Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System酶试剂盒Takara Clontech

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Takara IVTpro mRNA Synthesis System
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Takara 6141 Takara IVTpro mRNA Synthesis System 1 Kit ¥4,973 Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System
Takara 6143 Cloning Kit for mRNA Template 10 Rxns ¥1,531 Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System
Takara 6144 Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit 20 Rxns ¥3,442
¥2,926
Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System

*红字为促销价格,促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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一款合成高质量、高产量mRNA的体外转录(IVT)试剂盒
·通过体外转录(IVT)合成带有Cap结构和Poly(A)序列的mRNA;
·优化的T7 RNA聚合酶用于IVT反应,RNA合成效率高、产量大;
·独立包装的NTPs,方便修饰NTPs替换,且不影响mRNA产量;
·采用In-Fusion无缝克隆,轻松构建模板质粒DNA;
·使用氯化锂(LiCl)溶液进行RNA纯化,可立即进行下游应用。
 
■ 制品说明
Takara IVTpro mRNA Synthesis System是能够简便、高效合成带有Cap结构和Poly(A)序列的mRNA的体外转录试剂盒。它包含以下两种制品:
① Cloning Kit for mRNA Template(Code No. 6143):
本试剂盒用于将模板DNA无缝克隆到预线性化载体(包含在本试剂盒中)中构建用于体外转录反应的模板质粒。预线性化载体中包含T7 启动子、转录起始序列 (AGG)、5′-UTR(非编码区)、3′-UTR、和105-base Poly(A) 序列。试剂盒还包含用于将目标DNA无缝克隆到预线性化载体的In-Fusion Snap Assembly Master Mix和FLuc对照片段(包括15 bp,3′ In-Fusion sequence;FLuc CDS;和15 bp,5′ In-Fusion sequence)。
 
② Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit(Code No. 6144):
本试剂盒以含有 T7 启动子序列的双链 DNA 为模板,使用优化的高效T7 RNA聚合酶,通过体外转录可合成大量mRNA。除此以外,还包含用于IVT反应后消化模板DNA的DNase I和用于纯化mRNA的氯化锂 (LiCl) 溶液。真核细胞翻译蛋白质需要RNA的5’端有Cap结构,本试剂盒配合使用CleanCap Reagent AG(TriLink公司的Cap类似物)可以高效制备具有Cap结构的mRNA。另外,试剂盒包含单独的NTPs,方便优化或使用修饰NTPs如假尿苷替换,而且不会明显降低mRNA的产量。使用本产品,每次反应(20 μl 反应体系)可以合成高达 200μg 或更多的RNA。可以根据需要放大反应体系,即使使用10倍(200μl)反应体系也不影响mRNA预期产量(请参考说明书实验例)。※Cap类似物不包含在本产品中,请另外准备CleanCap Reagent AG (TriLink公司)。
 
Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System
 
使用Takara IVTpro 系统合成 mRNA时,通过In-Fusion方法克隆目标基因(GOI)后,使用不会在 Poly (A) 下游留下额外序列的限制性内切酶切割是非常重要的。强烈建议使用 Hind III(Code No. 1060A/B)对用于mRNA合成的质粒进行线性化(请参考说明书和载体图谱信息)。
 
■ 用途
· 用于体外转录(IVT)模板质粒DNA的构建
· 配合使用TriLink公司的CleanCap Reagent AG体外转录合成mRNA
· 使用其它Cap类似物如Anti-Reverse Cap Analog (ARCA)合成带帽结构的mRNA
(* 请注意,使用ARCA时,需要设计与本产品不同的模板序列。)
· 用于长链非编码RNA(Long non-coding RNA)的合成
· 向导RNA(guide RNA)的合成
· siRNA前体的合成
· 用于RT-qPCR的RNA标准模板的合成
· RNA探针的合成
 
■ 制品内容
Cloning Kit for mRNA Template(Code No. 6143)(10次反应)
 
产品组分 体积量 件数/Kit
1. Linearized Template Vector (50 ng/μl)  10 μl 1
2. FLuc Control Fragment (100 ng/μl) *1  10 μl 1
3. 5X In-Fusion Snap Assembly Master Mix  20 μl 1
 
*1:由 In-Fusion 序列 (15 bp) + FLuc-CDS + In-Fusion 序列 (15 bp) 组成的对照片段 (1,683 bp)
 
Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit(Code No. 6144)(20次量、20 μl反应体系)
 
