重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)酶试剂盒Takara Clontech

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重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 632640 Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl) 3 × 100 μg ¥6,845 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
Clontech 632641 Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl) 100 μg ¥2,701 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
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Guide-it Recombinant Cas9 (Electroporation Ready)(Code No. 632641/632640)产品名称变更为Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl) ,产品内容没有发生变化。(2021年5月)
 
 
          基因敲除    
          重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)            
  基因敲入        
          重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)        
 
 
降低脱靶效应,可用于in vivo基因编辑实验
Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl)
· 适用于电穿孔方法的低甘油含量、高浓度的Cas9蛋白质溶液
· 与质粒导入系统相比较,脱靶效应受到明显抑制
· NLS(核定位信号)有助于实现快速高效突变导入
· 与Guide-it Complete sgRNA Screening System组合使用实现高效率的基因编辑
 
■ 产品说明:
Guide-it Recombinant Cas9(3 μg/μl)是来源于野生型酿脓链球菌Streptococcus pyogenes,适用于CRISPR/Cas9基因编辑实验的重组Cas9蛋白质溶液。
高浓度Cas9蛋白质溶液中甘油浓度比其他公司低,特别适用于电穿孔导入方法。与借助质粒导入Cas9基因序列方法相比较,避免了残留Cas9基因的持续表达,有效抑制了脱靶效应。
无需经过蛋白质转录·翻译·表达过程,C末端的NLS(核定位信号)可以实现快速有效的突变导入。
Cas9导入细胞首先需要形成Cas9-sgRNA核糖核蛋白复合物,sgRNA制备推荐使用Guide-it sgRNA In VitroTranscription Kit(Code No. 632635)或者Guide-it Complete sgRNA Screening System(Code No. 632636)。
 
■ 实验例:
重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
图1. AAVS1或者CXCR4基因同源重组修复(HDR)效率
Guide-it Recombinant Cas9(3 μg/μl)和修复模板复合物通过电穿孔的方式导入至CD34+造血干细胞中检测同源重组修复(HDR)效率。将包含Hind III酶切位点的修复模板插入至AAVS1 基因中,包含Hind III和BamH I酶切位点的修复模板插入至CXCR4基因中。之后通过对细胞内靶基因进行PCR扩增和限制酶剪切分析,确认突变导入效率。基因编辑效率标注在凝胶阳性孔处。在基因编辑前野生型CXCR4基因已包含1处BamH I位点,因此BamH I剪切CXCR4基因后额外多显示一条条带。
 
重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
图2. 不同公司Cas9产品在hiPS細胞中基因敲除效率比较
剪切后电泳条带的强弱可以半定量估计发生基因编辑细胞的百分数。Guide-it Recombinant Cas9(3 μg/μl)与Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit制备的sgRNA相结合,通过电穿孔的方法导入Cellartis hiPSC-18细胞,采用Guide-it Mutation Detection Kit(Code No. 631448)确认突变导入效率,%即表示基因编辑效率。如图所示,Guide-it Recombinant Cas9(3 μg/μl)在多数靶基因位点均显示有效的基因编辑。
  * 比较结果来自于Takara Bio USA, Inc.
 
 
■ 浓度
3 μg/μl
 
■ 保存
-70℃
(注意)避免反复冻融。首次溶解之后,建议按照使用量分装保存。
 
■ 所需要的其它产品(主要产品)
· 电穿孔装置:
Neon Transfection System(Thermo Fisher Scientific)或者 4-D Nucleofector System(Lonza)
*各装置的导入条件请阅读使用说明书。

· sgRNA制备及筛选
Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit(Code No. 632635):用于sgRNA制备及纯化
Guide-it Complete sgRNA Screening System(Code No. 632636):用于确认制备的sgRNA的有效性

 
 
产品详情请点击:重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
 
 
■ 关联资料
相关资料:
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重组Cas9蛋白质(10 μg/μl)酶试剂盒Takara Clontech

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重组Cas9蛋白质(10 μg/μl)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 632678 Guide-it Recombinant Cas9 (10 μg/μl) 200 μg ¥4,755
¥3,804
重组Cas9蛋白质(10 μg/μl) 重组Cas9蛋白质(10 μg/μl) 重组Cas9蛋白质(10 μg/μl)
Clontech 632679 Guide-it Recombinant Cas9 (10 μg/μl) 500 μg ¥8,868
¥7,094
重组Cas9蛋白质(10 μg/μl) 重组Cas9蛋白质(10 μg/μl) 重组Cas9蛋白质(10 μg/μl)

*红字为促销价格,促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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          基因敲除    
          重组Cas9蛋白质(10 μg/μl) 重组Cas9蛋白质(10 μg/μl) 重组Cas9蛋白质(10 μg/μl)
重组Cas9蛋白质(10 μg/μl) 重组Cas9蛋白质(10 μg/μl) 重组Cas9蛋白质(10 μg/μl)            
  基因敲入        
          重组Cas9蛋白质(10 μg/μl)        
 
 
Guide-it Recombinant Cas9是一种重组野生型酿脓链球菌Cas9核酸酶,在C-端进行了核定位信号(NLS)修饰,可用于CRISPR/Cas9介导的基因编辑实验。通过电穿孔的方式将Cas9-sgRNA核糖核蛋白复合物导入至哺乳动物细胞,在使脱靶效应最小化的同时,更容易实现高效率的基因编辑实验
 
Guide-it Recombinant Cas9 (10 μg/μl)甘油含量为50%,这款Cas9蛋白质溶液已被证实是无菌的,并且无论是和单向导RNA(sgRNA)形成核糖核蛋白复合物(RNP)通过电穿孔的方式导入用于基因敲除实验,还是作为RNP与供体修复模板一起导入用于基因敲入实验,都具有良好的哺乳动物细胞耐受性。
 
sgRNA制备推荐使用Guide-it sgRNA In VitroTranscription Kit(Code No. 632635)或者Guide-it Complete sgRNA Screening System(Code No. 632636)
 
GMP级别的重组Cas9蛋白质Recombinant Cas9 Protein GMP grade(Code No. T230)请点击这里查看。
 
■ 概览
· 这款Cas9蛋白质溶液是无菌的,且哺乳动物细胞耐受性良好
· 与Guide-it Complete sgRNA Screening System配合使用可实现高效率编辑
· 优于质粒导入系统,脱靶效应更低
· 对难转染细胞系效果好
 
■ 实验例:
重组Cas9蛋白质(10 μg/μl)
人诱导多能干细胞(hiPSC)CD81基因敲除效果。在本实验中,将Cas9-sgRNA RNP复合物通过电穿孔方式导入至hiPSC-18 和hiPSC-22两种诱导多能干细胞中敲除CD81基因。CD81抗体染色后流式细胞术检测结果显示,电穿孔10天后hiPSC-18的敲除效率为91%,hiPSC-22的敲除效率为85%,显示出非常高的基因编辑效率。
 
重组Cas9蛋白质(10 μg/μl)
AAVS1和CXCR4基因同源定向修复。Panel A. 这些图表展示了CD34+造血干细胞的HDR实验是如何完成的。将含有Hind III酶切位点的ssDNA模板插入AAVS1基因中,将同时含有Hind III和Bam HI酶切位点的模板插入CXCR4基因中。每侧同源臂长度为90 bp。Panel B. 将修复模板和Cas9/sgRNA RNPs通过电穿孔导入后,用PCR扩增靶细胞中各目标基因,并进行酶切分析。编辑效率显示在凝胶上每个阳性孔上面。CXCR4基因经过BamH I酶切后显示出一条额外条带,原因是基因编辑前野生型基因中已经存在一个BamH I位点了。基因编辑5天后,我们证实98%的造血干细胞CD34+染色阳性。
 
重组Cas9蛋白质(10 μg/μl)
数据来源于Takara Bio USA, Inc.
Cellartis hiPSC-18细胞系基因敲除。通过剪切后条带的强度可以对编辑细胞所占的百分比进行半定量估计。与其他品牌推荐的制备向导RNA的方法相比,Guide-it Recombinant Cas9与Guide-it In Vitro Transcription Kit制备的sgRNA结合使用,可以为许多靶点提供一致且有效的基因编辑。凝胶底部的每个数字代表所示RNP的基因编辑效率(以百分比表示)。
 
重组Cas9蛋白质(10 μg/μl)
CD3+ Pan T细胞治疗相关基因的敲除。在本实验中,电穿孔导入Cas9/sgRNA RNPs至 CD3+Pan T细胞进行单基因敲除(B2MPD-1)或双基因敲除(B2M+PD-1TRAC+TRBC)。细胞解冻后,在LymphoONE培养基中生长,并用ImmunoCult人CD3/CD28/CD2 T细胞激活剂激活处理3天。然后按照Guide-it Recombinant Cas9(10 μg/μl)操作指南,将RNP复合物通过电穿孔方式导入至细胞,设置3个平行实验组。对于双基因敲除,单独制备靶向各目标基因的RNP复合物,然后与细胞混合进行电穿孔。电穿孔7天后,使用流式细胞仪检测基因敲除频率。
 
