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PrimeScript™ RT reagent Kit (Perfect Real Time)酶试剂盒Takara Clontech

发表于2024年10月11日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理Takara Clontech酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

PrimeScript™ RT reagent Kit (Perfect Real Time)
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	RR037Q	PrimeScript™ RT reagent Kit (Perfect Real Time)	20 Rxns	￥263
Takara	RR037A	PrimeScript™ RT reagent Kit (Perfect Real Time)	200 Rxns	￥1,963 ￥1,178
Takara	RR037B (A × 4)	PrimeScript™ RT reagent Kit (Perfect Real Time)	200 Rxns × 4	￥7,456 ￥4,474

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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■ 制品内容 (Code No.: RR037A)

5X PrimeScript Buffer (for Real Time)*1 400 μl PrimeScript RT Enzyme Mix I*2 100 μl Oligo dT Primer (50 μM) 100 μl Random 6 mers (100 μM) 400 μl RNase Free dH2O 1 ml EASY Dilution (for Real Time PCR)*3 1 ml   *1 含有dNTP Mixture 和 Mg2+。 *2 含有RNase Inhibitor。 *3 用于制作标准曲线时梯度稀释total RNA和cDNA。EASY Dilution (for Real Time PCR) 可以将其稀释至很低浓度也能够得到准确地稀释。本制品不影响反转录和PCR反应，用其稀释后的样品可直接使用。EASY Dilution (for Real Time PCR) 也可以单独购买（Code No. 9160/9160Q）。 注意：EASY Dilution请与本公司Real Time PCR试剂组合使用，对于其他公司的同类制品的适用性本公司尚未进行确认。

■ 制品说明

本制品是Real Time RT-PCR用的理想反转录反应试剂。使用具有较强延伸能力的PrimeScript RTase可以在较短时间内高效合成Real Time PCR用cDNA。操作简单，适合进行高通量分析。进行2 Step Real Time RT-PCR反应时，与TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)(Code No. RR820Q/A/B)*、TB Green Fast qPCR Mix (Code No. RR430S/A/B)* ， TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420Q/A/B)* 、 或Probe qPCR Mix (Code No. RR391S/A/B) 试剂配合使用，能进行高性能的基因表达分析。 本制品提供了TB Green分析法和探针分析法各自适合的反应体系，可以根据分析方法选择体系。 *：Takara嵌合法Real Time PCR（qPCR）产品的名称从2017年12月下旬开始，将逐步变更为「TB Green系列」。产品Code、性能和原有产品相比没有变化，请继续放心使用。 产品名称将随新lot的产品逐步变更，产品网页或操作说明书可能会先于产品标签变更，望知悉！   ■ 保存 -20℃。   ■ 试剂盒特长 1. 可以快速、高效合成Real Time PCR用cDNA，是进行2 Step Real Time RT-PCR反应的理想试剂。 2. 含有Oligo dT Primer和Random 6 mers两种反转录引物，可根据实际情况区别使用。反转录反应可以使用Random 6 mers或Oligo dT Primer，也可以Oligo dT Primer和Random 6 mers同时使用。只扩增一种目的基因时，也可以使用Specific Primer作为反转录引物。 3. 本制品提供了TB Green qPCR分析法和探针qPCR分析法各自适合的反应体系，可以根据分析方法选择体系。     注意：以下是TB Green qPCR分析法和探针qPCR分析法进行反转录实验的区别     ① 用于反转录实验RT Primer Mix添加量。     ② 用于反转录实验total RNA的添加量。 4. Real Time RT PCR定量需要建立标准曲线，建立标准曲线的条件就是需要将总RNA和反转录cDNA稀释到较低的浓度。如果用水或TE Buffer稀释时，由于模板浓度低不稳定，因而会缩小曲线范围，结果准确度降低。本制品中附加了标准曲线制作用稀释液EASY Dilution (for Real Time PCR)，将Total RNA或cDNA稀释至低浓度时也能够进行准确稀释，容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。   ■ 使用注意 1. 当同时需要进行数次反应时，应先配制各种试剂的混合液 (Master Mix；其中包括RNase Free dH2O、Buffer、酶等)，然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。 2. 用PrimeScript RT Enzyme Mix I 时使用前要小心地离心收集到反应管底部。由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。同时，要使用精确、量程适合的移液枪，并且不要使Tip插入液面过深，否则会因Tip壁粘着造成损失。 3. 分装试剂时务必使用新的枪头 (Tip)，以防止样品间污染。     Technote：   Fast reverse transcription from mouse blood samples using   PrimeScript Reverse Transcriptase         Fast synthesis of cDNA templates for real-time RT-PCR

PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit酶试剂盒Takara Clontech

发表于2024年9月30日由上海金畔生物科技有限公司

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PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	6111A	PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit	10 Rxns	￥1,582

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■ 制品内容 (10 次量)

PrimeScript RTase (200 U/μl) 10 μl RNase Inhibitor (40 U/μl) 10 μl Oligo(dT)18 Primer (1 μg/μl) 20 μl Random Primer (9mer) (0.3 μg/μl) 20 μl 5 × 1st Strand Synthesis Buffer 40 μl dNTP Mixture (10 mM each) 40 μl E. coli RNase H/E. coli DNA Ligase Mixture 20 μl E. coli DNA Polymerase I (20 U/μl) 20 μl 5 × 2nd Strand Synthesis Buffer 300 μl T4 DNA Polymerase (1 U/μl) 40 μl RNase free dH2O 600 μl × 2 Control RNA (1 μg/μl)* 5 μl   *【Control RNA】 本试剂盒中的Control RNA是以pSPTet3质粒 (质粒中的SP6启动子下游插入长约1.4 kb的pBR322来源的DNA片段，其DNA片段上含有抗四环素基因) 为模板由SP6 RNA聚合酶经体外转录而得到的。Control RNA (约1.4 kb) 是带有30个A碱基的具有poly (A)+尾的RNA。以这种RNA为模板合成的双链cDNA插入到适当的质粒载体中，如果确实为全长的cDNA，那这种质粒便可获得四环素抗性。

■ 制品说明

以原核细胞或者真核细胞的mRNA为模板合成cDNA后再进行cDNA的克隆，是分子生物学研究中的一种重要手段。利用这一技术可以容易地进行基因的构造解析和目的蛋白质的表达研究等。 一般来说，cDNA的合成以及cDNA文库的利用方法是：在合成与目的mRNA互补的双链cDNA后，将双链cDNA与细菌或病毒来源的载体进行重组，再将重组体导入细菌或真核细胞内进行复制、扩增cDNA，然后再对cDNA进行解析，或者再进一步进行体外转录或体外翻译等。 本试剂盒主要以来自植物和动物的poly (A)+RNA合成双链DNA 。 本试剂盒主要是以Gubler-Hoffman法为基础构建的，其原理见图1、图2，简要说明如下： 1. 在PrimeScript RTase的作用下，利用Oligo(dT)18 Primer或者Random Primer合成cDNA的第一条链 。 2. 使用E. coli RNase H使DNA-RNA杂合体中的RNA链形成单链切口 (Nick) 。在E. coli DNA Polymerase I 与E. coli DNA Ligase的作用下，RNA链被DNA链置换，合成cDNA的第二条链。 3. 使用T4 DNA Polymerase使双链cDNA片段末端平滑。   ■ cDNA合成原理图

图1 使用Oligo(dT)18 Primer时的cDNA合成

图2 使用Random Primer时的cDNA合成

■ 保存

-20℃。

■ Troubleshooting

如果实验不能正常进行，请按照说明书内容确认实验操作，检验以下几点： 1. Control RNA的使用 本试剂盒中的Control RNA (pSP Tet3 Poly(A)+ mRNA) 可以用于对照实验，并确认1st Strand cDNA或2nd Strand cDNA的合成反应是否顺利进行。 2. mRNA的纯度检测 为了能够获得更高的cDNA合成效率，尽可能使用完整的mRNA是非常重要的。在进行cDNA合成反应前，可以通过测定260 nm和280 nm的吸光度 (A260/A280在1.8～2.1是理想值) ，或使用琼脂糖凝胶电泳法对RNA的纯度进行检测。 3. RNase的污染 实验时要注意一定不能在mRNA的样品中混入RNase。实验用的器具、试剂等应尽可能进行高温灭菌处理。操作过程要佩戴手套。

PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus)酶试剂盒Takara Clontech

发表于2024年9月18日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理Takara Clontech酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus)
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	RR057A	PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus)	50 Rxns	￥1,582 ￥1,107
Takara	RR057B (A × 4)	PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus)	50 Rxns × 4	￥5,697 ￥3,988

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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■ 制品内容 (50 次量)

