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WarmStart® 荧光 LAMP/RT-LAMP 试剂盒 收藏
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l 是切刻内切酶
l WarmStart 技术可在低于40°C 条件下抑制酶活性
l 产生切刻的 DNA 分子,而不是切断的 DNA 分子
l 可在室温条件下建立反应,在链置换扩增(SDA)反应中表现极佳
l 限制性内切酶酶切位点:GAGTC(4/-5)
WarmStart Nt.BstNBI,克隆自嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus Stereothermophilus),是一种位点特异性切刻内切酶。配方中加入了能够可逆结合的适配体,在低于 40℃ 条件下抑制酶的切刻活性。WarmStart Nt.BstNBI 仅切割双链 DNA 底物上的一条链,在识别序列后第 4 个碱基的 3´ 端产生单链切刻。
重要说明
Nt.BstNBI催化在识别序列的 3′端产生一个单链切刻。WarmStart 功能实现是通过在配方中加入 DNA 适配体,在低于 40°C 条件下抑制酶活性。
图 1:WarmStart Nt.BstNBI 在 25 °C条件下检测不到活性
结论:WarmStart 版本在 55°C 条件下与常规版本活性相当,而在 25°C 条件下未检测到活性
图 3: WarmStart Nt.BstNBI 能够在室温下建立反应,因此在 SDA 中表现极佳
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设计 LAMP 引物,请使用 NEB LAMP Primer Design Tool
WarmStart 荧光 LAMP/RT-LAMP 试剂盒(含 UDG)为 LAMP/RT-LAMP 的实时荧光检测提供了便捷的一步法解决方案。LAMP 和 RT-LAMP 是一种常用等温扩增技术,通过使用 LAMP 特异性引物(用户自备)和链置换 DNA 聚合酶进行靶标核酸的快速检测。该试剂盒包含的 WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(含 UDG)(NEB #M1708),是在优化后 LAMP 缓冲液中混入了 Bst 2.0 WarmStart DNA 聚合酶和 WarmStart RTx 反转录酶。Bst 2.0 WarmStart DNA 聚合酶和 WarmStart RTx 反转录酶均经过基因工程改造,提高了在 LAMP 和 RT-LAMP 反应中的性能。试剂盒还提供 50X LAMP 荧光染料,用于实时荧光检测。
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WarmStart® RTx 反转录酶是一种依赖 RNA 的 DNA 聚合酶,它利用核酸适配体技术,通过共价键作用结合到聚合酶上,从而抑制 RTx 在 40℃ 以下的活性。WarmStart RTx 以 RNA(cDNA 合成)或单链 DNA 作为模板合成互补 DNA 链。RTx 酶适用于扩增反应中 RNA 的检测,特别适用于 LAMP(环介导等温扩增)实验。WarmStart 特性是:特别适用于高通量反应,室温下建立反应,并提高扩增反应的一致性和特异性。RTx 反转录酶包含完整的 RNase H 活性。
重组 E. coli 菌株,携带有基因工程改造的RTx 基因。
无核酸内切酶、外切酶和 RNase 污染。
15,000 units/ml。
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WarmStart DNA 聚合酶可以在室温下建立反应,防止非特异性扩增,提高反应效率
Bst 2.0 WarmStart DNA 聚合酶可以消除在室温条件下建立反应时,产生的非特异性的扩增,而传统的 Bst DNA 聚合酶或同源物可以掺入非模板序列核苷酸。
Bst 2.0 WarmStart 的优势:无论刚建立反应(实线)或 25℃ 温育 2 小时后,都能使 LAMP 实验在相同的时间点迅速启动反应。没有 Bst 2.0 WarmStart 的保护,在室温条件下温育的 LAMP 实验结果不一致。Bst 2.0 WarmStart 让扩增结果更均一,可以室温和高通量建立反应。
来源于 E. coli 菌株,该菌株携带有诱导启动子,可表达 Bst 2.0 DNA 聚合酶蛋白。
[20 mM Tris-HCl (pH 8.8 @ 25℃),50 mM KCl,10 mM (NH4)2S04,2 mM MgS04,0.1% Tween-20]。
1 单位指 65℃ 条件下反应 30 分钟,能使 25 nmol 的 dNTPs 掺入酸不溶性沉淀物所需的酶量。
8,000 和 120,000 units/ml。
80℃ 20 分钟。
Bst 2.0 DNA 聚合酶不具有 3´→5´ 核酸外切酶活性。Bst 2.0 WarmStart DNA 聚合酶的反应温度可以为 60-72℃。Bst 2.0 DNA 聚合酶不能用于热循环测序或 PCR。