重组Cas9蛋白质(10 μg/μl)
CD3+ Pan T细胞中B2M基因的敲除。在本实验中,将Cas9/sgRNA RNPs通过电穿孔导入至CD3+ Pan T细胞中,以敲除B2M基因。细胞解冻后,在LymphoONE培养基中生长,并用ImmunoCult人CD3/CD28/CD2 T细胞激活剂激活处理3天。然后按照Guide-it Recombinant Cas9(10 μg/μl)操作指南,将RNP复合物通过电穿孔导入至细胞,设置3个平行实验组。电穿孔7天后,用流式细胞仪检测基因敲除频率和细胞活力。
 
Technical Notes
Improved CRISPR/Cas9 genome editing in hard-to-transfect mammalian cells using AAV
 
Guide-it™ Recombinant
Cas9(10 μg/μl)
重组Cas9蛋白质(10 μg/μl)
 
产品详情请点击:重组Cas9蛋白质(10 μg/μl)
 
 

 

GMP级别重组Cas9蛋白质酶试剂盒Takara Clontech

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GMP级别重组Cas9蛋白质
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara T230 Recombinant Cas9 Protein GMP grade 0.6 mg 询价 GMP级别重组Cas9蛋白质 GMP级别重组Cas9蛋白质 GMP级别重组Cas9蛋白质
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■ 制品内容
0.2 ml溶液中含有0.6 mg蛋白质,保存在1 ml冻存管中
 
浓度:3 mg/ml
体积:200 μl
 
■ 制品说明
Recombinant Cas9 Protein GMP grade是一种重组的野生型酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)来源的Cas9蛋白质(SpCas9),其C端携带猿猴病毒40(SV40)核定位信号(NLS:nuclear-localization signal)。 SpCas9与来源于同种细菌的特定基因座(CRISPR:Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)所转录的短RNA(gRNA:向导RNA)形成核糖核蛋白(RNP:Ribonucleoprotein)复合物,这种RNP复合物可以序列特异性切断双链DNA(*参考文献1),被广泛用于包括哺乳动物细胞在内的各种细胞的基因组编辑(*参考文献2,3)。
本Cas9蛋白质溶液成分经过了优化,对哺乳动物细胞具有良好的耐受性,可降低导入哺乳动物细胞时所造成的细胞损伤。将此Cas9蛋白质和gRNA制备的RNP复合物,通过电穿孔、显微注射等方式导入至靶细胞进行敲除实验,经验证该Cas9蛋白质溶液对哺乳动物细胞具有良好的耐受性。
本制品生产符合GMP(药品生产质量管理规范)标准,确保了高品质。
※ 本制品的关联制品Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl)(Code No. 632641/632640),其缓冲液成分与本制品相同,经确认可以达到相同的基因组编辑效率。
 
订购本制品请填写并提供此表
 
Cas9蛋白质产品定制,请通过当地代理商或者以下联系方式联络我们。
TEL:010-80720985/86
 
■ 保存
-70℃及以下
(注意)避免反复冻融。
※一经开封,其制品品质将不在本公司GMP质量标准保证范围内;在没有开封的情况下,至多可以反复冻融5次,制品性能不会明显下降。
 
■ 分子量
159,665(根据氨基酸序列计算,1380个氨基酸)
 
■ 起源
E. coli expressing recombinant wild-type Streptococcus pyogenes Cas9 nuclease with a C-terminal nuclear localization signal(NLS) artificially synthesized based on Simian virus 40.
 
■ 纯度
HPLC纯度≥90%
 
■ 品质
·本制品符合GMP标准,并在该标准下进行制造和品质管理。
·本制品不含人源或动物源成分。
 
 
 
 
 

Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备酶试剂盒Takara Clontech

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Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 632612 Guide-it CRISPR/Cas9 Vector System 1 System ¥4,641 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备
Clontech 632613 Guide-it CRISPR/Cas9 Gesicle Production System 1 System ¥9,225 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备
Clontech 632616 Guide-it CRISPR/Cas9 Gesicle Packaging Set 10 Rxns ¥7,076 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备
Clontech 632617 Gesicle Producer 293T Cell Line 1 ml ¥7,650 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备
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          基因敲除    
          Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备
Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备            
  基因敲入        
          Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备        
 
 
Guide-itCRISPR/Cas9 Gesicle Production System
· 细胞来源的纳米囊泡(Gesicle),可用于直接导入Cas9-sgRNA
· 转染效率低的哺乳动物细胞(分裂細胞、非分裂細胞、iPS細胞)也可实现有效的基因编辑
· Cas9蛋白质/sgRNA复合物可以快速从细胞内消除,降低脱靶效应
 
■ 产品说明:
Guide-it CRISPR/Cas9 Gesicle Production System用于制备Cas9/sgRNA Gesicle,Cas9/sgRNA Gesicle是可以将Cas9蛋白质/sgRNA复合物导入到哺乳动物细胞的细胞来源的纳米囊泡(Gesicle)。与采用质粒或者病毒载体相比较,采用Cas9/sgRNA Gesicle进行基因编辑实验,可以实现在广泛细胞类型中高效导入Cas9蛋白质/sgRNA复合物,从而提高基因编辑效率。同时,可以严格控制用于细胞的Cas9蛋白质/sgRNA复合物的剂量和持续时间,从而降低脱靶效应。
 
■ CRISPR/Cas9 Gesicle特点:
· 适用于多种细胞类型
   可在分裂细胞、非分裂细胞、原代细胞、细胞株、iPS细胞等多种细胞类型中进行基因编辑(图4)
· 高活性Cas9蛋白质/sgRNA确保有效的细胞导入
   Cas9蛋白质/sgRNA直接导入细胞,无需转录和翻译过程,导入后可以直接开始基因编辑
· 实现在需要的时候进行基因编辑
   可以严格控制Cas9蛋白质/sgRNA复合物的剂量和持续时间,与采用质粒或者病毒载体导入系统进行
   基因编辑相比较,降低了脱靶效应
 
■ CRISPR/Cas9 Gesicle原理:
Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备
图1. Cas9/sgRNA Gesicle制备和靶细胞导入
 
(Step 1) 将诱导Gesicle形成的质粒预混液,靶特异sgRNA表达载体和Cas9表达载体共转染至Gesicle Producer 293T Cell Line (Code No. 632617)中。(Step 2) 利用Clontech iDimerize系统技术原理,借助与gesicle表面的膜结合红色荧光蛋白质CherryPicker之间的相互作用, iDimerize诱导配体将Cas9-sgRNA核糖核蛋白复合物载入到gesicle中。(Step 3) 携带红色荧光标记的Gesicle装配完成并从制备细胞中释放出来,收集培养基上清液,获得Cas9-sgRNA Gesicle浓缩储液。(Step 4) 收集获得的Gesicle适用于广泛细胞类型,可将靶细胞瞬时标记为红色并将Cas9-sgRNA复合物释放至靶细胞中。由于Cas9蛋白质C端有核定位信号(NLS),同时靶细胞培养液中没有dimerizer诱导配体,因此可以确保Cas9-sgRNA复合物与红色荧光蛋白质分离之后可以转运至细胞核内。
 
Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备
图2.Guide-it CRISPR/Cas9 Gesicle Production System实验流程
 
■ 实验例
Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备
图3. 脱靶效应比较
 
比较采用Cas9-sgRNA Gesicle和质粒系统导入sgRNA所带来的脱靶效应。凝胶电泳结果、Guide-it Mutation Detection Kit检测结果以及测序结果均表明,采用Cas9-sgRNA Gesicle导入sgRNA时在潜在脱靶位点检测不到明显的脱靶效应,而采用质粒系统导入sgRNA时在靶基因位点EMX1和潜在脱靶位点均可检测到基因突变。
 
Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备
图4. 不同细胞类型中基因敲除效率比较
 
建立整合ZsGreen1表达框的不同细胞系,采用Cas9-sgRNA Gesicle(sgRNA以ZsGreen1为靶基因)处理细胞系,流式细胞仪进行结果分析。以添加不同量的ZsGreen1为靶基因的Cas9-sgRNA Gesicle(添加量分别为10 μl、20 μl、30 μl)处理组为实验组、以转染Cas9/sgRNA表达质粒处理组作为对照组,流式细胞仪检测基因敲除效率。
在Jurkat等难转染细胞类型中,Cas9-sgRNA Gesicle的Cas9-sgRNA导入效率和ZsGreen1基因敲除效率要优于Cas9/sgRNA表达质粒。
 
Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备
图5.成功敲除hiPS细胞中的CD81基因
 
以人CD81为靶标设计sgRNA,采用Gesicle Producer 293T Cell Line制备产生含有Cas9-sgRNA复合物的细胞纳米囊泡,收集Cas9-sgRNA Gesicle并将其添加至48孔板培养的未分化Cellartis human iPS cell line 18(Code No. Y00305)。Cellartis human iPS cell line 18以Cellartis DEF-CS Culture System(Code No. Y30010)为培养体系,培养6 hr和24 hr后更换为不含有Gesicle的DEF-CS培养基继续培养7天。未添加Gesicle处理并且采用相同培养条件培养的Cellartis human iPS cell line 18作为实验对照组。通过流式细胞仪检测经Gesicle处理和未经Gesicle处理的Cellartis human iPS cell line 18, 采用FITC标记的CD81抗体检测细胞表面CD81的表达情况。
Panel A. 未经处理的Cellartis human iPS cell line 18(左)和FITC标记的CD81抗体检测未经Gesicle处理的Cellartis human iPS cell line 18(右)。 Panel B. FITC标记的CD81抗体检测经Gesicle处理6 hr(左)和24 hr(右)的Cellartis human iPS cell line 18。
流式细胞仪检测结果表明, 经Cas9/sgRNA Gesicle处理6 hr 后,CD81基因敲除效率为43%;经Cas9/sgRNA Gesicle处理24 hr 后,CD81基因敲除效率为49%。
 
■ 产品组份
Guide-it CRISPR/Cas9 Gesicle Production System(Code No. 632613)
1. Guide-it CRISPR/Cas9 Gesicle Packaging Set( Code No. 632616)
Guide-it CRISPR/Cas9 Gesicle Packaging Mix 1 (green cap) 10 vials
Guide-it CRISPR/Cas9 Gesicle Packaging Mix 2 (yellow cap) 10 vials
A/C Heterodimerizer (500 nM in Ethanol) 50 μl
Protamine Sulfate (4 mg/ml) 200 μl
 
2. pGuide-it-sgRNA1 Vector System( Code No. 632612)
a.pGuide-it-sgRNA1 Vector (Linear) (7.5 ng/μl) 20 μl
b.Guide-it Ligation Components v2  
    DNA Ligation Mighty Mix 50 μl
    Guide-it Oligo Annealing Buffer 1.5 ml
    Guide-it Control Annealed Oligos v2 (100 fmol/μl) 10 μl
    Guide-it Sequencing Primer 1 (100 pmol/μl) 10 μl
    PCR-Grade Water 1 ml
c.Stellar Competent Cells( Code No. 636763)  
    Stellar Competent Cells (100 μl/tube) 10 tubes
    SOC Medium (1 ml/tube) 10 tubes
    pUC19 Vector (0.1 ng/μl) 10 μl
 
Gesicle Producer 293T Cell Line(Code No. 632617)
Gesicle Producer 293T Cell Line 1 ml
 
■ 保存
Stellar Competent Cells:-80℃
其它:-20℃

Gesicle Producer 293T Cell Line :液氮保存
· 收到产品后,立即将其保存在液氮中。
· 在液氮保存的情况下,立即复苏细胞进行细胞培养。

 
■ 所需要的其它产品(主要产品)
· 0.45 μm 无菌过滤器(cellulose acetate或者polysulfonate)
· 20 ml 无菌注射器
· 50 ml 离心管 (Corning Falcon Cat. No. 352017等)
· 离心机、摆动转子(50 ml 离心管可以满足8,000X g离心要求)(例如:离心机Beckman J2-HS、摆动转子 JS-7.5 swinging bucket rotor)
· 不含氯化钙和氯化镁的Dulbecco’s PBS(用于细胞培养)(Sigma Cat. No. D8537等)
· 细胞培养液
· 胶原蛋白质预包被培养板
 
产品详情请点击:Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备
 
 

Cas9蛋白质检测抗体酶试剂盒Takara Clontech

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Cas9蛋白质检测抗体
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 632606 Guide-it Cas9 Polyclonal Antibody 3 x 100 μl ¥8,005 Cas9蛋白质检测抗体 Cas9蛋白质检测抗体 Cas9蛋白质检测抗体
Clontech 632607 Guide-it Cas9 Polyclonal Antibody 100 μl ¥2,669 Cas9蛋白质检测抗体 Cas9蛋白质检测抗体 Cas9蛋白质检测抗体
Clontech 632627 Guide-it Cas9 Monoclonal Antibody (Clone TG8C1) 3 × 100 μg ¥6,786 Cas9蛋白质检测抗体 Cas9蛋白质检测抗体 Cas9蛋白质检测抗体
Clontech 632628 Guide-it Cas9 Monoclonal Antibody (Clone TG8C1) 100 μg ¥2,511 Cas9蛋白质检测抗体 Cas9蛋白质检测抗体 Cas9蛋白质检测抗体
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Cas9蛋白质检测抗体 Cas9蛋白质检测抗体 Cas9蛋白质检测抗体 Cas9蛋白质检测抗体 Cas9蛋白质检测抗体
 
 
Cas9蛋白质检测抗体
· 重组Cas9蛋白质检测用单克隆抗体/多克隆抗体
· 多克隆抗体可识别野生型Cas9蛋白质和切口酶突变体(单克隆抗体还未进行测验)
· 高特异性:检测哺乳动物细胞裂解液样品时背景很低
· 高灵敏度:这两种抗体均可检测低于1 ng的重组Cas9蛋白质
 
■ 产品说明:
Takara Bio提供的单克隆抗体和多克隆抗体可用于检测Streptococcus pyogenes来源的重组Cas9蛋白质。
Guide-it Cas9 Monoclonal Antibody (Clone TG8C1)是以Streptococcus pyogenes来源的全长重组Cas9蛋白质为抗原,采用杂交瘤细胞制备生产的小鼠源抗体。用于Western blot检测时,此抗体可以识别细菌和哺乳动物细胞裂解液样品中低于1 ng的重组Cas9蛋白质。
Guide-it Cas9 Polyclonal Antibody是用于检测Streptococcus pyogenes来源的重组Cas9蛋白质的兔源抗体。此抗体可以识别Cas9核酸酶的3种突变体:野生型Cas9蛋白质、Cas9切口酶和Cas9核酸酶-缺陷型突变体。此抗体具备高特异性和高灵敏度,检测哺乳动物细胞样品时其背景很低,用于Western blot检测时可识别低至0.5 ng的重组Cas9蛋白质。
 
Cas9蛋白质检测抗体
图1. Western blot评估Guide-it Cas9 Polyclonal Antibody检测灵敏度
 
0.15-20.0 ng重组Cas9蛋白质(rCas9)电泳后采用Guide-it Cas9 Polyclonal Antibody(1:1,000稀释)进行Western Blot检测。采用HRP-conjugated goat anti-rabbit secondary antibody(1:5,000 稀释)作为二抗,ECL作为检测试剂。HT1080、HEK293细胞裂解液作为阴性对照。
 
Lane 1:HT1080細胞裂解液(3.5×104 cells)
Lane 6:rCas9 protein 1.25 ng
Lane 2:HEK293細胞裂解液(3.5×104 cells)
Lane 7:rCas9 protein 2.5 ng
Lane 3:rCas9 protein 0.15 ng
Lane 8:rCas9 protein 5.0 ng
Lane 4:rCas9 protein 0.30 ng
Lane 9:rCas9 protein 10.0 ng
Lane 5:rCas9 protein 0.625 ng
Lane 10:rCas9 protein 20.0 ng
 
Cas9蛋白质检测抗体
图2.Western blot评估Guide-it Cas9 Polyclonal Antibody检测特异性
 
制备多种未转染细胞和表达Cas9重组蛋白质的HEK 293细胞(CMV启动子)的细胞裂解液,以细胞裂解液为样品通过Western blot方法评估Guide-it Cas9 Polyclonal Antibody检测特异性。1 ng重组Cas9蛋白质(rCas9)作为阳性对照。Guide-it Cas9 Polyclonal Antibody (1:1,000稀释)作为一抗,HRP-conjugated goat anti-rabbit secondary antibody(1:5,000 稀释)作为二抗,ECL作为检测试剂。
 
Lane 1:HepG2细胞裂解液(3.5×104 cells)
Lane 8:裂解缓冲液
Lane 2:CHO-K1细胞裂解液(3.5×104 cells)
Lane 9:rCas9 protein 1 ng
Lane 3:HeLa细胞裂解液(3.5×104 cells)
Lane 10:Cas9表达HEK293细胞裂解液(2.0×103 cells)
Lane 4:MCF7细胞裂解液(3.5×104 cells)
Lane 11:Cas9表达HEK293细胞裂解液(5.0×103 cells)
Lane 5:HEK293细胞裂解液(3.5×104 cells)
Lane 12:Cas9表达HEK293细胞裂解液(1.0×104 cells)
Lane 6:HT1080细胞裂解液(3.5×104 cells)
Lane 13:Cas9表达HEK293细胞裂解液(1.5×104 cells)
Lane 7:NIH3T3细胞裂解液(3.5×104 cells)
 
 
Cas9蛋白质检测抗体
图3. Western blot评估Guide-it Cas9 Monoclonal Antibody (Clone TG8C1) 检测灵敏度
 