PrimeScript 1 Step Enzyme Mix 100 μl 2X 1 Step Buffer (Dye Plus) 625 μl × 2 Control F-1 Primer (20 μM)*1 20 μl Control R-1 Primer (20 μM)*2 20 μl Positive Control RNA (2×105 Copies/μl) 20 μl RNase Free dH2O 625 μl × 2   *1 Positive Control RNA用上游引物。 *2 Positive Control RNA用下游引物。

■ 制品说明

PCR（Polymerase Chain Reaction；聚合酶链式反应）是一种体外扩增DNA的简单而有效的方法。虽然原理上PCR法是扩增DNA，RNA不能直接被扩增，但是经过反转录酶的作用把RNA反转录成cDNA后，PCR法便可应用于RNA的解析了。目前，RT-PCR方法已广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。 本试剂盒采用了一步（One Step）RT-PCR法。RNA→cDNA→PCR反应操作在同一反应体系中连续进行，反应中途不需添加任何试剂，避免污染危害。同时反应液中已含有电泳时所必需的色素试剂（蓝色和黄色色素），反应后可以直接进行电泳。反应液为鲜艳的绿色（Emerald Green），电泳时指示效果明显，容易观察样品的电泳位置。反转录反应使用了具有很强延伸能力的反转录酶PrimeScript RTase。该反转录酶对具有复杂二级结构的RNA模板也具有很强的延伸能力；PCR反应使用了扩增性能优越的Hot Start型DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS，大大提高了本试剂盒的扩增性能和反应特异性。反应试剂已优化，以实现与不含染料和loading buffer的传统RT-PCR系统具有相同反应效果。在本试剂盒中，已将PrimeScript RTase、TaKaRa Ex Taq HS、RNase Inhibitor以及One Step RT-PCR用稳定剂等配制成了Premix型的PrimeScript 1 Step Enzyme Mix；同时把反应用Buffer、dNTP以及One Step Enhancer Solution配制成了Premix型的2×1 Step Buffer（Dye Plus）的形式，使实验操作时的反应液配制和电泳检测更为简单方便。 本试剂盒具有以下特点： 1. 进行高效的RT-PCR扩增。 2. 反应液制备简单，可直接进行凝胶电泳。 3. 反转录温度可以设定为50℃，能够有效抑制非特异性扩增。 4. 可减少由于错配和引物二聚体造成的非特异性反应。 本试剂盒中含有进行One Step RT-PCR反应用的全部试剂，可以方便有效地对RNA进行扩增分析。

■ 各种引物的序列

引物名称 各引物序列   Control F-1 Primer        5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′   Control R-1 Primer        5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′

■ Positive Control RNA

本试剂盒中的Control RNA是以pSPTet3质粒 (质粒中的SP6启动子下游插入长约1.4 kb的pBR322来源的DNA片段，其DNA片段上含有抗四环素基因) 为模板由SP6 RNA聚合酶经体外转录而得到的。

图1. Positive Control RNA：使用Control Primer可以扩增462 bp的DNA片段

■ 原理

PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2（Dye Plus）可在同一反应管中连续进行由PrimeScript RTase将RNA反转录为cDNA，再由TaKaRa Ex Taq HS扩增此cDNA的RT-PCR反应。

图2. PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus) 原理图

■ 保存

-20℃。

■ 试剂盒特点

RNA模板   适用于所有RNA        扩增片段大小   ～8 kb   PrimeScript 1 Step Enzyme Mix   PrimeScript RTase   DNA Polymerase (TaKaRa Ex Taq HS)   RNase Inhibitor   2 × 1 Step Buffer (Dye Plus)   含有反应Buffer   dNTP Mixture (终浓度400 μM)   One Step Enhancer Solution   色素、比重剂   1st strand cDNA合成用引物   特异性下游PCR Primer (Oligo-dT Primer和 Random引物不能使用)        操 作   在同一反应管中连续进行RT-PCR反应

■ 使用注意

1. 当同时需要进行数次RT-PCR反应时，应先配制各种试剂的混合液，然后再分装到每个反应管中。这样，可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。

2. 使用PrimeScript 1 Step Enzyme Mix时，应轻轻混匀，避免起泡；分取之前要小心地离心收集到反应管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。