产品组分 体积量 件数/Kit
1. 10X Transcription Buffer  40 μl 1
2. 10X ATP  40 μl 1
3. 10X CTP  40 μl 1
4. 10X GTP  40 μl 1
5. 10X UTP  40 μl 1
6. 10X Enzyme Mix  40 μl 1
7. Nuclease-Free Water  1 ml 3
8. DNase I  80 μl 1
9. Lithium Chloride Precipitation Solution  600 μl 1
10. Positive Control Template (FLuc) (0.5 μg/μl)2  10 μl 1
 
*2:由T7 启动子 + 5’UTR + FLuc-CDS + 3’UTR + Poly (A) 序列组成的线性质粒DNA。
 
■ 实验操作注意事项
· 本制品是通过IVT反应合成RNA的试剂。如果双链DNA模板、试剂、试管、微量移液器吸头或反应中使用的其他材料混入RNase污染,会导致使用本试剂盒获得的RNA收量降低或片段化。在反应中使用专用试管和微量移液器吸头,并戴上新的一次性手套以防止RNase污染。
· 10X Enzyme Mix 不要剧烈搅拌。
· 使用前将Lithium Chloride Precipitation Solution在室温下融化。融解后,如果充分混合后仍可见沉淀,可37℃保温溶解。如果仍有沉淀物,请直接使用,对性能没有影响。
 
■ 保存
-20℃
 
■ 试剂盒以外的其它必要试剂(主要试剂)
· CleanCap Reagent AG(TriLink公司)
· 修饰NTPs
· 限制酶(Hind III等等)
 
■ 序列信息 FLuc Control Fragment
序列信息(fasta格式):点此进行下载
该序列与Positive Control Template(FLuc)中2,685~4,367(1,683 bp)的序列相同。
 
■ 序列信息 Linearized Template Vector
序列信息(fasta格式):点此进行下载
Linearized Template Vector(2,921 bp)
 
Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System
 
NeoR/KanR: 53~847
Ori: 1,172~1,760
CMV enhancer: 1,861~2,240
CMV promoter: 2,241~2,444
 
T7 promoter sequence: 2,489~2,505
Transcription start sequence (AGG): 2,506~2,508
5’UTR: 2,509~2,559
Upstream In-Fusion region (15 bp): 2,545~2,559
 
In-Fusion cloning site (linearized site): between 2,559 and 2,560
 
Downstream In-Fusion region (15 bp): 2,560~2,574
3’UTR: 2,560~2,672
Poly(A)105: 2,673~2,777
Restriction enzyme sites for plasmid linearization: 2,776~2,801(Hind III, Xho I, Sal I, Avr II, BamH I)
 
Poly(A) Forward Primer: 2,570~2,589
Poly(A) Reverse Primer: 2,863~2,882
 
<T7启动子后序列的详细信息>
Takara IVTpro&trade; mRNA Synthesis System
 
■ 载体信息 Positive Control Template(FLuc)
序列信息(fasta格式):点此进行下载
 
Positive Control Template(FLuc)(4,574 bp)
Takara IVTpro&trade; mRNA Synthesis System
 
NeoR/KanR: 193~987
Ori: 1,312~1,900
CMV enhancer: 2,001~2,380
CMV promoter: 2,381~2,584
 
T7 promoter sequence: 2,629~2,645
Transcription Start Sequence (AGG): 2,646~2,648
5’UTR: 2,649~2,699
FLuc CDS: 2,700~4,352
3’UTR: 4,353~4,465
Poly(A)105: 4,466~4,570 (FLuc Control Fragment-derived sequence: 2,685~4,367)
 
Linearized site by Hind III (5′ overhangs) : 4,569 (4,573)
Takara IVTpro&trade; mRNA Synthesis System
 
<T7启动子后序列的详细信息>
Takara IVTpro&trade; mRNA Synthesis System
 
 

mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase酶试剂盒Takara Clontech

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mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 2470A mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase 2,500 U ¥684 mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase
Takara 2470B(A×4) mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase 10,000 U ¥2,601 mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase
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■ 制品内容(Code No. 2470A)mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase
mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase (50 U/μl) 2,500 U  
10× Capping Buffer 100 μl  
S-adenosylmethionine (SAM) (32 mM) 100 μl  
 
■ 制品说明
mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase是一种来源于牛痘病毒的甲基化酶,该酶特异性地甲基化5’端具有7-甲基鸟苷酸结构的Cap-0 RNA第一个核苷酸的2’-O,从而产生Cap 1 RNA。
已知Cap-1 RNA有助于抑制体内先天免疫应答并促进翻译。该产品还包括反应缓冲液和作为甲基供体的S-adenosylmethionine (SAM),可以把Cap 0 高效的转化成Cap 1 RNA。此外,和Vaccinia Capping Enzyme (Code No. 2460A/B)一起使用,可以经一步反应把未加帽的RNA(5’-三磷酸RNA)加帽生成Cap 1 RNA。
 
