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EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶 货 号 #M0646M-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 基因编辑 – 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶                              收藏

EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶 货 号 #M0646M EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶 货 号 #M0646M EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶 货 号 #M0646M EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶 货 号 #M0646M

货 号
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#M0646M
2,000 pmol
7,199.00
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#M0646T
400 pmol
1,799.00
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特性

· 双链 DNA 位点特异性切割
·    基因组编辑

概述：

EnGen Cas9 核酸酶 NLS, S. pyogenes, 是一种 RNA 介导的核酸内切酶，可以催化双链 DNA 的特异位点切割。其识别 PAM（Protospacer Adjacent Motif）序列的 NGG 处，在靶序列的 3 个碱基内进行切割。PAM 序列的 NGG 必须连在基因编辑靶标位点之后，位于与 sgRNA 互补的 DNA 的对链上。在 EnGen Cas9 核酸酶 NLS, S. pyogenes 蛋白质的 N-端和 C-端都含有猴病毒40 (SV40) T 抗原的核定位序列 (NLS)。

来源：

 重组 E. coli 菌株，含有克隆自酿脓链球菌（Streptococcus pyogenes）的 Cas9 基因，在其编码蛋白的 N-端和 C-端都含有猿猴病毒 40（SV40）抗原的核定位序列（NLS），N-端同时带有 6X His标签。

反应条件：

1× Cas9 核酸酶反应缓冲液
37℃ 孵育
 
 

质保声明：

EnGen Cas9 核酸酶 NLS，S. pyogenes 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com 查询。

浓度：

20 μM

参考文献

 关于该酶特性和产品应用的参考文献，请登陆www.neb.com 或 www.neb-china.com。

EnGen® 突变检测试剂盒 货 号 #E3321S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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EnGen® 突变检测试剂盒                              收藏

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#E3321S
25次反应
2,569.00
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特性

· 基于 T7 核酸内切酶的基因编辑检测

概述

EnGen 基因编辑突变检测试剂盒为检测基因编辑效率提供一整套的试剂。试剂盒操作的第一步，首先使用
Q5 热启动超保真聚合酶 2× 预混液从待测细胞中扩增出目的基因组的靶标区域（即通过 CRISPR/Cas9、
TALENs或 ZFN等方法进行了基因编辑的区域)，经退火、延伸步骤后，形成异源双链 DNA。在扩增子池中经过多轮循环后，基因插入和缺失(Indels)等造成的突变得到富集。第二步，将退火后的 PCR 产物用 EnGen T7 核酸内切酶 I 进行切割。 EnGen T7 核酸内切酶 I 是一种结构特异性酶，可有效识别大于1个碱基的基因错配。当错配出现时，DNA 分子的两条链被切割从而形成较小的片段。分析片段图谱可以对基因编辑实验的效率进行评估。
 
EnGen 基因编辑突变检测试剂盒包含一组对照模板和引物预混液，可用作 PCR 反应及 T7 核酸内切酶 I 消化实验的对照。对照模板和引物预混液中含有 2 种对照质粒和 1 对对照引物。经 PCR 扩增、变性、退火后，部分会形成含有10个碱基的插入突变，此种异源双链 DNA 正是 T7 核酸内切酶 I 的底物，600 bp 的 DNA 会被切割成 200 bp 和 400 bp 的两个片段；而同源双链 DNA 则不被 T7 核酸内切酶 I 切割。通过琼脂糖凝胶电泳或片段分析设备可以非常方便的分辨出同源（野生型）和异源（突变）片段。
 
试剂盒的实验流程经过优化，通过 Q5 热启动超保真聚合酶 2× 预混液扩增得到的 PCR 产物可以不经纯化而直接用 T7 核酸内切酶 I 进行消化。 异源双链DNA 分子只需 15 分钟就可以被完全切割，随后用蛋白酶 K 将反应终止。 此外， Q5 热启动超保真聚合酶 2× 预混液还可以用于优化靶点扩增的实验 。
 
图1： 实验流程

EnGen® 突变检测试剂盒 货 号 #E3321S

将引物设计在已完成基因编辑位点的两侧，PCR 产物变性、退火后会生成三种结构。其中一种结构能够被 T7 核酸内切酶 I 切割（多于1个碱基错配的双链 DNA），经电泳分离和片段分析后，估算出基因编辑效率。

