设计 LAMP 引物，请使用 NEB LAMP Primer Design Tool
·为环介导等温扩增（LAMP）提供便捷的一步法解决方案，可用于 DNA 或 RNA（RT-LAMP）样品
·预混液含热敏 UDG 和 dUTP，降低残留污染风险
·预混液具备完全缓冲力，可兼容不同样品类型，适用于多种检测方法
·温启动技术可在室温下抑制酶活性
·如需了解使用 RT-LAMP 进行 COVID-19 快速筛查，请点击 Learn more
WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG）为 LAMP/RT-LAMP 提供了便捷的一步法解决方案，适用于 DNA 或 RNA 样品。LAMP 和 RT-LAMP 是一种常用等温扩增技术，通过使用 LAMP 特异性引物（用户自备）和链置换 DNA 聚合酶进行靶标核酸的快速检测。该预混液是在优化后 LAMP 缓冲液中混入了 Bst 2.0 WarmStart DNA 聚合酶和 WarmStart RTx 反转录酶。Bst 2.0 WarmStart DNA 聚合酶和 WarmStart RTx 反转录酶均经过基因工程改造，提高了在 LAMP 和 RT-LAMP 反应中的性能。WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG）具备完全缓冲力，可兼容不同样品类型，适用于多种检测方法，包括：浊度检测、实时荧光检测（使用 LAMP 荧光染料时）和终点可视化检测，例如：基于金属离子指示剂的变色检测（羟基萘酚蓝）
由于先前扩增的产物会无意中成为后续反应的底物造成污染，因此预混液中的 dUTP 和热敏 UDG 可有效降低残留污染风险。热敏 UDG 在温度＞50℃时可完全失活，因此对反应没有影响。
图 1：WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG）适用于多种检测方法
使用 WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG）（NEB #M1708）对 RNA 或 DNA 样品扩增，可通过多种实时（A）和终点（B）检测方法进行结果判定。这些检测方式包括荧光法、不基于 pH 的变色法（例如：羟基萘酚蓝）、浊度法或琼脂糖凝胶电泳。对于实时荧光检测，可使用包含 50X LAMP 荧光染料的试剂盒（NEB #E1708），在常规实时 PCR 仪器的 SYBR®/FAM 通道中进行监测。
图 2：LAMP/RT-LAMP 预混液和适用样品类型
NEB 基于 pH 变化的 WarmStart 变色LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含/不含 UDG）（NEB #M1804）（NEB# M1800）缓冲力低，因此可使用 pH 敏感染料进行可视化扩增检测。基于 pH 值改变而产生的颜色变化（如粉红变黄色）所需缓冲力要低，高缓冲力样品或酸性样品可能会影响颜色变化，因此，这种方法限制了检测样品的种类。WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含/不含 UDG）（NEB #M1708，NEB #E1708）（NEB #E1700）是完全缓冲的，可检测所有样品类型，适用于多种检测方法，包括荧光或其它变色染料（例如：羟基萘酚蓝）
图 3：WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG）对人 DNA 和 RNA 靶标进行稳健检测
使用 WarmStart 荧光 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（不含 dUTP/UDG）（NEB #M1700 试剂盒中的组分）和 WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG）（NEB #M1708）进行 RT-LAMP（RNA 靶标）或 LAMP（DNA 靶标）实验。反应加入 1X LAMP 引物和 1X LAMP 荧光染料后，分别加入三个数量级的 Jurkat RNA 或 Jurkat DNA （10 ng-0.1 ng）和无模板对照（NTC），每个样品做 4 个重复，形成 25 µl 反应体系，置于 96 孔板中 65℃孵育 40 分钟。使用实时热循环仪（Bio-Rad® CFX96）中的 SYBR/FAM 通道进行 15 秒一次的荧光检测。每个点代表荧光信号超过仪器阈值的时间。除了个别说明外，每个样品都检测到所有 4 个重复（注：如果各重复的检测时间相似，则检测点重叠）。总体而言，各样品检测结果显示：NEB #M1700 和 NEB #M1708 性能一致。无模板对照均无扩增。
图 4：WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG）对人 DNA 和 RNA 靶标进行稳健检测
通过手动或 TEMPEST® 自动化液体处理工作站（96 孔，25 µl 反应）建立针对于合成 SARS-CoV-2 RNA 样品的 LAMP 检测体系。检测样品为：阳性样品（人总 RNA 混入 5,000、500 或 50 拷贝的合成 SARS-CoV-2 RNA）或无模板对照（NTCs）。经 65℃ 孵育 40 分钟，使用 1X LAMP 荧光染料在实时荧光仪器（Bio-Rad CFX96）中的 SYBR/FAM 通道检测。结果显示：两种体系的检测时间和最低检出限（LOD）结果一致。
图 5：WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG）兼容不基于 pH 的变色法（例如：羟基萘酚蓝）
使用 WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG）和针对 N 和 E 基因的混合引物对合成 SARS-CoV-2 RNA 进行扩增，使用 0.12 mM 羟基萘酚蓝作为变色金属指示剂。检测样品为：阳性样品（人总 RNA 混入 5,000、500 或 50 拷贝的合成 SARS-CoV-2 RNA）、阴性样本（人总 RNA）或无模板对照（NTCs），如图所示。反应体系（25 µl）经 65℃孵育 45 分钟后，进行肉眼检测。
A.所有阳性样品均显示阳性结果，包括在所有仅含 50 拷贝的低起始量样品（n = 20），颜色明显从紫色变为蓝色。
B.所有阴性样品均未出现颜色变化（n = 32）。