■ 用途
Cap 1 mRNA的制备
 
■ 保存
-20℃
 
■ 来源
Escherichia coli carrying a plasmid containing the gene for vaccinia virus mRNA cap 2’-O-methyltransferase
 
■ 性质
分子量:约40 kDa
 
■ 活性定义
37℃条件下,1小时内甲基化10 pmol Cap 0 RNA所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
 
■ 使用注意
1. 混匀时,不要剧烈振荡。
2. 如果试剂、试管或微量移液器吸头被RNase污染,就会导致RNA产量减少或降解。在实验过程中应采取预防措施以避免RNase污染,如戴一次性手套以及使用专用于RNA实验的试管及微量移液器吸头。
 
 

NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块 货 号 #E7490L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 用于二代测序的 NEBNext® 试剂 – 适用于所有测序平台/模块和酶

NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块                              收藏

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概述

NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块可以从分离的总 RNA 中提取完整的 poly(A)+ RNA。这个技术的原理是将 Oligod(T)25 与 1 μm 顺磁性磁珠偶联后,以此为固相支持物直接结合 poly(A)+ RNA。利用此方法可以进行多个样本的分离,也适用于自动化高通量分离。此外,磁性分离技术可得到较小体积的完整 RNA 洗脱液,不需要再从洗脱液中沉淀 poly(A)+ RNA。因此在 1 小时内就能分离得到体现原始样品中 mRNA分布特性的完整 poly(A)+ RNA。 

mRNA 磁性分离模块包括

– NEBNext Oligo d(T)25 磁珠

– NEBNext RNA 结合缓冲液(2X)

– NEBNext 洗脱缓冲液

– 无核酸酶污染的水
– NEBNext Tris 缓冲液 

NEBNext RNA 文库制备试剂——订购信息

NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块            货   号                  #E7490L

NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块            货   号                  #E7490L

HiScribe™ T7 ARCA mRNA 试剂盒(加尾) 货 号 #E2060S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

HiScribe™ T7 ARCA mRNA 试剂盒(加尾)                              收藏

HiScribe™ T7 ARCA mRNA 试剂盒(加尾)             货   号                  #E2060S

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相关产品

DNase I(无 RNase)
RNA 上样染料(2X)

特性

 合成带帽和尾的 mRNA
 掺入经修饰的核苷酸
 用 E. coli Poly(A) 聚合酶合成 Poly(A)尾
 包括模板去除和 mRNA 纯化试剂 

概述

大多数真核 mRNA 的高效翻译需要在 5´ 末端有一个 7-甲基鸟苷帽结构, 3´ 末端有一个 Poly(A)尾。用 DNA模板编码的 Poly(A)尾, HiScribe T7 ARCA mRNA 试剂盒(加尾)可以快速体外合成带帽带尾的 mRNA。使用 T7 RNA 聚合酶通过共转录,将抗- 反向帽类似物(ARCA, NEB #S1411)加到 mRNA 上。利用 ARCA/NTP 混合液、 T7 RNA 聚合酶混合 液和适当的 DNA 模板,很容易建立转录反应。试剂盒也可以将 5mCTP、 Pseudo-UTP 和其它修饰的 核苷酸掺入 mRNA。经 DNase I 短暂温育可以去除模板 DNA, Poly(A)聚合酶为加帽的 mRNA 加 Poly(A)尾。试剂盒合成的 mRNA 可以用于细胞转染、显微注射、体外翻译和 RNA 疫苗。

HiScribe T7 ARCA mRNA 试剂盒(带尾)组成

– T7 RNA 聚合酶混合液
– ARCA/NTP 混合液
– DNase I(无 RNase)
E. coli Poly(A) 聚合酶
– Poly(A) 聚合酶反应缓冲液
– LiCl 溶液
– CLuc 对照模板 

优势

• 快速建立反应体系和简单的操作流程
• 可以引入 5mCTP、Pseudo-UTP 和其它经修饰的 CTP 和 UTP
• 高质量的各种组分确保 mRNA 的完整性 

HiScribe™ T7 ARCA mRNA 试剂盒 货 号 #E2065S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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HiScribe™ T7 ARCA mRNA 试剂盒                              收藏

HiScribe™ T7 ARCA mRNA 试剂盒             货   号                  #E2065S

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相关产品

DNase I(无 RNase)
RNA 上样染料(2X)