3. 2 X 1 Step Buffer (Dye Plus) 使用前用Vortex充分混匀，离心后使用。

4. 酶制品应在实验前才从-20℃中取出，使用后也应立即放回-20℃中保存。

5. 为了防止Positive Control RNA分解，应尽量避免反复冻融。有条件的实验室最好保存于-70℃～-80℃。

6. 分装试剂时务必使用新的枪头，以防止样品间污染。

7. 使用本试剂盒进行反转录反应时必须使用特异性的反转录引物，Random Primer、Oligo dT Primer不能使用。

PrimeScript™ High Fidelity RT-PCR Kit酶试剂盒Takara Clontech

发表于2024年9月17日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理Takara Clontech酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

PrimeScript™ High Fidelity RT-PCR Kit
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	R022A	PrimeScript™ High Fidelity RT-PCR Kit	50 Rxns	￥1,351
Takara	R022B (A × 4)	PrimeScript™ High Fidelity RT-PCR Kit	50 Rxns × 4	￥4,866

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■ 制品内容 (Code No.: R022A : 50 次量*1)

PrimeScript RTase (for 2 step) 25 μl 5×PrimeScript Buffer 200 μl RNase Inhibitor (40 U/μl) 25 μl dNTP Mixture (10 mM each) 50 μl Oligo dT Primer (2.5 μM) 50 μl Random 6 mers (20 μM) 50 μl PrimeSTAR Max Premix (2×) 625 μl × 2 Control F-1 Primer*2 (20 μM) 10 μl Control R-1 Primer*3 (20 μM) 10 μl Positive Control RNA (2×105 copies/μl) 20 μl RNase Free dH2O 1 ml     *1 反转录反应20 μl、PCR反应50 μl，2 Step RT-PCR时可使用50次。 *2 Positive Control RNA用上游引物。 *3 Positive Control RNA用下游引物。   Limited Use Label License: [M54]

■ 制品说明

PCR (Polymerase Chain Reaction；聚合酶链式反应) 是一种体外扩增目的DNA的方法。虽然原理上PCR法是扩增DNA，RNA不能直接被扩增，但是经过反转录酶的作用将RNA反转录成cDNA后进行扩增 (RT-PCR)，PCR法便可应用于RNA的解析了。目前，此方法已广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。 PrimeScript High Fidelity RT-PCR Kit是一种对Total RNA及mRNA合成cDNA时具有高保真性的RT-PCR用试剂盒。 本试剂盒中使用的反转录酶是Takara改良的M-MLV新型反转录酶PrimeScript RTase，PCR时使用了对cDNA扩增时具有很高保真性的DNA聚合酶PrimeSTAR MAX DNA Polymerase。因PrimeSTAR MAX是兼具高保真性与高扩增效率的预混型酶，模板浓度适用范围广，可用于高保真性的cDNA克隆等重要反应中。 2 Step RT-PCR作为本试剂盒的标准操作流程，2 Step RT-PCR操作流程具有以下优点: 1. 能够高效率地获得高保真性的RT-PCR扩增产物。 2. 在42℃条件下反转录反应也可以使具有复杂结构的RNA进行良好的延伸。 3. 反应体系中Total RNA的使用范围非常宽广，便于使用。 本试剂盒含有反转录反应及PCR扩增反应所需要的全部试剂。并且，也可以进行1 Step RT-PCR反应。   ■ 保存 -20℃。 注意：PrimeSTAR MAX Premix (2×) 反复冻融25次后，已确认其活性没有发生改变，但要注意尽量避免冻融次数过多。

■ 试剂盒特点

使用2 Step RT-PCR标准操作流程时

RNA模板   适用于所有RNA        扩增片段大小   6 kb产物        反转录酶   PrimeScript RTase (反应温度在42℃)        DNA Polymerase   PrimeSTAR Max DNA Polymerase (2×premix)        RNase Inhibitor   必须使用 (Kit中含有) 1st strand cDNA合成用引物   Random 6 mers、Oligo dT Primer、特异性下游引物可供选择

使用1 Step RT-PCR操作流程时

RNA模板   适用于所有RNA        扩增片段大小   6 kb产物        反转录酶   PrimeScript RTase (反应温度50℃)        DNA Polymerase   PrimeSTAR Max DNA Polymerase (2×premix)        RNase Inhibitor   必须使用 (Kit中含有) 1st strand cDNA合成用引物   使用特异性下游引物 (PCR扩增反应用反义链引物)   (不可使用Random 6 mers及Oligo dT Primer)        操 作   在同一个反应管中可连续进行RT-PCR反应