A. 1~5 ng重组Cas9蛋白质(rCas9)电泳后采用Guide-it Cas9 Monoclonal Antibody (Clone TG8C1)(1:3,000稀释)进行Western Blot检测。HEK293细胞裂解液作为阴性对照。
B. 以表达Cas9重组蛋白质的HEK 293细胞的细胞裂解液为样品,采用Guide-it Cas9 Monoclonal Antibody (Clone TG8C1)(1:3,000稀释)进行Western Blot检测。HT1080、HEK293细胞裂解液作为阴性对照。
 
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■ 用途
Western blot(1:1,000~1:5,000稀释)
 
 
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CRISPR/Cas9质粒系统酶试剂盒Takara Clontech

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CRISPR/Cas9质粒系统
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 632601 Guide-it CRISPR/Cas9 System (Green) 1 System ¥4,534 CRISPR/Cas9质粒系统 CRISPR/Cas9质粒系统 CRISPR/Cas9质粒系统
Clontech 632602 Guide-it CRISPR/Cas9 System (Red) 1 System ¥4,534 CRISPR/Cas9质粒系统 CRISPR/Cas9质粒系统 CRISPR/Cas9质粒系统
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          CRISPR/Cas9质粒系统 CRISPR/Cas9质粒系统 CRISPR/Cas9质粒系统
CRISPR/Cas9质粒系统 CRISPR/Cas9质粒系统 CRISPR/Cas9质粒系统            
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          CRISPR/Cas9质粒系统        
 
 
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CRISPR/Cas9质粒系统
对于使用CRISPR/Cas9 技术进行哺乳动物基因组编辑来说,Guide-it CRISPR/Cas9 系统是可以用于克隆和表达靶向单链向导RNA (single guide RNAs, sgRNAs)的试剂盒。该系统中的载体同时表达Cas9核酸酶、针对特定位点的sgRNA和明亮的荧光蛋白质。其中两种荧光蛋白质(ZsGreen1 和 tdTomato)可供选择,用于监测转染效率或在后期使用流式细胞仪富集/分选转染细胞时用到。使用该系统构建一个表达特异性序列的sgRNA的质粒非常简单;将用户提供的、与目标序列对应的两条核酸单链退火结合成为双链,再使用系统中包含的高效率连接混合液将双链插入到线性化的质粒中。这个试剂盒同样包括Stellar感受态细胞,确保高效率的转化。
 
产品特点:
· 单质粒载体:特异性靶向sgRNA的表达由人的U6启动子驱动,Cas9核酸酶及明亮的荧光标志(ZsGreen1 或 tdTomato)的表达由一个双向CMV启动子驱动。
· 荧光蛋白质tdTomato和ZsGreen1异常明亮:分别是EGFP亮度的6倍和2.5倍;这些标志物可以被用于监测转染效率、或使用流式细胞仪富集/分选转染细胞。
· 简便地构建质粒:针对您的靶序列设计的特异性寡核苷酸,然后使用试剂盒中提供的高效率混合液和高效的感受态细胞克隆到预先线性化的质粒中。
· 包含足够的试剂:足够用于构建表达10种不同的sgRNA的质粒。
 
产品应用:
使用CRISPR/Cas9技术对哺乳动物进行基因编辑时,靶向单链向导RNA(sgRNA)的克隆和表达。
 
产品组份:
Guide-it CRISPR/Cas9 System (Green) (Code No. 632601)
· pGuide-it-ZsGreen1 Vector (Linear)
· Guide-it Ligation Components
· Stellar Competent Cells

Guide-it CRISPR/Cas9 System (Red) (Code No. 632602)
· pGuide-it-tdTomato Vector (Linear)
· Guide-it Ligation Components
· Stellar Competent Cells

 
实验例:
CRISPR/Cas9质粒系统
分别接种1×105个HEK293、HeLa、U2OS、HT1080细胞至12孔板,培养16 h后,采用Xfect Transfection Reagent转染2.5 μg pGuide-it-ZsGreen1质粒至细胞。pGuide-it-ZsGreen1质粒包含分别以CCR5、C4BPB、EMX1为靶基因设计的sgRNA。
转染48 h后,通过荧光显微镜观察ZsGreen1荧光表达情况(A),通过FACS测定转染效率(B. Transfection%)。
采用Guide-it Mutation Detection Kit测定基因突变导入效率。以细胞为起始直接PCR扩增目的片段,扩增产物经过变性及退火后产生错配位点,之后Guide-it解离酶剪切错配位点。剪切产物经过凝胶电泳后,通过密度分析测定基因突变导入效率(B. Indel%)。
(数据来源于Takara Bio USA, Inc.)
 
 
 
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CRISPR/Cas9慢病毒系统酶试剂盒Takara Clontech

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CRISPR/Cas9慢病毒系统
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 632629 Lenti-X CRISPR/ Cas9 System 1 System ¥14,572 CRISPR/Cas9慢病毒系统 CRISPR/Cas9慢病毒系统 CRISPR/Cas9慢病毒系统
Clontech 632630 pLVX-hyg-sgRNA1 Vector System 10 Rxns ¥4,610 CRISPR/Cas9慢病毒系统 CRISPR/Cas9慢病毒系统 CRISPR/Cas9慢病毒系统
Clontech 632631 pLVX-puro-Cas9 Vector 20 μl ¥7,483 CRISPR/Cas9慢病毒系统 CRISPR/Cas9慢病毒系统 CRISPR/Cas9慢病毒系统
Clontech 632633 Lenti-X Tet-On 3G CRISPR/Cas9 System 1 System ¥22,832 CRISPR/Cas9慢病毒系统 CRISPR/Cas9慢病毒系统 CRISPR/Cas9慢病毒系统
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          基因敲除    
          CRISPR/Cas9慢病毒系统 CRISPR/Cas9慢病毒系统 CRISPR/Cas9慢病毒系统
CRISPR/Cas9慢病毒系统 CRISPR/Cas9慢病毒系统 CRISPR/Cas9慢病毒系统            
  基因敲入        
          CRISPR/Cas9慢病毒系统        
 
 
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慢病毒介导的CRISPR/Cas9 系统
Lenti-X CRISPR/Cas9 System
Lenti-X CRISPR/Cas9 System是一个完整的由慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑系统。该系统包括Lenti-X Packaging Single Shots(用于产生高滴度的病毒)和两个不同的质粒载体(用于在靶细胞中表达Cas9 和客户自定义的sgRNA)。表达sgRNA的质粒系统pLVX-hyg-sgRNA1,易于插入客户自定义的sgRNA 序列,并且该系统提供足够的质粒供客户构建10种不同的sgRNA序列质粒。利用慢病毒导入sgRNA和Cas9基因,可以对难转染细胞系实现靶向基因编辑。
Lenti-X CRISPR/Cas9 System涉及到Cas9在靶细胞中的恒定表达,而Lenti-X Tet-On 3G CRISPR/Cas9 System结合了Tet-On 3G 反式转录激活蛋白,这使得用户可以通过添加强力霉素(doxycycline)来诱导Cas9的表达。通过严格控制Cas9的表达,Lenti-X Tet-On 3G CRISPR/Cas9 System可以使用户在细胞培养中,减少与Cas9稳定表达相关的毒性与脱靶效应。
 
■ 产品特点
· 利用病毒导入Cas9 基因和sgRNA ,使得一些难转染的哺乳动物细胞可以实现基因编辑,包括增殖细胞和非增殖细胞。
· Lenti-X Packaging Single Shots易于产生高滴度病毒。
· 由慢病毒介导客户自定义的sgRNA 和Cas9,用于哺乳动物使用CRISPR/Cas9 技术进行基因编辑。
· 通过严格控制Cas9的表达,Lenti-X Tet-On 3G CRISPR/Cas9 System可以使用户在细胞培养中,减少与Cas9稳定表达相关的毒性与脱靶效应。
 
■ 产品应用
· 利用CRISPR/Cas9技术对哺乳动物基因组编辑时,以慢病毒为基础的、用户自定义sgRNA和 Cas9的导入系统。
 
■ 实验例
CRISPR/Cas9慢病毒系统
 
图1. 诱导敲除HEK293细胞中CD81基因
Tet-On 3G慢病毒转导靶细胞后采用G418筛选阳性单细胞克隆,选取24个单克隆分析荧光素酶报告基因的诱导表达倍数,选择荧光素酶报告基因背景量表达量最低的细胞克隆,然后以Cas9慢病毒(MOI=5)进行转导。转导后的靶细胞以1 μg/ml嘌呤霉素进行筛选,2周后,任意选择6个稳定细胞克隆分析Cas9的诱导表达倍数。将每个单克隆扩增培养的细胞分别接种至两个孔(12孔板)进行培养,其中一孔细胞添加0.5 μg/ml强力霉素诱导培养2天。采用抗Cas9的多克隆抗体(Code No. 632607)和ECL试剂通过Western blot分析Cas9诱导表达情况,抗体稀释比例为1:1,000。从中选取3个Tet-On 3G-Cas9-阳性细胞克隆(C-1, C-2和C-3)进行扩增培养并将其分别接种至2个孔(12孔板)中,CD81-sgRNA慢病毒(MOI=5)再次转导靶细胞,转导8小时后,添加0.5 μg/ml强力霉素至其中一孔进行诱导培养。6天后,收集细胞并采用FITC标记的抗人CD81抗体进行染色,通过FACS检测CD81表达情况。图A. Western blot检测结果显示了在添加0.5 μg/ml强力霉素(+)进行诱导或者不添加强力霉素(-)的情况下,6个分别独立的Tet-On 3G-Cas9-阳性细胞群Cas9蛋白质的表达情况。图B. FACS检测结果显示了CD81-sgRNA慢病毒转导的3个分别独立的Tet-On 3G-Cas9-阳性293T细胞群,在添加0.5 μg/ml强力霉素(+)进行诱导或者不添加强力霉素(-)的情况下,目的基因的敲除效率。在所检测的3个细胞群中,其中2个细胞群C-1和C-2在不添加强力霉素进行诱导的情况下基本不发生基因编辑现象,添加强力霉素进行诱导的情况下CD81基因的敲除效率分别为58.6%和30.7%。而另外一个细胞群C-3在不添加强力霉素进行诱导的情况下仍然会发生基因编辑现象,CD81基因的敲除效率为27.9%。
 