特性

 以编码 Poly(A)尾的 DNA 为模板, 合成带帽的 mRNA
 掺入修饰的核苷酸
 包括模板去除和 mRNA 纯化试剂 

概述

大多数真核 mRNA 的高效翻译需要在 5´ 末端有一个 7-甲基鸟苷帽结构,3´ 末端有一个 Poly(A) 尾。HiScribe T7 ARCA mRNA 试剂盒可以用来合成带帽的 mRNA。使用 T7 RNA 聚合酶通过共转录,将抗-反向帽类似物(ARCA,NEB #S1411)加到 mRNA 上。利用 ARCA/NTP 混合液、T7 RNA 聚合酶混合液和适当的 DNA 模板,很容易建立转录反应。试剂盒也可以用于将 5mCTP、Pseudo-UTP 和其它修饰的核苷酸引入 mRNA。试剂盒合成的 mRNA 可以用于转染、体外翻译和 RNA 疫苗。试剂盒包含 DNA 模板去除和 mRNA 快速纯化的 DNase I 和 LiCl。

HiScribe T7 ARCA mRNA 试剂盒组成

– T7 RNA 聚合酶混合液
– ARCA/NTP 混合液
– DNase I(无 RNase)
– LiCl 溶液
– CLuc 对照模板 

优势

• 快速建立反应体系和简单的操作流程
• 可以引入 5mCTP、Pseudo-UTP 和其它修饰的 CTP 和 UTP
• 高质量的各种组分确保 mRNA 的完整性 

NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块 货 号 #E7490L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – RNA 试剂 – 二代测序 RNA 文库制备试剂

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#E7490L
96 次反应
3,049.00

#E7490S
24 次反应
849.00

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概述

NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块可以从分离的总 RNA 中提取完整的 poly(A)+ RNA。这个技术的原理是将 Oligod(T)25 与 1 μm 顺磁性磁珠偶联后,以此为固相支持物直接结合 poly(A)+ RNA。利用此方法可以进行多个样本的分离,也适用于自动化高通量分离。此外,磁性分离技术可得到较小体积的完整 RNA 洗脱液,不需要再从洗脱液中沉淀 poly(A)+ RNA。因此在 1 小时内就能分离得到体现原始样品中 mRNA分布特性的完整 poly(A)+ RNA。 

mRNA 磁性分离模块包括

– NEBNext Oligo d(T)25 磁珠
– NEBNext RNA 结合缓冲液(2X)
– NEBNext 洗脱缓冲液
– 无核酸酶污染的水
– NEBNext Tris 缓冲液  

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NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块            货   号                  #E7490L

NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块            货   号                  #E7490L


mRNA 帽结构 2′-O-甲基转移酶 货 号 #M0366S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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mRNA 帽结构 2′-O-甲基转移酶                              收藏

mRNA 帽结构 2'-O-甲基转移酶              货   号                  #M0366S mRNA 帽结构 2'-O-甲基转移酶              货   号                  #M0366S

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#M0366S
2,000 units
669.00

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特性

 提高 RNA 的翻译效率
 改善 mRNA 在显微注射和转染后的表达 

概述

该酶能在 RNA 5´ 末端紧邻帽结构的第一个核苷酸的 2´ -O 上添加甲基基团。利用 S-腺苷甲硫氨酸(SAM)作为甲基供体,使带帽 Cap O 甲基化为 Cap 1。 

来源

纯化自携带牛痘病毒 mRNA 帽结构 2´ –O-甲基转移酶基因的 E. coli 菌株。 

反应条件

1X 加帽缓冲液
[50 mM Tris-HCl,5 mM KCl,1 mM DTT,1 mM MgCl2,(pH 8.0 @ 25℃)],37℃ 温育。 

单位定义

1 单位是指在 37℃ 的条件下,1 小时内将 10 pmol 80 nt 的带帽 RNA 转录子甲基化所需酶量。 

浓度

50,000 units/ml。 

参考文献

有关该产品性能和应用的相关文献请登陆  

mRNA 脱帽酶 货 号 #M0608S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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mRNA 脱帽酶                              收藏

