HE染色的方法介绍及观察

HE染色是组织切片染色的一种，有利于观察组织的形态学特征。今天我来讲讲HE染色的方法步骤。

首先，HE染色也和免疫组化一样，需要将组织切片进行脱蜡水化，所以步骤是这样的：

脱蜡之前需将玻片在烤箱中烤10分钟（60度），然后按通风橱里溶液的顺序，依次是二甲苯I浸泡10分钟，二甲苯II浸泡10分钟，二甲苯III浸泡10分钟，无水乙醇I浸泡5分钟，无水乙醇II浸泡5分钟，90%乙醇浸泡5分钟，80%乙醇浸泡5分钟，75%乙醇浸泡5分钟，之后转移到蒸馏水中在摇床上摇5分钟，换PBS摇5分钟。

上面的步骤是相同的，接下来就是不同的了。

苏木素染色5-10mins;

流水冲洗1min；

1%的盐酸酒精1-3s；

流水冲洗5-10s；

80%的酒精2-3s；

90%的酒精2-3s；

95%的酒精2-3s；

无水乙醇  2-3s；

二甲苯1 1-2mins；

二甲苯2 1-2mins；

封片观察

上面的叙述已经结束了，HE染色也应该结束了。相信你也拿到了很好的染色结果。

前面我已经讲了HE染色的原理和注意事项，相信大家也有了解。好了，今天的《实验进行》就到这里了。

制霉菌素的作用

                                                                                                        制霉菌素的作用

鲑鱼精DNA的产品介绍

该产品是经超声处理的鲑鱼精DNA。经超声处理后，再用乙醇沉淀而得到最终产品。超声将大片段的DNA分子切割成587～831bp的小片段。这个范围内的片段被证明是最适合用于原位杂交实验的。在超声处理的过程中通过电泳检测片段的大小。一旦片段到达合适的大小范围，就会通过加热煮沸的方式使之变性。该产品主要用于原位杂交实验中封闭膜上的非特异性条带。鲑鱼精DNA中的GC含量为41.2%，AT含量为58.8%。

原位杂交技术是利用已知的RNA或DNA探针与染色体、细胞或组织的靶序列结合，揭示相关DNA在样品中的分布情况。在原位杂交实验中存在非特异性的探针信号，这些非特异性探针对实验结果的真实性会有营养，因此应当在实验过程中想方设法消除这种因素所带来的影响。常用的方法是在原位杂交探针中加入小片段的封闭DNA或RNA，它们可以起到封闭样品中非特异性片段的作用。因为这些小片段很容易和靶位点上具有普遍同源性的短序列结合，因此降低了非特异性信号。鲑鱼精DNA是原位杂交实验中一种常用的封闭DNA。

我公司产品鲑鱼精DNA溶液（H1060），浓度为10mg/ml，是经过酚-氯仿抽提，超声和热变性处理的短片段单链DNA溶液，可直接用于Southern、Northern等原位杂交实验中，无需另行处理，只需稀释到具体的使用浓度即可，使用方便简单。保存温度为-20℃。如一次用量较少，可分装保存，避免反复冻融。

核酸的银染

核酸的银染，是一个独立于琼脂糖电泳的实验，或者说是核酸另一种电泳的更加灵敏的检测手段。银染就是硝酸银离子在碱性 pH 环境下被还原成金属银，沉淀在蛋白质的表面上而显色。

但是这个银染和蛋白银染有什么关系吗？

我想说的是，原理是差不多的或者说是一样的。但是步骤是不一样的，在我们的蛋白银染试剂盒中的步骤是这样的：固定—敏化—水洗—染色—显色—终止—保存；这里面的敏化对银染的效果有较好的帮助，能更灵敏的显示蛋白的存在。

今天我们重点来讲讲核酸的银染吧。这个操作简单，耗时很短，显色结果漂亮。

首先我们来讲这个操作步骤吧！

倾倒缓冲液，取出电泳槽，卸除玻璃板，剥胶，将凝胶浸入固定液，于摇床固定5～10分钟。蒸馏水洗胶两次（数秒），倒入银染液，于摇床染色5～10分钟。

蒸馏水洗胶两次，倒入显色液，于摇床轻摇，至出现扩增条带，带清晰后加dH2O洗胶停显。

看是不是很简单，其实就是很简单，简单得只要你不犯错就好了。

这里我说的简单就是战略上藐视，战术上重视。拿100%的认真换取一个可靠漂亮的结果，不要被我的一句简单，就按照字面的意思去理解。简单也是要认真才是简单。这让我想起了一个故事，一个脖子上装着一个饼，却因为饥饿而死的人。明明张口就能吃到食物，却还是而死了。明明很简单的事，却被弄成一个很复杂的结果。

各位实验者们，认认真真的体会一个简单而漂亮的结果吧。它其实也是需要100%的专注的。

细胞基础培养基的基本知识

而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。

MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。

Dulbecco`s改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。

有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。F12中含有硫酸亚铁，也具有神经毒效应。

在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。

MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。

原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。实际操作中并非如此简单。显然，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。

Leiboviz`s L15培养基可用来在大气环境中令神经细胞生长，该培养基采用了与众不同的BSS作基础，它含有高浓度的氨基酸来提高缓冲能力，培养基中使用半乳糖作碳源，以阻止培养基中乳酸形成，少量溶解的CO2由丙酮酸代谢产生。这一培养基的优点是明显的，特别是在保持较高CO2有困难时，例如在长时间的显微操作及生理学研究中。L15培养基已用来成功的培养了外周神经元，但尚未在CNS神经元的发育研究中全面检测过。