基因) 为模板由SP6 RNA聚合酶经体外转录而得到的。Control RNA (约1.4 kb) 是带有30个A碱基的具有poly (A)+尾的RNA。以这种RNA为模板合成的双链cDNA插入到适当的质粒载体中,如果确实为全长的cDNA,那这种质粒便可获得四环素抗性。
 
■ 制品说明
以原核细胞或者真核细胞的mRNA为模板合成cDNA后再进行cDNA的克隆,是分子生物学研究中的一种重要手段。利用这一技术可以容易地进行基因的构造解析和目的蛋白质的表达研究等。
一般来说,cDNA的合成以及cDNA文库的利用方法是:在合成与目的mRNA互补的双链cDNA后,将双链cDNA与细菌或病毒来源的载体进行重组,再将重组体导入细菌或真核细胞内进行复制、扩增cDNA,然后再对cDNA进行解析,或者再进一步进行体外转录或体外翻译等。
本试剂盒主要以来自植物和动物的poly (A)+RNA合成双链DNA 。
本试剂盒主要是以Gubler-Hoffman法为基础构建的,其原理见图1、图2,简要说明如下:
1. 在PrimeScript RTase的作用下,利用Oligo(dT)18 Primer或者Random Primer合成cDNA的第一条链 。
2. 使用E. coli RNase H使DNA-RNA杂合体中的RNA链形成单链切口 (Nick) 。在E. coli DNA Polymerase I 与E. coli DNA Ligase的作用下,RNA链被DNA链置换,合成cDNA的第二条链。
3. 使用T4 DNA Polymerase使双链cDNA片段末端平滑。
 
■ cDNA合成原理图
 
PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit
图1 使用Oligo(dT)18 Primer时的cDNA合成
 
 
PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit
图2 使用Random Primer时的cDNA合成
 
■ 保存
-20℃。
 
■ Troubleshooting
如果实验不能正常进行,请按照说明书内容确认实验操作,检验以下几点:
1. Control RNA的使用
本试剂盒中的Control RNA (pSP Tet3 Poly(A)+ mRNA) 可以用于对照实验,并确认1st Strand cDNA或2nd Strand cDNA的合成反应是否顺利进行。
2. mRNA的纯度检测
为了能够获得更高的cDNA合成效率,尽可能使用完整的mRNA是非常重要的。在进行cDNA合成反应前,可以通过测定260 nm和280 nm的吸光度 (A260/A280在1.8~2.1是理想值) ,或使用琼脂糖凝胶电泳法对RNA的纯度进行检测。
3. RNase的污染
实验时要注意一定不能在mRNA的样品中混入RNase。实验用的器具、试剂等应尽可能进行高温灭菌处理。操作过程要佩戴手套。