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#M0608S
2,000 U
1,179.00

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特性

 mRNA 脱帽酶可使带有 m7G 帽结构的 mRNA 脱帽,产生 5’单磷酸末端。

  ·有效替代烟草酸焦磷酸酶(TAP

  ·去除 Cap 0 Cap 1 的效率相同

  ·适用于 5RLM-RACE RNA-seq

  ·1 µl 的酶可在 15 min 内将 20 µg mRNA1.7 kb)完成脱帽

产品信息

 mRNA 脱帽酶可以将 mRNA 5’末端的 7-甲基鸟苷帽(m7G)结构去除,产生 5’单磷酸末端并释放 m7GDPmRNA 脱帽酶能够使各种长度的 mRNA 脱帽,对 Cap 0 Cap 1 的去除效率相同。mRNA 脱帽酶也可将 5’三磷酸末端转化为 5’单磷酸,但转化效率相对较低。5’单磷酸化的 RNA 可用于多种下游应用,包括 5RNA 连接酶介导的 RACERNA-seq 5→3’核酸外切酶消化。

mRNA 脱帽酶(MDE)和烟草酸焦磷酸酶(TAP)脱帽活性的比较

mRNA 脱帽酶            货   号                  #M0608S

A)用 mRNA 脱帽酶(MDE)或其它品牌的烟草酸焦磷酸酶(TAP)对 500 nM 5’加帽 RNA25 nt)溶液进行脱帽反应。每种酶使用各自适合的反应缓冲液,且反应体积相同。其它品牌的 TAP 浓度未知,经比较显示 0.3 nM MDE 1 µl TAP 活性相当。脱帽反应后的反应产物使用毛细管电泳分析。需要注意的是,在阴性对照中,所用的合成底物中都存在 10%的三磷酸 RNA。(图 B)测试了在其它条件不变的情况下,引入不同长度、不同种类末端的 RNA,是否会影响 MDE 的活性,在反应中添加 500 ng Jurkat 细胞总 RNA。结果显示:MDE 的脱帽活性不受影响,而 TAP 活性则显着降低,这说明 MDE 的脱帽能力在该测试条件下更稳定。

随酶提供的试剂

 

 

储存温度 (°C)

浓度

mRNA Decapping Enzyme Reaction Buffer

   

 

储存温度

 

-20°C

Oligo d(T)18 mRNA 引物 货 号 #S1316S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – RNA 试剂 – cDNA 合成

Oligo d(T)18 mRNA 引物                              收藏

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#S1316S
5.0 A260 units
1,009.00

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概述

Oligo d(N)n 引物适用于 mRNA 的扩增和测序,能与 mRNA 的 3´ -poly A 尾或带尾的 cDNA 退火。

注意:#S1316 5´ 末端未磷酸化。

参考文献

有关该产品特性和应用的参考文献请联系我们。

标准帽 m7G(5′)ppp(5′)G 货 号 #S1404L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

标准帽 m7G(5′)ppp(5′)G                              收藏

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#S1404L
5 μmol
8,119.00

#S1404S
1 μmol
2,039.00

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概述

体外实验的初始阶段,绝大多数真核生物 mRNA 5´ 端 m7G 帽结构可促进翻译。对于绝大多数
RNA,帽结构都可提高 RNA 的稳定性,降低其对核酸外切酶降解的敏感性,并促进 mRNA 起始复合体的形成。在真核生物无细胞蛋白合成系统的情况下,5´ 端帽结构甚至可使原核 mRNA 的翻译效率与真核 mRNA 一样高。另外,还发现在真核生物靶 RNA 的剪切过程同样需要帽结构。

应用

• 用 T7、SP6 和 T3 RNA 聚合酶共转录加帽
• 为体外剪接分析合成 m7G 加帽的 RNA
• 为转染或显微注射合成 m7G 加帽的 RNA

mRNA Interferase™ -MazF酶试剂盒Takara Clontech

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mRNA Interferase -MazF
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 2415A mRNA Interferase -MazF 1,000 U ¥2,003
¥1,502
mRNA Interferase&trade; -MazF mRNA Interferase&trade; -MazF mRNA Interferase&trade; -MazF

*红字为促销价格,促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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■ 制品内容
mRNA Interferase-MazF(20 U/μl) 1,000 U
5X MazF Buffer 1 ml
   
 
■ 制品说明
MazF是E. coli 毒素-抗毒素系统中的毒素蛋白,特异性切断单链RNA中ACA序列5’末端的核酸内切酶,不能切断双链RNA、双链DNA及单链DNA。本制品mRNA Interferase-MazF是E. coli 来源的MazF和E. coli来源的伴侣蛋白质基因Trigger factor的融合蛋白质。 
 
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■ 5X MazF Buffer组成
  200 mM   Sodium phosphate, pH7.5
  0.05%   Tween 20
 
■ 用途
限定消化ssRNA。 
 
■ 注意事项
1. 本酶特异性切断含ACA序列的ssRNA,但是也会受AC位点两侧序列的影响可能切断AC位点。
2. 本酶不能切断dsRNA。因此,由于RNA二级结构的影响,本酶不能切断所有的ACA位点序列。
3. 在反应液中添加盐,特别是Mg2+等二价阳离子时,本酶的活性会受到抑制。DTT不影响反应液中的酶活性。
4. 本酶切断的片段不能使用RNA Ligase直接进行连接反应,因为片段的两个末端分别是2’, 3’-cyclic phosphate和5’-OH。
 
