DTT（二硫苏糖醇）的作用

                                       DTT（二硫苏糖醇）的作用

         DTT即DL-Dithiothreitol，中文名为二硫苏糖醇。分子式为C4H10O2S2，分子量为154.25，。常用还原剂，有抗氧化作用。DTT和巯基乙醇相比，作用相似，但DTT的刺激性气味要小很多，毒性也比巯基乙醇低很多。而且DTT比巯基乙醇的浓度低7倍时，两者效果相近。

悬浮培养基（SM,2%）的应用

 悬浮培养指的是一种在受到不断搅动或摇动的液体培养基里，培养单细胞及小细胞团的组织培养系统，是非贴壁依赖性细胞的一种培养方式。某些贴壁依赖性细胞经过适应和选择也可用此方法培养。

增加悬浮培养规模相对比较简单，只要增加体积就可以了。深度超过5mm，需要搅动培养基，超过10cm，还需要深层通入CO2和空气，以保证足够的气体交换。通过振荡或转动装置使细胞始终处于分散悬浮于培养液内的培养方法。

注意事项：

1、 注意无菌操作，尽量避免污染。

2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

简述实验室微生物培养步骤方法

微生物培养（microculture)是生物培养的中的一种。所培养的微生物主要有病毒、细菌、放线菌、真菌等。微生物培养需要用到培养基，根据微生物的不同种类和生活习性来配制特定的培养基。微生物培养成功的关键在于无菌操作，如果培养器具和培养基不能彻底灭菌、培养的过程中有杂菌污染是很容易失败的。那么微生物培养步骤有哪些呢？

实验室微生物培养步骤

实验材料

1 培养基和菌种

淀粉琼脂培养基(高氏I号培养基)，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，马丁氏琼脂培养基，查氏琼脂培养基，活性污泥混合液。普通琼脂斜面和平板,营养肉汤,普通琼脂高层(直立柱)。大肠杆菌、金黄色葡萄球菌。

2 溶液或试剂

10%酚液，盛9ml无菌水的试管，盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶，4%水琼脂。

3 仪器或其它用具

无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环，无菌培养皿，链霉素和土样，显微镜，血细胞计数板、涂布器等。酒精灯，玻璃铅笔，火柴，试管架、接种环、接种针、接种钩、滴管、移液管、三角型接种棒等接种工具。

微生物培养步骤

1、流程

倒平板→制备梯度稀释液→涂布（或划线法）→培养→挑单菌落→保存。

2、步骤

2.1稀释涂布平板法

2.1.1 倒平板

将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏I号琼脂培养基、马丁氏琼脂培养基加热溶化待冷至55～60℃时，高氏I号琼脂培养基中加入10%酚数滴，马丁氏培养中加入链霉素溶液(终浓度为30μg/ml)，混合均匀后分别倒平板，每种培养基倒三皿。

倒平板的方法：右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻轻地拨出，试管或瓶口保持对着火焰；然后左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒人培养基约15ml，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。

2.1.2 制备活性污泥混合液稀释液

称取土样l0g，放入盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇约20min，使土样与水充分混合，将细胞分散。用一支lml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取lml加入另一盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6不同稀释度的活性污泥混合液溶液，注意：操作时管尖不能接触液面，每一个稀释度换一支试管。

2.1.3 涂布

将上述每种培养基的三个平板底面分别用记号笔写上10-4、10-5和10-6三种稀度，然后用无菌吸管分别由10-4、10-5和10-6，从三管活性污泥混合液稀释液中各吸取0.1或0.2ml，小心地滴在对应平板培养基表面中央位置。用无菌玻璃涂棒，右手拿无菌涂棒平放在平板培养基表面上，将菌悬液先沿同心圆方向轻轻地向外扩展，使之分布均匀。室温下静置5～l0min，使菌液浸入培养基。

2.1.4 培养

将高氏I号培养基平板和马丁氏培养基平板倒置于28℃温室中培养3～5d，肉膏蛋白胨平板倒置于37℃温室中培养2～3d。

2.1.5 观察并挑菌落

将培养后长出的单个菌落根据其大小、颜色、形状等特征进行观察，之后根据菌落不同特征分别挑取少许细胞接种到上述三种培养基斜面上，分别置28℃和37℃温室培养。若发现有杂菌，需再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养。

2.2 平板划线分离法

2.2.1 倒平板

按稀释涂布平板法倒平板，并用记号笔标明培养基名称、土样编号和实验日期。

2.2.2 划线

在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取上述10-l的活性污泥混合液悬液一环在平板上划线。划线的方法很多，但无论采用哪种方法，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使之形成单个菌落。

用接种环以无菌操作挑取活性污泥混合液悬液一环，先在平板培养基的一边作第一次平行划线3～4条，再转动培养皿约70度角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再用同样的方法通过第二次划线部分作第三次划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线。划线完毕后，盖上培养皿盖，倒置于温室培养。