CRISPR/Cas9慢病毒系统
 
图2. 以可诱导的方式编辑HEK293细胞中AAVS1基因
通过qRT-PCR分析6个Tet-On 3G-Cas9-阳性HEK293稳定细胞系中Cas9的诱导表达情况。将HEK293细胞分别接种至2个孔(12孔板),以AAVS1-sgRNA慢病毒(MOI=5)进行转导。转导8小时后,添加0.5 μg/ml强力霉素至其中一孔诱导培养6天。6天后采用Guide-it Mutation Detection Kit (Code No. 631443)检测AAVS1基因编辑效率。图A.通过qRT-PCR方法检测每个细胞克隆分别在未经诱导(-Dox)和经过诱导(+Dox)的情况下Cas9蛋白质的表达情况。未经诱导和经过诱导的细胞的Ct值和ΔCt值标注在相对应一栏,计算出来的表达倍数差异标注在右侧一栏。多个细胞克隆的检测结果显示,在所检测的细胞克隆中1号克隆(绿色数字)具有最好的诱导性能,只有3号克隆(红色数字)在没有强力霉素诱导的情况下Cas9也会有所表达而且诱导性能较差。图B. Guide-it解离酶分析实验检测未经诱导(–)和经过诱导(+)的细胞克隆中AAVS1基因编辑效率。亲本细胞(未转导细胞)检测结果显示未经诱导和经过诱导的细胞所产生的片段大小是等同的。而经过诱导的稳转细胞系的检测结果显示产生了较小的基因片段,这说明在所检测的细胞克隆中都发生了AAVS1基因编辑现象。3号克隆在未经诱导的情况下也可以观察到剪切产物,这一点与qRT-PCR检测结果是相一致的。
 
CRISPR/Cas9慢病毒系统
 
图3. Lenti-X Tet-On 3G CRISPR/Cas9系统载体组成
pLVX-EF1a-Tet3G载体编码表达Tet-On 3G转录激活蛋白质,由组成型启动子EF-1 alpha启动表达。与常用的CMV启动子相比,EF-1 alpha启动子在某些细胞类型(包括各种干细胞类型)中不易被沉默,所建立的诱导细胞系适用于长期使用。Tet-On 3G是由Tet-On Advanced转录激活蛋白质修饰而来,具有更高的强力霉素反应灵敏度。pLVX-TRE3G-Cas9-puro载体由诱导型启动子PTRE3GV启动表达经过优化的Cas9核酸酶。pLVX-TRE3G-Cas9-puro载体上的Cas9序列来源于杆菌属酿脓链球菌,进行了密码子优化以适用于哺乳动物细胞表达,另外在Cas9序列C端还引入了核定位信号(NLS)。pLVX-hyg-sgRNA1载体由组成型人U6启动子编码表达sgRNA(由用户设计并插入)。
 
CRISPR/Cas9慢病毒系统
 
图4.为可诱导型基因编辑选择优质的细胞克隆
通过分析Cas9表达情况或者分析未诱导的或者经过诱导的细胞群基因编辑情况来筛选优质的细胞克隆。虽然通过Western blot检测Cas9蛋白质表达情况有助于预筛选细胞克隆,但是CRISPR/Cas9介导的基因编辑是非常高效的,即使在通过Western blot检测不到Cas9蛋白质表达的情况下,在相应的细胞克隆中仍然有可能发生基因编辑现象。我们建议通过qRT-PCR方法来筛选Cas9背景表达量较低的细胞克隆,以避免在没有添加强力霉素的情况下发生基因编辑现象。图4上面一行显示的是优质细胞克隆(C-1)的检测数据,经过诱导的C-1细胞中Cas9蛋白质表达情况良好(Western blot,+),Cas9 mRNA背景表达水平非常低(qRT-PCR)。和未经诱导的细胞(-或者-Dox)相比,经过诱导的细胞(+或者+Dox)中Cas9的诱导表达使得基因编辑发生的频率更高,解离酶分析实验中小片段(蓝色箭头)的出现,FACS检测结果显示较大比例的细胞出现在“knockout”范围而未经诱导的细胞中基因编辑水平非常低都可以证实这一点。图4下面一行显示的是非优质细胞克隆(C-3)的检测数据,在未经诱导的细胞克隆(-)中即使通过Western blot没有检测到Cas9蛋白质的表达,但依然可以检测到Cas9 mRNA的表达(qRT-PCR)和基因编辑现象(解离酶,FACS)。
 
CRISPR/Cas9慢病毒系统
 
图5. LVX-hyg-CD81-sgRNA转导Jurkat或者HT1080细胞后采用潮霉素筛选稳定整合细胞系。之后采用LVX-puro-Cas9转导筛选获得的稳定细胞克隆,并采用嘌呤霉素再次进行筛选,通过FACS方法检测CD81敲除效率。以抗CD81抗体处理的未经Cas9转导的亲代细胞作为阳性对照,而未做抗体处理的亲代细胞作为阴性对照。
 
CRISPR/Cas9慢病毒系统
 
图6. 诱导敲除Jurkat细胞中CD81基因
按照实验手册操作流程建立Cas9背景表达较低的Tet-On 3G-Cas9-阳性Jurkat细胞,并以CD81-sgRNA慢病毒(MOI=5)连续转导两次。将成功转导的细胞接种至2个孔(12孔板)中并在其中一孔中添加0.5 μg/ml强力霉素(+Dox)诱导培养7天。采用FITC抗人CD81抗体进行检测并通过FACS进行分析,分析结果显示在未经强力霉素诱导的细胞(-Dox; top)中只有一小部分的细胞(0.4%)发生了基因编辑现象,而经过强力霉素诱导的细胞(+Dox; bottom)中发生CD81基因编辑的比例为32%。
 
■ 产品组份
Lenti-X CRISPR/Cas9 System (Code No.632629)
· pLVX-hyg-sgRNA1 Vector (Linear) (Code No. 632632,不单独销售)
· pLVX-puro-Cas9 Vector(Code No. 632631)
· Stellar Competent Cells(Code No. 636763)
· Guide-it Ligation Components v2 (Code No. 632615,不单独销售)
· Lenti-X Packaging Single Shots(Code No. 631275,不单独销售)

Lenti-X Tet-On 3G CRISPR/Cas9 System (Code No. 632633)
· pLVX-hyg-sgRNA1 Vector (Linear)
· pLVX-TRE3G-Cas9-puro Vector Set
· pLVX-EF1a-Tet3G Vector
· Stellar Competent Cells
· Guide-it Ligation Components v2
· Lenti-X Packaging Single Shots

pLVX-hyg-sgRNA1 Vector System (Code No. 632630)
· pLVX-hyg-sgRNA1 Vector (Linear) (Code No. 632632,不单独销售)
· Guide-it Ligation Components v2 (Code No. 632615,不单独销售)
· Stellar Competent Cells(Code No. 636763)

 
 
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CRISPR/Cas9腺相关病毒系统酶试剂盒Takara Clontech

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CRISPR/Cas9腺相关病毒系统
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 632608 AAVpro CRISPR/Cas9 Helper Free System (AAV2) 1 System ¥10,846 CRISPR/Cas9腺相关病毒系统 CRISPR/Cas9腺相关病毒系统 CRISPR/Cas9腺相关病毒系统
Clontech 632609 AAVpro CRISPR/Cas9 Vector System 1 System ¥6,766 CRISPR/Cas9腺相关病毒系统 CRISPR/Cas9腺相关病毒系统 CRISPR/Cas9腺相关病毒系统
Clontech 632618 AAVpro CRISPR/SaCas9 Vector System 1 System ¥5,931 CRISPR/Cas9腺相关病毒系统 CRISPR/Cas9腺相关病毒系统 CRISPR/Cas9腺相关病毒系统
Clontech 632619 AAVpro CRISPR/Cas9 Helper Free System (AAV2) 1 System ¥10,643 CRISPR/Cas9腺相关病毒系统 CRISPR/Cas9腺相关病毒系统 CRISPR/Cas9腺相关病毒系统
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          CRISPR/Cas9腺相关病毒系统 CRISPR/Cas9腺相关病毒系统 CRISPR/Cas9腺相关病毒系统
CRISPR/Cas9腺相关病毒系统 CRISPR/Cas9腺相关病毒系统 CRISPR/Cas9腺相关病毒系统            
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          CRISPR/Cas9腺相关病毒系统        
 