 

标准帽 m7G(5′)ppp(5′)A 货 号 #S1405L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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#S1405L
5 μmol
8,119.00

#S1405S
1 μmol
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概述

体外实验的初始阶段,绝大多数真核生物 mRNA 5´ 端 m7G 帽结构可促进翻译。对于绝大多数
RNA,帽结构都可提高 RNA 的稳定性,降低其对核酸外切酶降解的敏感性,并促进 mRNA 起始复合体的形成。在真核生物无细胞蛋白合成系统的情况下,5´ 端帽结构甚至可使原核 mRNA 的翻译效率与真核 mRNA 一样高。另外,还发现在真核生物靶 RNA 的剪切过程同样需要帽结构。

应用

• 使用 T7 RNA 聚合酶从 phi2.5 启动子共转录加帽,启动子在转录起始点包含一个 A
• 为体外剪接分析合成 m7G 加帽的 RNA
• 为转染或显微注射合成 m7G 加帽的 RNA

未甲基帽 G(5′)ppp(5′)A 货 号 #S1406L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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概述

体外实验的初始阶段,绝大多数真核生物 mRNA 5´ 端 m7G 帽结构可促进翻译。对于绝大多数
RNA,帽结构都可提高 RNA 的稳定性,降低其对核酸外切酶降解的敏感性,并促进 mRNA 起始复合体的形成。在真核生物无细胞蛋白合成系统的情况下,5´ 端帽结构甚至可使原核 mRNA 的翻译效率与真核 mRNA 一样高。另外,还发现在真核生物靶 RNA 的剪切过程同样需要帽结构。

应用

• 使用 T7 RNA 聚合酶从 phi2.5 启动子共转录加帽,启动子在转录起始点包含一个 A
• 合成未甲基化 G 加帽的 RNA
• 合成 A 加帽的 RNA

未甲基帽 G(5′)ppp(5′)G 货 号 #S1407L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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概述

体外实验的初始阶段,绝大多数真核生物 mRNA 5´ 端 m7G 帽结构可促进翻译。对于绝大多数
RNA,帽结构都可提高 RNA 的稳定性,降低其对核酸外切酶降解的敏感性,并促进 mRNA 起始复合体的形成。在真核生物无细胞蛋白合成系统的情况下,5´ 端帽结构甚至可使原核 mRNA 的翻译效率与真核 mRNA 一样高。另外,还发现在真核生物靶 RNA 的剪切过程同样需要帽结构。

应用

• 用 T7、SP6 和 T3 RNA 聚合酶共转录加帽
• 合成未甲基化 G 加帽的 RNA

Oligo d(T)25 纤维素珠(停产,有替代) 货 号 #S1408S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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Oligo d(T)25 纤维素珠(停产,有替代)                              收藏

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#S1408S
250 mg
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停产通知

产品于 2020 年 3 月 31 日停产。纯化带有 poly A 的mRNA 时,建议替代产品为:Oligo d(T)25 磁珠(NEB#S1419S); NGS 应用时,建议替代产品为:NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块(NEB#E7490)。

概述

该产品是能用于从 Poly A 区域中分离 mRNA 的亲和基质。这种基质包含有与纤维素珠共价交联的 Oligo (dT)25 

支持介质

用分光光度计来测定每克纤维素结合的 poly rA (M.W.>100,000) 的量。 

结合容量

> 400 A260 units/g。 

参考文献

有关该产品特性和应用的参考文献请联系我们。 www.neb-china.com 或  

抗逆转帽(ARCA) 货 号 #S1411L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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#S1411L
5 μmol
8,019.00

#S1411S
1 μmol
2,019.00

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概述

体外实验的初始阶段,绝大多数真核生物 mRNA 5´ 端 m7G 帽结构可促进翻译。对于绝大多数
RNA,帽结构都可提高 RNA 的稳定性,降低其对核酸外切酶降解的敏感性,并促进 mRNA 起始复合体的形成。在真核生物无细胞蛋白合成系统的情况下,5´ 端帽结构甚至可使原核 mRNA 的翻译效率与真核 mRNA 一样高。另外,还发现在真核生物靶 RNA 的剪切过程同样需要帽结构。