One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix (or with UNG)酶试剂盒Takara Clontech

发表于2024年8月1日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理Takara Clontech酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix (or with UNG)
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	RR600A	One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix	200 Rxns	￥2,878 ￥1,439
Takara	RR600B (A × 5)	One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix	200 Rxns × 5	￥13,670 ￥6,835
Takara	RR601A	One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix, with UNG	200 Rxns	￥3,118 ￥1,559
Takara	RR601B (A × 5)	One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix, with UNG	200 Rxns × 5	￥14,810 ￥7,405

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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· 完全premix型、操作简单、probe法One Step RT-qPCR。 · 卓越的抗反应阻碍物能力、粗提样品可以使用本产品 · 新增UNG版本，可防止假阳性产生

■ 制品内容

One Step PrimeScript III RT-qPCR Mix (Code No.: RR600A，200次，25 μl反应体系)

1. One Step PrimeScript III RT-qPCR Mix（2×） 625 μl × 4 2. RNase Free Water 1.25 ml × 2 3. ROX Reference Dye（50×conc.）* 100 μl 4. ROX Reference Dye II（50×conc.）* 100 μl   One Step PrimeScript III RT-qPCR Mix with UNG (Code No.: RR601A，200次，25 μl反应体系) 1. One Step PrimeScript III RT-qPCR Mix, with UNG（2×） 625 μl × 4 2. RNase Free Water 1.25 ml × 2 3. ROX Reference Dye（50×conc.）* 100 μl 4. ROX Reference Dye II（50×conc.）* 100 μl   * 使用Applied Biosystems Real-Time PCR仪器等，需要进行孔与孔之间的荧光信号校正时添加该试剂。   ◆ 需要使用ROX Reference Dye (50×) 校正的仪器 Applied Biosystems 7900HT/7300 Real-Time PCR System StepOnePlus Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific) ◆ 需要使用ROX Reference Dye II (50×) 校正的仪器 Applied Biosystems 7500/7500 Fast Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific) ◆ 不需要使用ROX Reference Dye校正的仪器 Thermal Cycler Dice Real Time System系列 LightCycler/LightCycler 480 system (Roche Diagnostics) CFX96 Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad)

■ 制品说明

本制品是采用探针法进行1 Step Real Time RT-PCR的专用premix试剂。本制品将反转录酶和PCR酶及反应用buffer预先配制成premix形式，由于RT-PCR反应在单个反应管中连续进行，因而，操作更简便，同时降低了污染的风险。反转录酶采用了耐热性高的PrimeScript III RTase，且即使在反应阻害物存在的情况下也能够有效合成cDNA。此外，使用该试剂，也可以实现多个反应同时进行的多重qPCR。为防止PCR反应时的【carryover contamination】，可以使用添加有UNG的One Step PrimeScript III RT-qPCR Mix, with UNG (Code No. RR601A/B)。通过使用该制品，能够更简便、准确地实现RNA/DNA病毒的快速检出及mRNA的表达分析。   本制品适用于Takara公司Thermal Cycler Dice Real Time System仪器，已确认以下Real Time PCR仪器都适用。 · Thermal Cycler Dice Real Time System III（Code No. TP950/TP970/TP980/TP990） · Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific） · LightCycler 96 System（Roche Diagnostics） · CFX96 Real-Time PCR Detection System（Bio-Rad）等   注：采用嵌合荧光法（TB Green）进行1 Step Real Time RT-PCR时， 请使用：One Step TB Green PrimeScript PLUS RT-PCR Kit (Perfect Real Time)（Code No. RR096A） 或：One Step TB Green PrimeScript RT-PCR Kit II (Perfect Real Time)（Code No. RR086A）。   ■ 特点 1. 通过One Step RT-qPCR可快速且准确地进行RNA病毒等的分析 2. 由于本制品对各种反应阻害物有很高的耐受性，多数情况下简易提取的粗提RNA起始也能够检出。但是，需要注意的是如果出现不能检出的情况或需要更高准确度及更稳定的分析结果时，需要使用纯度更高的RNA样品。培养细胞及组织样品起始的高纯度total RNA的制备推荐以下kit：TaKaRa MiniBEST Universal RNA Extraction Kit（Code No. 9767）、RNAiso Plus（Code No. 9108／9109）、TaKaRa MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0（Code No. 9766）等