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基因编辑后基因组序列确认酶试剂盒Takara Clontech

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基因编辑后基因组序列确认
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 631444 Guide-it Indel Identification Kit 10 rxns ￥6,113 基因编辑后基因组序列确认 基因编辑后基因组序列确认 基因编辑后基因组序列确认
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由于产品升级，从即日起，您订购的以上产品中的组分In-Fusion HD Cloning Kit (Code No. 639648)将陆续替换为性能更高的In-Fusion® Snap Assembly Master Mix (Code No. 638947)，该组分数量保持不变，请以实际收到的产品为准。如需含HD组分的旧版说明书或产品组分列表文件，请邮件联络sales@jinpanbio.com
 
 
          基因敲除    
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基因编辑后基因组序列确认
Guide-it™ Indel Identification Kit
· 确认细胞群中CRISPR/Cas9、TALENs、锌指核酸酶进行基因编辑后导入的突变位点基因序列
· 直接PCR与In-Fusion基因克隆技术相结合，以细胞裂解液为起始简便、快速且准确地获得目的克隆
· In-Fusion基因克隆技术无需连接过程，仅需15分钟即可实现无缝定向克隆
· 包含目的基因扩增、克隆、制备测序用样品所需的全部试剂的完整试剂盒
 
■ 产品说明
Guide-it Indel Identification Kit用于确认细胞群中CRISPR/Cas9、TALENs、锌指核酸酶进行基因编辑后所导入的序列插入和缺失(indels)，本试剂盒可以提供完整的操作流程。

本试剂盒包含了目的基因扩增、克隆、制备测序用样品所需的全部试剂。Terra PCR Direct polymerase可直接以粗提细胞裂解液为样品扩增包含靶位点的基因组DNA片段。采用In-Fusion基因克隆技术可将扩增获得的目的基因片段直接克隆至预线性化pUC19载体中，而无需经过限制性酶切处理。将重组质粒转化至Stellar感受态细胞，通过菌落PCR扩增靶标区域。分析PCR产物的DNA序列确认突变位点序列。
基因编辑后基因组序列确认
图1．实验流程
 
Step1 Guide-it Indel Identification Kit用于确认细胞群中经过基因编辑后所导入的序列插入和缺失(indels)，本试剂盒可以提供完整的操作流程。本试剂盒所采用的PCR酶可以直接以粗提细胞裂解液为起始扩增基因组DNA片段（约500-700 bp）
Step2 扩增产物是来自于所有细胞包含基因编辑靶标位点的基因组片段的集合。采用In-Fusion基因克隆技术可将扩增产物直接克隆至预线性化pUC19载体中。
Step3 将重组质粒转化至经过优化的大肠杆菌菌株，通过菌落PCR扩增靶标区域
Step4 通过DNA测序分析确认突变位点序列
 
基因编辑后基因组序列确认
图2．CRISPR/Cas9基因编辑后，确认CD81基因插入、缺失序列
 
转染表达Cas9和作用于CD81基因的sgRNA至Hela细胞进行基因编辑，采用Guide-it Indel Identification Kit制备CD81基因靶位点测序用样品。选择6个克隆进行测序并将测序数据与野生型基因序列进行比对，确认CD81基因导入的突变位点序列。
 
■ 产品组分
· Guide-it Indel Identification Components
  Terra PCR Direct Polymerase Mix 110 μl
  2X Terra PCR Direct Buffer (with Mg2+, dNTP) 1 ml×3
  Extraction Buffer 1 400 μl
  Extraction Buffer 2 40 μl
  pUC19 Cloning Vector, linearized (50 ng/μl) 10 μl
  Colony PCR Forward Primer (15 μM) 200 μl
  Colony PCR Reverse Primer (15 μM) 200 μl
  PCR-Grade Water 1 ml×6
 
· In-Fusion Snap Assembly Master Mix
· NucleoSpin Gel and PCR Clean-up
· Stellar Competent Cells（Code No. 636763）
 
■ 保存
Guide-it Indel Identification －20℃
In-Fusion Snap Assembly Master Mix －20℃
NucleoSpin Gel and PCR Clean-up 室温
Stellar Competent Cells  
    Stellar Competent Cells ： －70℃
    其它组份： －20℃
 
 
产品详情请点击：基因编辑后基因组序列确认
 
 
 

EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶 货 号 #M0646M-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 基因编辑 – 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶                              收藏

EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶 货 号 #M0646M EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶 货 号 #M0646M EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶 货 号 #M0646M EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶 货 号 #M0646M

货 号
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价 格(元)
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#M0646M
2,000 pmol
7,199.00
有
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有
无
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#M0646T
400 pmol
1,799.00
有
有
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有
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特性

· 双链 DNA 位点特异性切割
·    基因组编辑

概述：

EnGen Cas9 核酸酶 NLS, S. pyogenes, 是一种 RNA 介导的核酸内切酶，可以催化双链 DNA 的特异位点切割。其识别 PAM（Protospacer Adjacent Motif）序列的 NGG 处，在靶序列的 3 个碱基内进行切割。PAM 序列的 NGG 必须连在基因编辑靶标位点之后，位于与 sgRNA 互补的 DNA 的对链上。在 EnGen Cas9 核酸酶 NLS, S. pyogenes 蛋白质的 N-端和 C-端都含有猴病毒40 (SV40) T 抗原的核定位序列 (NLS)。

来源：

 重组 E. coli 菌株，含有克隆自酿脓链球菌（Streptococcus pyogenes）的 Cas9 基因，在其编码蛋白的 N-端和 C-端都含有猿猴病毒 40（SV40）抗原的核定位序列（NLS），N-端同时带有 6X His标签。

反应条件：

1× Cas9 核酸酶反应缓冲液
37℃ 孵育
 
 

质保声明：

EnGen Cas9 核酸酶 NLS，S. pyogenes 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com 查询。

浓度：

20 μM

参考文献

 关于该酶特性和产品应用的参考文献，请登陆www.neb.com 或 www.neb-china.com。