应用

• 产生 100% 可翻译的加帽转录产物
• 用 T7 (NEB #M0251)、SP6 (NEB #M0207) 和 T3 RNA 聚合酶共转录加帽
• 为体外剪接分析合成 m7G 加帽的 RNA
• 为转染或显微注射合成 m7G 加帽的 RNA

mRNA 磁性分离试剂盒 货 号 #S1550S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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mRNA 磁性分离试剂盒                              收藏

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#S1550S
25 次分离反应
3,959.00

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可单独出售的组份

Oligo d(T)25 磁珠
#S1419S   25 mg   ¥2,409

相关产品:

6 孔磁性分离架
#S1506S   6 孔 (1.5 ml)   ¥2,259

12 孔磁性分离架
#S1509S   12 孔 (1.5 ml)   ¥3,559

特性

 适用于自动化、高通量分离
 无需有机溶剂
 无需从洗脱液中沉淀 poly(A)+ 转录物
 1 小时内即可获得完整 poly(A)+ RNA
 无基因组 DNA 污染 

概述

NEB 的 mRNA 磁性分离试剂盒可用于从细胞或组织中分离完整的 poly(A)+ RNA,此过程不需要酚和其它有机溶剂。该技术的原理是将 Oligo d(T)25 与 1 μm 顺磁性磁珠耦联后,以此为固相支持物直接结合 poly(A)+ RNA。利用此方法可以进行多个样本的分离,也适用于自动化高通量分离。此外,磁性分离技术可得到较小体积的完整 RNA 洗脱液,不需要再从洗脱液中沉淀 poly(A)+ 转录物。因此在 1 小时内就能分离得到体现原始样品中 mRNA 分布特性的完整 poly(A)+ RNA。Oligo d(T)25 磁珠可再生 3 次,实验者可选择将分离到的 mRNA 洗脱下来或直接以结合于 mRNA 上的 dT DNA 为引物来进行 cDNA 第一链合成。 

mRNA 磁性分离试剂盒            货   号                  #S1550S

分离 poly(A)+ RNA 分离试验显示分离结果一致性好,分离范围宽:将细胞数递减的 HEPG2 细胞( 5 X 105 – 1 X 103),直接在微量滴定板上进行裂解/结合,然后加入磁珠分离 mRNA。使用 ProtoScript M-MuLV 第一链 cDNA 合成试剂盒(NEB #E6300),以 oligo(dT) 为引物将 mRNA 的十分之一反转录成 cDNA,并使用特异引物 qPCR 检测低丰度的管家基因;肽基脯氨酰异构酶。

 

mRNA 磁性分离试剂盒包括

– Oligo d(T)25 磁珠
– 裂解/结合缓冲液
– 洗涤缓冲液 I、 II 、III 和洗脱缓冲液 

参考文献

有关该产品特性和应用的参考文献请登陆 www.neb-china.com 或 www.neb.com。 

性能卓越的单细胞mRNA分析酶试剂盒Takara Clontech

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性能卓越的单细胞mRNA分析
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 634888 SMART-Seq v4 Ultra Low Input RNA Kit for Sequencing 12 Rxns ¥13,966 性能卓越的单细胞mRNA分析 性能卓越的单细胞mRNA分析 性能卓越的单细胞mRNA分析
Clontech 634889 SMART-Seq v4 Ultra Low Input RNA Kit for Sequencing 24 Rxns ¥23,654 性能卓越的单细胞mRNA分析 性能卓越的单细胞mRNA分析 性能卓越的单细胞mRNA分析
Clontech 634890 SMART-Seq v4 Ultra Low Input RNA Kit for Sequencing 48 Rxns ¥37,852 性能卓越的单细胞mRNA分析 性能卓越的单细胞mRNA分析 性能卓越的单细胞mRNA分析
Clontech 634891 SMART-Seq v4 Ultra Low Input RNA Kit for Sequencing 96 Rxns ¥66,839 性能卓越的单细胞mRNA分析 性能卓越的单细胞mRNA分析 性能卓越的单细胞mRNA分析
Clontech 634892 SMART-Seq v4 Ultra Low Input RNA Kit for Sequencing 192 Rxns ¥116,774 性能卓越的单细胞mRNA分析 性能卓越的单细胞mRNA分析 性能卓越的单细胞mRNA分析
Clontech 634893 SMART-Seq v4 Ultra Low Input RNA Kit for Sequencing 480 Rxns ¥232,084 性能卓越的单细胞mRNA分析 性能卓越的单细胞mRNA分析 性能卓越的单细胞mRNA分析
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性能卓越的单细胞mRNA分析 延伸 性能卓越的单细胞mRNA分析 性能卓越的单细胞mRNA分析 性能卓越的单细胞mRNA分析
 