 
重组腺相关病毒基因编辑系统(AAV2)
AAVpro® CRISPR/Cas9 Helper Free System (AAV2)
· 以病毒传递的方式导入Cas9基因和sgRNA,可以实现在难转染哺乳动物细胞中进行基因编辑,包括分裂细胞和非分裂细胞
· AAV病毒导入Cas9基因可以排除基因组整合和Cas9基因持续表达所带来的影响,降低脱靶效应
· 包装辅助质粒表达人microRNA miR-342有助于显著提高AAV病毒滴度
 
■ 产品说明:
我们可以提供两种CRISPR/Cas9 AAV2病毒粒子制备系统,无需辅助病毒,可采用Cas9进行基因编辑:AAVpro CRISPR/Cas9 Helper Free System和AAVpro CRISPR/SaCas9 Helper Free System。这两个试剂盒都可以用于将Cas9表达框和一个用户自定义的单向导RNA (sgRNA)导入至哺乳动物细胞中。Cas9基因序列来源于酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)或者金黄色酿脓葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。AAV系统可用于广泛哺乳动物细胞类型,有效实现体外基因组修饰。CRISPR/Cas9系统采用两个AAV载体导入较大的S. pyogenes Cas9 (SpCas9),而由于SaCas9相对较小,CRISPR/SaCas9系统可以借助单个载体实现导入。sgRNAs可被直接一步克隆至预线性化的pAAV-Guide-it-Down或者pAAV-Guide-it-1质粒。无需辅助病毒,只需与试剂盒所包含的辅助质粒共转染HEK 293T细胞即可制备高滴度的AAV2病毒粒子。AAVpro CRISPR/Cas9 Helper Free System (Code No. 632608) 和AAVpro CRISPR/SaCas9 Helper Free System (Code No. 632619) 都是完整试剂盒,包含了sgRNAs克隆和AAV病毒粒子制备所需要的所有试剂。同样也包含了有效分离提取AAV2病毒粒子的AAV Extraction Solution。需要注意的是,SpCas9和SaCas9即使作用于基因组的同一区域,其靶向效率也是不同的–详细信息请见实验例。
 
AAVpro CRISPR/Cas9 Helper Free Systems (with S. pyogenes Cas9)
· SpCas9基因被分成两段分别承载在pAAV-Guide-it-Up和pAAV-Guide-it-Down两个质粒上,两段SpCas9基因之间有1.6-kb的区域是同源的,同源区域在靶细胞中通过同源重组形成全长SpCas9基因
· SpCas9使用的前间区序列邻近基序(Protospacer Adjacent Motif,PAM)序列为NGG,其中N代表任意碱基-详细信息请见AAVpro CRISPR/Cas9 Systems使用手册
· 所提供的pAAV-Guide-it-Down质粒是预线性化的,有利于一步克隆sgRNAs,降低由于质粒自连所产生的背景
 
AAVpro CRISPR/SaCas9 Helper Free Systems (with S. aureus Cas9)
· SaCas9基因组装在单个质粒pAAV-Guide-it-1上,同时也包含了sgRNA表达框
· SaCas9 (来自于金黄色酿脓葡萄球菌)使用的前间区序列邻近基序(Protospacer Adjacent Motif,PAM) 序列为NNGRR(T),其中N代表任意碱基,R代表A或者G碱基,(T)具有较强的偏好性-详细信息请见AAVpro CRISPR SaCas9 Systems使用手册
· 所提供的pAAV-Guide-it-1质粒是预线性化的,有利于一步克隆sgRNAs,降低由于质粒自连所产生的背景
 
CRISPR/Cas9腺相关病毒系统
图1. 全长Cas9和sgRNA产生。
 
pAAV-Guide-it-Up和pAAV-Guide-it-Down载体分别编码被删减的Cas9基因上游和下游部分,两者之间有1.6-kb同源重叠区域。将一个用户自定义的单向导RNA (sgRNA)克隆至pAAV-Guide-it-Down(见载体图谱)。pAAV-Guide-it-Up或者pAAV-Guide-it-Down与pRC2-mi342和pHelper载体共同转染HEK 293T细胞制备AAV2-Up或者AAV2-Down病毒。采用AAV Extraction Solution分离提取制备产生的病毒粒子。AAV2-Up和AAV2-Down病毒共转导靶细胞。AAV基因组处理过程中会在1.6-kb同源重叠区域发生同源重组,形成全长Cas9基因,转录并翻译成Cas9蛋白质。
 
CRISPR/Cas9腺相关病毒系统
图2. AAV载体重组产生全长Cas9和sgRNA。
 
Cas9基因较大导致不能将其包装至单个AAV病毒粒子中。pAAV-Guide-it-Up和pAAV-Guide-it-Down载体分别包含Cas9经过删减的上游和下游部分,这两部分之间具备1.6-kb同源重叠区域。采用两个质粒分别进行病毒包装制备病毒。制备完成的病毒共同转导靶细胞,通过同源重组形成全长Cas9基因(4.1 kb)。在靶细胞中表达的功能Cas9蛋白质由sgRNA导向至合适的基因型位点。
 
CRISPR/Cas9腺相关病毒系统
图3. pAAV-Guide-it-Up载体图谱。
 
这是pAAV-Guide-it-Up载体的结构。这个载体包含在AAVpro CRISPR/Cas9 Helper Free System中,此系统用于制备AAV病毒粒子实现Cas9和sgRNA基因的细胞导入,这两者是进行CRISPR/Cas9基因编辑所必需的组分。由于Cas9基因较大,使得其不能包装在单个AAV病毒粒子中。为了可以实现AAV介导的Cas9基因的导入,此系统采用了两个单独的Cas9质粒。pAAV-Guide-it-Up载体包含一段被删减的Cas9基因上游部分(3,106 bp),由CMV启动子驱动编码Cas9 N端1,035个氨基酸。
 
CRISPR/Cas9腺相关病毒系统
图4. pAAV-Guide-it-Down载体图谱。
 
这是预线性化的pAAV-Guide-iT-Down载体的结构。这个载体包含在AAVpro CRISPR/Cas9 Helper Free system中,此系统用于制备AAV病毒粒子实现Cas9和sgRNA基因的细胞导入,这两者是进行CRISPR/Cas9基因编辑所必需的组分。由于Cas9基因较大,使得其不能包装在单个AAV病毒粒子中。为了可以实现AAV介导的Cas9基因的导入,此系统采用了两个单独的Cas9质粒。pAAV-Guide-it-Down载体包含了一段被删减的Cas9基因下游部分(2,616 bp),编码Cas9 C端872个氨基酸。一个用户自定义的单向导RNA (sgRNA)可被克隆至pAAV-Guide-it-Down载体中,位于人U6启动子的下游。要构建这个载体,需要先将作用于基因组靶位点的一对寡核苷酸链(向导序列)退火形成双链,然后将形成的双链DNA克隆至预线性化的载体中。
 
CRISPR/Cas9腺相关病毒系统
图5. HEK 293T细胞制备的AAV2-Up和AAV2-Down 病毒粒子的基因组滴度相同。
 
采用AAVpro Extraction Solution从HEK 293T细胞中分离提取AAV2-Up和AAV2-Down病毒粒子(参考protocol overview)。采用AAVpro Titration Kit (for Real Time PCR)检测基因组滴度。3次平行实验的结果表明所获得的AAV2-Up和AAV2-Down基因组滴度相近。
 
CRISPR/Cas9腺相关病毒系统
图6. 与质粒转染相比,尤其针对难转染的细胞系,AAVpro CRISPR/Cas9系统会产生更多的基因突变。
 
转导前1天将所标注的细胞类型(1.0 x 105 cells)接种至12孔板中。作用于CCR5 基因的AAV2-Up和AAV2-Down病毒粒子以1.0 x 105 MOI(基因组滴度)转导靶细胞。72小时后,收集细胞并采用Guide-it Mutation Detection Kit进行分析。作为对照,采用Xfect Transfection Reagent转染编码Cas9和靶向CCR5基因的向导序列的质粒(P: 2.5 μg)至靶细胞。
 
CRISPR/Cas9腺相关病毒系统
图7. AAVpro CRISPR/SaCas9系统通过单个载体表达SaCas9和sgRNA。
 
pAAV-Guide-it-1以预线性化形式提供,用于插入sgRNA靶序列(橘色标注部分为sgRNA)。采用此载体包装获得的病毒转导靶细胞时,靶细胞会同时表达进行基因编辑的SaCas9和sgRNA。
 
CRISPR/Cas9腺相关病毒系统
图8. Guide-it Mutation Detection Kit平行比较采用AAVpro CRISPR/Cas9 System (SpCas9)和AAVpro CRISPR/SaCas9 System产生的基因组修饰
 