硫酸钙的性质及应用

硫酸钙白色单斜结晶或结晶性粉末。无气味。有吸湿性。自然界中以石膏矿形式存在。由于其形式为某酸某，所以涉及到原子团，其根为硫酸根，所以为SO4 其他常见的有硫酸根的还有硫酸亚铁，硫酸铜，硫酸钠等等

硫酸钙的性质：

化学性质

硫酸钙熔点1450℃。加热至100℃失去部分结晶水而成为半含水盐(CaS O4?1/2H2O)，称煅石膏。室温时重又成为二水盐，如再加热，则完全脱水成无水盐；即使再加水也不恢复。难溶于水(0.26g/100ml，18℃)，溶液皇中性，有涩味。微溶于甘油。不溶于乙醇。

物理性质

硫酸钙（二水合物）溶解度：

0℃ 0.233

10℃ 0.244

18℃ 0.255

30℃ 0.264

40℃ 0.265

65℃ 0.244

75℃ 0.234

硫酸钙(CaSO4)无色正交或单斜晶体，单斜晶体熔点1450℃，1193℃正交转单斜晶体。密度2.61克/立方厘米，微溶于水。1200℃以上可以分解：

2CaSO4 ==1200℃== 2CaO+2SO2↑+O2↑

一般由天然产出。也是磷酸盐工业和某些其他工业的副产品。

硫酸钙的应用：

1）硫酸钙主要用作磨光粉、油漆白颜料、纸张填充料、气体干燥剂等。二水硫酸钙主要用于制造水泥、硫酸及半水硫酸钙；也用作降低土壤碱度和改善土壤性能；还可用作豆腐凝固剂及化学试剂等。α型半水硫酸钙主要用作建筑上的高强度石膏构件，石膏扳，构造模型及机械加工时固定胶凝加工件等。β型半水硫酸钙主要用作建筑材料，粉饰石膏构件、石膏器皿，美术工艺上用作雕塑模型，粉笔胶凝剂，杀虫剂的稀释剂，牙科材料。在中药上用于生肌敛疮。

2）氮肥生产分析微量一氧化碳和二氧化碳作吸湿剂、涂料、人造象牙、油漆、造纸、染料、印花、冶金、处理水。作为食品添加剂和加工助剂，药物。

3）用作水泥原料;用作水泥阻滞剂;石膏

4）除大量用作建筑材料和水泥原料外，广泛用于橡胶、塑料、肥料、农药、油漆、纺织、食品、医药、造纸、日用化工、工艺美术、文教等部门。在缺乏硫资源的地区，可用以制造硫酸和硫酸铵。无色透明的石膏可作光学材料。是制造水泥、半水硫酸钙及硫酸的原料。油漆和造纸工业中用作填充剂。农业上用作化肥，能降低土壤碱度、改善土壤性能。还用作番茄、土豆罐头中的组织强化剂、酿造用水的硬化剂、酒的风味增强剂等。建材、水泥生产用可制作各种模型，医疗上用作石膏绷带。此外，还可用于调节水泥的凝结时间，作油漆用的白色颜料、纸张的填料和抛光粉，也是一种常用的干燥剂。也用于冶金和农业等方面。也有用作面包改良剂。

硫酸钙的注意事项：

在使用碳酸钙制取二氧化碳的实验中，不能用稀硫酸代替稀盐酸是因为反应会生成微溶的硫酸钙，没有溶解的硫酸钙包裹在石灰石表面，使反应停止。

脱落酸的作用及注意事项

脱落酸是植物五大天然生长调节剂之一，生物学种常用作植物组织培养。脱落酸在衰老的叶片组织、成熟的果实、种子及茎、根部等许多部位形成。水分亏缺可以促进脱落酸的形成。

脱落酸的作用：

1.一直与促进生长，外施脱落酸浓度大时抑制茎、下胚轴、根、胚芽鞘或叶片的生长.浓度低时却促进离体黄瓜子叶生根与下胚轴伸长，加速浮萍的繁殖,刺激单性结实种子发育。

2.维持芽与种子休眠，休眠与体内赤霉素与脱落酸的平衡有关。

3.促进果实与叶的脱落。

4.促进气孔关闭。脱落酸可使气孔快速关闭,对植物又无毒害，是一种很好的抗蒸腾剂。检验脱落酸浓度的一种生物试法即是将离体叶片表皮漂浮于各种浓度脱落酸溶液表面，在一定范围内，其气孔开闭程度与脱落酸浓度呈反比。

5.影响开花，在长日照条件下,脱落酸可使草莓和黑莓顶芽休眠,促进开花。

6.影响性分化，赤霉素能使大麻的雌株形成雄花,此效应可被脱落酸逆转，但脱落酸不能使雄株形成雌花。

脱落酸的注意事项：

1.脱落酸有顺式和反式两种构型，以及右旋（+）和左旋（-）两种旋光体。天然存在的脱落酸是右旋的。化学合成的脱落酸是左旋和右旋混合体（±）。两种异构体都有生物活性，但研究发现左旋不能促进气孔关闭。另外较低浓度下（1-10µM），（+）-脱落酸活性明显高于（-）-脱落酸。

2.用于细胞实验，溶解后，需用一次性针头滤器过滤除菌。

3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。