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pMAL-p5X 载体（停产） 货 号 #N8109S-NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统 ：大肠杆菌

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货 号
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#N8109S
10 μg
1,069.00
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停产通知：

 产品于2020 年 6 月 30 日停产

概述

pMAL 载体用于 pMAL 蛋白融合表达和纯化系统（NEB #E8200）。利用“Ptac”强启动子和 MBP 起始

翻译信号，目的基因与 malE 基因（编码 MBP 蛋白）融合表达。同时，它们含有与 NEB 其它表达系统

相兼容的多克隆位点。pMAL-c5 载体删除了malE信号序列，融合蛋白将在细胞质中表达。pMAL-p5X 载

体含有 malE 信号序列，它将引导融合蛋白穿越质膜。pMAL-c5XHis 载体可以在其目的蛋白的 C – 末端

添加 6个his 标签。所有的载体都含有一段特异性蛋白酶识别位点序列，融合蛋白纯化后，通过蛋白酶可

将目的蛋白与 MBP 切割分离。[载体 pMALc5E含有一个肠激酶（NEB #P8070）的特异性切割位点；载

体 pMAL-c5X ，pMAL-p5X 和 pMAL-p5XHis含有一个 Factor Xa 蛋白酶（NEB #P8010）的特异性切割

位点。] 

浓度

145 ~ 240 μg/ml。 

参考文献

关于本产品特点与应用的参考文献请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com。

 

推荐用于测序的引物（不随产品提供）如下：

正向引物（24-mer，位于 malE 基因上游）
5´d(GGTCGTCAGACTGTCGATGAAGCC)3´

反向引物（24-mer，位于多克隆位点下游）

5´d(TGTCCTACTCAGGAGAGCGTTCAC)3´ 

pMAL-c6T 载体 货 号 #N0378S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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#N0378S
10 µg
1,739.00
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特性

 ·pMAL-c6T 是 NEBExpress® MBP 融合表达及纯化系统（NEB＃E8201）中推荐的载体

 ·目标蛋白与 MBP 融合表达可显著增强其在大肠杆菌中的溶解度和正确折叠（1）
 ·载体包含 His-tag 和 TEV 蛋白酶识别位点，使用 TEV 蛋白酶（NEB＃P8112）可将目标蛋白从 MBP 上切下来
 ·两步纯化：Amylose 树脂洗脱后进行 TEV 蛋白酶切割和 Ni 树脂分离，终产物为高纯度、无标签的靶蛋白
 ·经设计改造，MBP 可更紧密的结合到 Amylose 树脂上。
 ·具有氨苄青霉素抗性
 

概述

 pMAL-c6T 载体提供了一种从克隆基因或开放阅读框到蛋白表达的方法。克隆基因插入到大肠杆菌的 malE 基因下游，malE 基因编码麦芽糖结合蛋白（MBP），从而使 MBP 融合蛋白在细胞质中表达（1，2）。MBP 经设计改造，可更紧密的结合到 Amylose 树脂上。该方法利用 “tac” 强启动子和 malE 翻译起始信号，使克隆序列得到高水平表达（3，4），同时可利用 MBP 对麦芽糖的亲和力，一步纯化融合蛋白（5）。该载体表达 N 端六组氨酸标记的 malE 基因（缺少分泌信号序列），随后是包含 TEV 蛋白酶识别序列的多克隆酶切位点，以及三位终止密码子。从而可在纯化后，使用 TEV 蛋白酶将 MBP 从目标蛋白上切下来。该载体还携带 lacIq 基因，该基因编码 Lac 阻遏蛋白。在没有 IPTG 诱导的情况下，可使 Ptac 低水平表达

pMAL-c6T 载体 货 号 #N0378S

pMAL-c6T 载体的 malE 基因上具有明确的信号序列缺失，箭头指示转录方向，多克隆酶切位点（MCS）中标注了限制性内切酶位点

产品来源
NEB-10 beta competent E. coli （pMAL-c6T）

亲和标记
麦芽糖结合蛋白（MBP）
 
储存温度
-20°C
 
序列信息
Fasta GenBank
 

pMAL™ 蛋白融合表达系统（停产，有替代） 货 号 #E8200S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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#E8200S
1 set
6,709.00
无
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停产通知

产品于2020 年 6 月 30 日停产，替代产品为：NEBExpressTM MBP 融合表达及纯化系统（E8201）

单独出售的相关产品

Amylose 树脂
#E8021V 10 ml . . . . . . .¥1,179
#E8021S 15 ml . . . . . . .¥1,779
#E8021L 100 ml . . . . . . .¥8,609
 