CYP2外显子1两个不同的基因组区域为靶位点,孔1和2显示每个酶的检测结果,凝胶图下面的图显示靶区域。每个细胞类型的突变百分比标注在每个孔下面。转导前1天将3种不同细胞系分别接种1 x 105个细胞至12孔板。采用两载体系统AAVpro CRISPR/Cas9 System (SpCas9)或者单载体系统AAVpro CRISPR/SaCas9 System制备的病毒粒子以1.0 x 105 MOI(基因组滴度)转导靶细胞。72小时后,收集细胞并采用Guide-it Mutation Detection Kit进行分析 。
 
■ 产品组份
AAVpro CRISPR/Cas9 Helper Free System (AAV2)(Code No. 632608)
1. AAVpro CRISPR/Cas9 Vector Set
pAAV-Guide-it-Up Vector 500 ng/μl
pAAV-Guide-it-Down Vector(Linear) 7.5 ng/μl
2. Guide-it Ligation Components
DNA Ligation Mighty Mix  
Guide-it Oligo Annealing Buffer  
Guide-it Control Annealed Oligos 100 fmol/μl
Guide-it Sequencing Primer 1 100 pmol/μl
PCR-Grade Water  
3. Stellar Competent Cells(Code No. 636763)
4. pRC2-mi342 Vector(1 μg/μl)
5. pHelper Vector(1 μg/μl)
6. AAVpro Extraction Solution
    AAV Extraction Solution A 1.5 ml×3
    AAV Extraction Solution B 150 μl×3
 
AAVpro CRISPR/Cas9 Vector System(Code No. 632609)
1. AAVpro CRISPR/Cas9 Vector Set
20 μl pAAV-Guide-it-Up Vector 500 ng/μl
20 μl pAAV-Guide-it-Down Vector(Linear) 7.5 ng/μl
2. Guide-it Ligation Components
DNA Ligation Mighty Mix  
Guide-it Oligo Annealing Buffer  
Guide-it Control Annealed Oligos 100 fmol/μl
Guide-it Sequencing Primer 1 100 pmol/μl
PCR-Grade Water  
3. Stellar Competent Cells(Code No. 636763)
 
AAVpro CRISPR/SaCas9 Helper Free System (AAV2)(Code No. 632619)
1. pAAV-Guide-it-1 Vector (Linear) (7.5 ng/μl) 20 μl
2. Guide-it Ligation Components v3
 
DNA Ligation Mighty Mix 50 μl
Guide-it Oligo Annealing Buffer 1.5 ml
Guide-it Control Annealed Oligos v3 (100 fmol/μl) 10 μl
Guide-it Sequencing Primer 1 (100 pmol/μl) 10 μl
PCR Grade Water 1 ml
3. Stellar Competent Cells(Code No. 636763)
4. pRC2-mi342 Vector(1 μg/μl) 20 μl
5. pHelper Vector(1 μg/μl) 20 μl
6. AAVpro Extraction Solution
 
AAV Extraction Solution A 1.5 ml×3
AAV Extraction Solution B 150 μl×3
 
AAVpro CRISPR/SaCas9 Vector System(Code No. 632618)
1. pAAV-Guide-it-1 Vector (Linear) (7.5 ng/μl) 20 μl
2. Guide-it Ligation Components v3
 
DNA Ligation Mighty Mix 50 μl
Guide-it Oligo Annealing Buffer 1.5 ml
Guide-it Control Annealed Oligos v3 (100 fmol/μl) 10 μl
Guide-it Sequencing Primer 1 (100 pmol/μl) 10 μl
PCR Grade Water 1 ml
3. Stellar Competent Cells(Code No. 636763)
 
■ 保存
Stellar Competent Cells:-80℃
其它:-20℃
(AAVpro Extraction Solution溶解后置于室温保存)
 
 
 
产品详情请点击:CRISPR/Cas9腺相关病毒系统
 
 

Spy Cas9 核酸酶 货 号 #M0386M-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 基因编辑 – 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

Spy Cas9 核酸酶                              收藏

Spy Cas9 核酸酶                货   号                  #M0386M Spy Cas9 核酸酶                货   号                  #M0386M Spy Cas9 核酸酶                货   号                  #M0386M Spy Cas9 核酸酶                货   号                  #M0386M

货 号
规 格
价 格(元)
北京库存
上海库存
广州库存
成都库存
苏州库存

#M0386M
(高浓度20X)2000 pmol
6,479.00

#M0386S
70 pmol
599.00

#M0386T
(高浓度20X)400 pmol
1,619.00

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  • isoschizomers     |
  • compatible ends     | 
  • single letter code

特性

·双链 DNA 位点特异性切割
·基因组编辑 

概述

Cas9 核酸酶,S. pyogenes,是一种 RNA 介导的核酸内切酶,可以催化双链 DNA 的特异位点切割。其识别 PAM(Protospacer Adjacent Motif)序列的  NGG 处,在靶序列的 3 个碱基内进行切割。PAM 序列的 NGG 必须连在基因编辑靶标位点之后,位于与 sgRNA 互补的 DNA 的对链上。 

来源

重组 E. coli 菌株,其克隆有来自 Streptococcus pyogenes 的 Cas9 基因。 

反应条件

1X Cas9 核酸酶反应缓冲液,37℃ 温育。 

质保声明

Cas9 核酸酶,S. pyogenes 经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

浓度

1 μM,20 μM

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献,请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

Cas9 核酸酶,S.pyogenes 序列识别和 DNA 剪切工作原理示意图

 Spy Cas9 核酸酶                货   号                  #M0386M

EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶 货 号 #M0646M-NEB酶试剂 New England Biolabs

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EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶                              收藏

EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶                货   号                  #M0646M EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶                货   号                  #M0646M EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶                货   号                  #M0646M EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶                货   号                  #M0646M

货 号
规 格
价 格(元)
北京库存
上海库存
广州库存
成都库存
苏州库存

#M0646M
2,000 pmol
7,199.00

#M0646T
400 pmol
1,799.00

Download:       

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  • compatible ends     | 
  • single letter code

特性

· 双链 DNA 位点特异性切割
·    基因组编辑

概述:

EnGen Cas9 核酸酶 NLS, S. pyogenes, 是一种 RNA 介导的核酸内切酶,可以催化双链 DNA 的特异位点切割。其识别 PAM(Protospacer Adjacent Motif)序列的 NGG 处,在靶序列的 3 个碱基内进行切割。PAM 序列的 NGG 必须连在基因编辑靶标位点之后,位于与 sgRNA 互补的 DNA 的对链上。在 EnGen Cas9 核酸酶 NLS, S. pyogenes 蛋白质的 N-端和 C-端都含有猴病毒40 (SV40) T 抗原的核定位序列 (NLS)。

来源:

 重组 E. coli 菌株,含有克隆自酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)的 Cas9 基因,在其编码蛋白的 N-端和 C-端都含有猿猴病毒 40(SV40)抗原的核定位序列(NLS),N-端同时带有 6X His标签。

反应条件:

1× Cas9 核酸酶反应缓冲液
37℃
孵育
 
 

质保声明:

EnGen Cas9 核酸酶 NLS,S. pyogenes 经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。

详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com 查询。

浓度:

20 μM

参考文献

 关于该酶特性和产品应用的参考文献,请登陆www.neb.com 或 www.neb-china.com。

Acridine Orange (ultra pure) 吖啶橙(超纯) 品牌:Enzo


品牌:Enzo
CAS No.:65-61-2
储存条件:-20℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

ENZ-52405

100 mg 1,230.00


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动,恕不另行通知,确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。

产品描述相关资料下载相关产品浏览记录 分子量:301.8

纯度:≥95% (HPLC)

CAS:65-61-2

注意事项:保持干冷,避光。

核酸选择性阳离子荧光染料,用于细胞周期研究。具有细胞通透性,可与DNA或者RNA相互作用。与DNA连接时,与荧光素非常相似,激发光谱是502nm,

发射光谱是525nm(绿色)。当与RNA结合的时候,激发光谱漂移为460nm(蓝色),发射光谱漂移为650nm(红色)。可用于非特异性染酸性细胞器,

比如溶酶体。常用于落射荧光显微镜,波长:发射502nm,发射525nm。

Formaldehyde Solution 甲醛溶液 品牌:Wako


品牌:Wako
CAS No.:50-00-0
储存条件:室温
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

064-00406

JIS Special Grade 500 ml 咨询


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


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产品描述相关资料下载相关产品浏览记录 甲醛溶液 CAS. No. 50-00-0   分子量:HCHO   分子量:30.03 1.085 – 1.100g/ml (20 degrees C)

L-Aspartic Acid L-天门冬氨酸 品牌:Wako


品牌:Wako
CAS No.:56-84-8
储存条件:室温
纯度:99.0+%
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