Engen 突变检测试剂盒组分

– Q5 热启动超保真聚合酶 2X 预混液
– NEBuffer 2
– EnGen T7 核酸内切酶 I
– 对照模板和引物预混液
– 蛋白酶 K.，分子生物级
– Quick-Load® 紫色 2-Log DNA Ladder （0.1 – 10.0 kb）
– 紫色凝胶上样染料 6X，无 SDS

参考文献

 关于该酶特性和产品应用的参考文献，请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com 查询。

EnGen® sgRNA 合成试剂盒，S. pyogenes 货 号 #E3322S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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EnGen® sgRNA 合成试剂盒，S. pyogenes                              收藏

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#E3322S
20 rxns
5,139.00
有
无
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有

#E3322V
10 rxns
2,699.00
无
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无
无
无

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相关产品

紫色凝胶上样染料 6X
2-Log DNA Ladder（0.1-10.0kb）
低分子量 ssRNA Ladder
RNA 上样染料（2X）

特性：

一个小时甚至更短时间内快速合成微克级的 sgRNA
EnGen® sgRNA 合成试剂盒，S. pyogenes 货 号 #E3322S
 

概述

EnGen™ sgRNA 合成试剂盒, S. pyogenes 能简单快速合成 sgRNA 。利用试剂盒提供的试剂和使用者自己设计的特异性 DNA 序列，单管反应 30 分钟就能获得大量 sgRNA 。
自然界中，S. pyogenes Cas9 的启动与 2 种 RNA 有关。及 crRNA 和 trRNA。crRNA 又称CRISPR RNA，包含大约 20 个核苷酸，位于PAM （Protospacer Adjacent Motif)  NGG 序列的上游，与目标 DNA 反义链同源互补。另一种是 tracrRNA  又称  transactivating crRNA， tracrRNA 序列的一部分与 crRNA 互补，所形成的互补序列及二级结构可被 Cas9 识别。在实际操作中，将 tracrRNA  和 crRNA 的序列进行整合，形成一条长片段单链指导 RNA ( sgRNA)  , 并与 Cas 9 形成复合体，识别并切割目标 DNA。
在 EnGen 2X sgRNA 反应混合液中，含有能被 S. pyogenes Cas 9 识别并起支架作用的特异性序列，该序列的一部分能与使用者设计的目标特异序列部分重叠。退火形成互补链后由 DNA  聚合酶进行填充。最终生成用于转录的 dsDNA 模板。本试剂盒可在一个反应中完成 dsDNA 的合成及 RNA 转录，生成具有功能的 sgRNA。
 

实验流程：

 EnGen® sgRNA 合成试剂盒，S. pyogenes 货 号 #E3322S

A．特异目标链包含三个部分，分别是 T7 启动子、~20 nt 目标特异性序列及与 S. pyogenes Cas9 识别支架序列互补的 14 nt 重叠区域（反应混合液中提供）。室温下，混合特异性目标链（或 EnGen sgRNA 调控序列）与 EnGen2X sgRNA 反应预混液（NTPs，dNTPs，S. pyogenes Cas9 识别支架序列）及 EnGen sgRNA 酶预混液（DNA 和 RNA 聚合酶）。B．在 37℃ 条件下，具有 14 nt 互补重叠区域的 2 个片段发生退火。C. DNA 聚合酶从 3´ 端开始延伸，形成一个双链 DNA 模板。D. RNA 聚合酶识别 T7 启动子及其下游的 dsDNA 并开始转录。最终形成的 sgRNA 包含目标特异片段、crRNA 和 tracrRNA。37℃ 条件下，单管反应 30 分钟即可完成所有步骤。

EnGen sgRNA 合成试剂盒，S. pyogenes 组分

– EnGen sgRNA 酶混合液
– EnGen 2X sgRNA 反应混合液，S. pyogenes
– DNase I （RNase-free）
– EnGen sgRNA control Oligo，S. pyogenes

参考文献

关于该酶特性和产品应用的参考文献，请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com 查询。