Xa 因子蛋白酶
#P8010V 25 μg . . . . . . . . ¥379
#P8010S 50 μg . . . . . . . . ¥729
#P8010L 250 μg . . . . . . .¥2,889
 
pMAL-p5X 载体
#N8109S 10 μg . . . . . . .¥1,069
 
pMAL-c5X 载体
#N8108S 10 μg . . . . . . .¥1,069

 

 

特性

 超过 75% 的蛋白可获得高效表达，蛋白产量可达 100 mg/L
 可在细胞质或周质中表达：在周质或SHuffle® 细胞质中表达均可提高二硫键的形成，促进蛋白折叠
 增强可溶性：MBP 融合蛋白增强了蛋白质在大肠杆菌中的可溶性
 采用麦芽糖温和洗脱：无去污剂或变性剂对蛋白活性产生影响 

对于产品详细描述和 pMAL-p5X 载体图谱，包括 MCS（多克隆酶切位点），请见目录 386 页。关于pMAL 载体序列文件，请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com 查询。

概述

pMAL 系统是一种高效的蛋白融合表达及纯化系统。pMAL 载体含有编码麦芽糖结合蛋白（maltosebinding protein, MBP）的大肠杆菌 malE 基因，其下游的多克隆位点便于目的基因插入，表达 N 端带有 MBP 的融合蛋白。通过“Ptac”强启动子和 MBP 翻译起始信号使克隆基因获得高效表达，并利用 MBP 对麦芽糖的特异性结合实现融合蛋白的一步亲和纯化（图 1）。

此系统的 pMAL 载体在邻近多克隆位点处含有一段编码特异性蛋白酶识别位点的序列，从而便于纯化后将目的蛋白与 MBP 切割分离，并且目的蛋白不含任何来自载体的氨基酸。为了实现这一目的，多克隆位点中有一限制性内切酶识别位点正好位于特异性蛋白酶识别位点处，同时也是目的基因插入的位点。

pMAL 系列载体可从 1 升的培养液中表达出 100 mg 的融合蛋白。大部分情况下，表达出的融合蛋白是可溶的，因为 MBP 已经被证实可提高大肠杆菌中表达蛋白的可溶性。尽管没有一种表达系统适用于所有克隆基因，但 pMAL 蛋白融合表达和纯化系统经证实：在被检测的已知蛋白中，有超过 75% 能表达出稳定产量。

由于 pMAL-c5X 载体上删除了 malE 信号序列，因此融合蛋白在细胞质中表达。而 pMAL-p5X 载体含有 malE 信号序列，它将引导融合蛋白穿越质膜进入细胞周质。 

pMAL™ 蛋白融合表达系统（停产，有替代） 货 号 #E8200S
图 1：pMAL 系统流程示意图。

pMAL 蛋白融合表达和纯化系统组成

  – pMAL-c5X, pMAL-p5X
– Amylose 树脂（结合容量 ～6-8 mg/ml 体积）
– Xa 因子蛋白酶
– MBP5（SDS-PAGE 电泳用 marker）
– MBP5-paramyosin-ΔSal
（Xa 因子蛋白酶切割的对照蛋白）
– E. coli ER2523（NEB 表达用感受态细胞）

参考文献

关于本产品特点与应用的参考文献请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com。 

pMAL-c5X 载体（停产，有替代） 货 号 #N8108S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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#N8108S
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停产通知：

 产品于2020 年 6 月 30 日停产，替代产品为：pMAL-c6T 载体（N0378）

概述

pMAL 载体用于 pMAL 蛋白融合表达和纯化系统（NEB #E8200）。利用“Ptac”强启动子和 MBP 起始

翻译信号，目的基因与 malE 基因（编码 MBP 蛋白）融合表达。同时，它们含有与 NEB 其它表达系统

相兼容的多克隆位点。pMAL-c5 载体删除了malE信号序列，融合蛋白将在细胞质中表达。pMAL-p5X 载

体含有 malE 信号序列，它将引导融合蛋白穿越质膜。pMAL-c5XHis 载体可以在其目的蛋白的 C – 末端

添加 6个his 标签。所有的载体都含有一段特异性蛋白酶识别位点序列，融合蛋白纯化后，通过蛋白酶可

将目的蛋白与 MBP 切割分离。[载体 pMALc5E含有一个肠激酶（NEB #P8070）的特异性切割位点；载

体 pMAL-c5X ，pMAL-p5X 和 pMAL-p5XHis含有一个 Factor Xa 蛋白酶（NEB #P8010）的特异性切割

位点.

浓度

145 ~ 240 μg/ml。 

参考文献

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推荐用于测序的引物（不随产品提供）如下：

正向引物（24-mer，位于 malE 基因上游）
5´d(GGTCGTCAGACTGTCGATGAAGCC)3´

反向引物（24-mer，位于多克隆位点下游）

5´d(TGTCCTACTCAGGAGAGCGTTCAC)3´