013-04832

JIS Special Grade 25 g 300.00


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产品描述相关资料下载相关产品浏览记录 L-天冬氨酸 NMDA受体拮抗剂 CAS.NO 56-84-8   分子式 C4H7NO4   分子量 133.10 溶解性:水 稀盐酸 纯度:99.0+% (mass/mass)

FK-866 品牌:Adipogen


品牌:Adipogen
CAS No.:658084-64-1
储存条件:-20°C
纯度:>98% (NMR)
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

AG-CR1-0011-M005

5 mg 1,080.00


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产品描述相关资料下载相关产品浏览记录 CAS:658084-64-1

纯度:>=98%(NMR)

溶解度:溶于100%乙醇,二甲基甲酰胺(40mg/ml)或者DMSO(25mg/ml)

FK-866 品牌:Adipogen


品牌:Adipogen
CAS No.:658084-64-1
储存条件:-20°C
纯度:>98% (NMR)
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

AG-CR1-0011-M001

1 mg 500.00


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纯度:>=98%(NMR)

溶解度:溶于100%乙醇,二甲基甲酰胺(40mg/ml)或者DMSO(25mg/ml)

Trypsin, from Porcine Pancreas, MS Grade 猪胰腺胰蛋白酶质谱级别 品牌:Wako


品牌:Wako
CAS No.:9002-07-7
储存条件:-20℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

202-15951

for Proteome Research 20 ug×5 2,010.00


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产品描述相关资料下载相关产品浏览记录 胰蛋白,来源于猪胰腺,质谱级别 CAS. No. 9002-07-7 高特异性、高蛋白质消化率、适用于蛋白质谱分析提高裂解效率、增加肽段数量
根据使用量特意制备的小包装,方便使用 活性:13000units/mg 蛋白

重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)酶试剂盒Takara Clontech

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重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 632640 Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μ) 3 × 100 μg ¥6,845 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
Clontech 632641 Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μ) 100 μg ¥2,701 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
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Guide-it Recombinant Cas9 (Electroporation Ready)(Code No. 632641/632640)产品名称变更为Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl) ,产品内容没有发生变化。(2021年5月)
 
 
          基因敲除    
          重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)            
  基因敲入        
          重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)        
 
 
降低脱靶效应,可用于in vivo基因编辑实验
Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl)
· 适用于电穿孔方法的低甘油含量、高浓度的Cas9蛋白质溶液
· 与质粒导入系统相比较,脱靶效应受到明显抑制
· NLS(核定位信号)有助于实现快速高效突变导入
· 与Guide-it Complete sgRNA Screening System组合使用实现高效率的基因编辑
 
■ 产品说明:
Guide-it Recombinant Cas9(3 μg/μl)是来源于野生型酿脓链球菌Streptococcus pyogenes,适用于CRISPR/Cas9基因编辑实验的重组Cas9蛋白质溶液。
高浓度Cas9蛋白质溶液中甘油浓度比其他公司低,特别适用于电穿孔导入方法。与借助质粒导入Cas9基因序列方法相比较,避免了残留Cas9基因的持续表达,有效抑制了脱靶效应。
无需经过蛋白质转录·翻译·表达过程,C末端的NLS(核定位信号)可以实现快速有效的突变导入。
Cas9导入细胞首先需要形成Cas9-sgRNA核糖核蛋白复合物,sgRNA制备推荐使用Guide-it sgRNA In VitroTranscription Kit(Code No. 632635)或者Guide-it Complete sgRNA Screening System(Code No. 632636)。
 
■ 实验例:
重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
图1. AAVS1或者CXCR4基因同源重组修复(HDR)效率
Guide-it Recombinant Cas9(3 μg/μl)和修复模板复合物通过电穿孔的方式导入至CD34+造血干细胞中检测同源重组修复(HDR)效率。将包含Hind III酶切位点的修复模板插入至AAVS1 基因中,包含Hind III和BamH I酶切位点的修复模板插入至CXCR4基因中。之后通过对细胞内靶基因进行PCR扩增和限制酶剪切分析,确认突变导入效率。基因编辑效率标注在凝胶阳性孔处。在基因编辑前野生型CXCR4基因已包含1处BamH I位点,因此BamH I剪切CXCR4基因后额外多显示一条条带。
 
重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
图2. 不同公司Cas9产品在hiPS細胞中基因敲除效率比较
剪切后电泳条带的强弱可以半定量估计发生基因编辑细胞的百分数。Guide-it Recombinant Cas9(3 μg/μl)与Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit制备的sgRNA相结合,通过电穿孔的方法导入Cellartis hiPSC-18细胞,采用Guide-it Mutation Detection Kit(Code No. 631448)确认突变导入效率,%即表示基因编辑效率。如图所示,Guide-it Recombinant Cas9(3 μg/μl)在多数靶基因位点均显示有效的基因编辑。
  * 比较结果来自于Takara Bio USA, Inc.
 
 
■ 浓度
3 μg/μl
 
■ 保存
-70℃
(注意)避免反复冻融。首次溶解之后,建议按照使用量分装保存。
 
■ 所需要的其它产品(主要产品)
· 电穿孔装置:
Neon Transfection System(Thermo Fisher Scientific)或者 4-D Nucleofector System(Lonza)
*各装置的导入条件请阅读使用说明书。

· sgRNA制备及筛选
Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit(Code No. 632635):用于sgRNA制备及纯化
Guide-it Complete sgRNA Screening System(Code No. 632636):用于确认制备的sgRNA的有效性

 
 
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■ 关联资料
相关资料:
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重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
 
 

GMP级别重组Cas9蛋白质酶试剂盒Takara Clontech

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GMP级别重组Cas9蛋白质
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara T230 Recombinant Cas9 Protein GMP grade 0.6 mg 询价 GMP级别重组Cas9蛋白质 GMP级别重组Cas9蛋白质 GMP级别重组Cas9蛋白质
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■ 制品内容
0.2 ml溶液中含有0.6 mg蛋白质,保存在1 ml冻存管中
 
浓度:3 mg/ml
体积:200 μl
 
■ 制品说明
Recombinant Cas9 Protein GMP grade是一种重组的野生型酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)来源的Cas9蛋白质(SpCas9),其C端携带猿猴病毒40(SV40)核定位信号(NLS:nuclear-localization signal)。 SpCas9与来源于同种细菌的特定基因座(CRISPR:Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)所转录的短RNA(gRNA:向导RNA)形成核糖核蛋白(RNP:Ribonucleoprotein)复合物,这种RNP复合物可以序列特异性切断双链DNA(*参考文献1),被广泛用于包括哺乳动物细胞在内的各种细胞的基因组编辑(*参考文献2,3)。
本Cas9蛋白质溶液成分经过了优化,对哺乳动物细胞具有良好的耐受性,可降低导入哺乳动物细胞时所造成的细胞损伤。将此Cas9蛋白质和gRNA制备的RNP复合物,通过电穿孔、显微注射等方式导入至靶细胞进行敲除实验,经验证该Cas9蛋白质溶液对哺乳动物细胞具有良好的耐受性。
本制品生产符合GMP(药品生产质量管理规范)标准,确保了高品质。
※ 本制品的关联制品Guide-it Recombinant Cas9 (Electroporation-Ready)(Code No. 632641/632640),其缓冲液成分与本制品相同,经确认可以达到相同的基因组编辑效率。
 
Cas9蛋白质产品定制,请通过当地代理商或者以下联系方式联络我们。
TEL:010-80720985/86
 
■ 保存
-70℃及以下
(注意)避免反复冻融。
※一经开封,其制品品质将不在本公司GMP质量标准保证范围内;在没有开封的情况下,至多可以反复冻融5次,制品性能不会明显下降。
 
■ 分子量
159,665(根据氨基酸序列计算,1380个氨基酸)
 
■ 起源
E. coli expressing recombinant wild-type Streptococcus pyogenes Cas9 nuclease with a C-terminal nuclear localization signal(NLS) artificially synthesized based on Simian virus 40.
 
■ 纯度
HPLC纯度≥90%
 
■ 品质
·本制品符合GMP标准,并在该标准下进行制造和品质管理。
·本制品不含人源或动物源成分。
 
 
 
 
 

IBMX 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤 品牌:Adipogen


品牌:Adipogen
CAS No.:28822-58-4
储存条件:-20°C
纯度:>99% (HPLC)
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

AG-CR1-3512-M500

500 mg 1,020.00


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


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产品描述相关资料下载相关产品浏览记录 CAS:28822-58-4

纯度:>=99%(HPLC)

溶解性:溶于DMSO,乙醇或者甲醇,不溶于于水

Rapamycin 雷帕霉素 品牌:Enzo


品牌:Enzo
CAS No.:53123-88-9
储存条件:-20℃
纯度:≥98%
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

BML-A275-0005

5 mg 1,330.00


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


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产品描述相关资料下载相关产品浏览记录 自噬诱导剂。

分子式: C51H79NO13 

分子量: 914.2 

CAS: 53123-88-9

纯度: ≥98% (HPLC)

 溶解性: 氯仿,DMSO (25mg/ml) 或甲醇。

保存:-20℃。

稳定性:-20℃保存1年。液体,-20℃保存3个月。