  性能卓越的单细胞mRNA分析
 
 
SMART-Seq v4 Ultra Low Input RNA Kit for Sequencing
· SMART-Seq2 和 LNA 技术完美结合—LNA技术提高了模板转换效率
· 灵敏度高—可以单细胞或10 pg总RNA起始(起始量: 1-1,000 个细胞或10 pg-10 ng 总RNA)
· 高质量测序数据—检测更多基因,保留全长信息,低rRNA比率,高GC-rich转录本代表性
· 适用于多种测序平台—cDNA文库兼容Illumina或Ion Torrent NGS平台
· 操作简便—直接以细胞起始的单管操作流程,有利于保留样品的完整信息
 
SMART-Seq v4 Ultra Low Input RNA Kit for Sequencing 是第4代的SMARTer Ultra Low 试剂,也是Clontech目前灵敏很高的单细胞和微量样品mRNA-seq 试剂。试剂结合了SMART-Seq2和LNA(locked nucleic acid)技术,将SMART (Switching Mechanism at 5’ End of RNA Template)技术推向了新水平,称为“SMARTer-seq® Chemistry”。基于此,本试剂的表现超越了SMART-Seq2技术和前几代的SMARTer 试剂,可以检测更多的转录本。 Clontech不断创新的传统赋予了本试剂不断提升的性能,可以1-1,000个细胞(或低至10 pg-10 ng总RNA)直接起始进行cDNA合成,并获得高重复再现性,均一的转录本覆盖度和出色的GC-rich转录本代表性的测序结果。利用本试剂制备的全长cDNA文库,可以兼容Illumina® 和 Ion Torrent 测序平台。
本试剂的核心技术-SMART技术,是非常强大的全转录组研究技术,包括细胞内剪接点,可变剪接事件研究,并提供全长信息。Oligo(dT)可以从高品质总RNA(RIN >8)或完整细胞中捕获扩增mRNA,LNA技术提升了模板转换效率,使得本试剂可以检测到比以往SMARTer Ultra Low kit更多的基因。
 
性能卓越的单细胞mRNA分析
图1. SMART-Seq v4 模板转换机制
 
性能卓越的单细胞mRNA分析
表1. 1、100、1000个Hela细胞主要mRNA-Seq数据 (Illumina® MiSeq® platform)
 
性能卓越的单细胞mRNA分析
图2. 转录本覆盖度分析
 
 
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操作简便的单细胞mRNA分析酶试剂盒Takara Clontech

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操作简便的单细胞mRNA分析
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 634436 SMART-Seq® HT Kit 480 Rxns ¥118,883 操作简便的单细胞mRNA分析 操作简便的单细胞mRNA分析 操作简便的单细胞mRNA分析
Clontech 634437 SMART-Seq® HT Kit 96 Rxns ¥30,910 操作简便的单细胞mRNA分析 操作简便的单细胞mRNA分析 操作简便的单细胞mRNA分析
Clontech 634438 SMART-Seq® HT Kit 192 Rxns ¥57,064 操作简便的单细胞mRNA分析 操作简便的单细胞mRNA分析 操作简便的单细胞mRNA分析
Clontech 634439 SMART-Seq® HT Lysis Components 96 Rxns ¥1,199 操作简便的单细胞mRNA分析 操作简便的单细胞mRNA分析 操作简便的单细胞mRNA分析
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操作简便的单细胞mRNA分析 延伸     操作简便的单细胞mRNA分析 操作简便的单细胞mRNA分析
操作简便的单细胞mRNA分析 操作简便的单细胞mRNA分析
         
操作简便的单细胞mRNA分析
 
 
SMART-Seq HT Kit & SMART-Seq HT Plus Kit:自动化友好型的单细胞mRNA全长分析
· 自动化友好型 - 兼容自动化工作站,更少的时间分析更多的样本
· 高灵敏度 - 可以从单细胞或10 pg总RNA起始(起始量:1-100个细胞或10 pg-1 ng总RNA)
· 高质量的RNA-Seq数据 - 保留全长基因信息,低rRNA比率,高基因检出数,有效扩增GC-rich转录本
· 单管操作流程 - SMART-Seq HT PLUS Kit包含完整的cDNA合成和文库构建流程,分别在单管中进行,减少样品损失与混淆,降低手动操作误差
· 增强的测序性能 - SMART-Seq HT PLUS Kit整合双端特殊index(UDI),即便多个文库pool后用高通量型illumina测序仪(如Novaseq)分析,也能得到正确结果
· 更高的文库产量 - 更便于使用高通量型illumina测序仪测序(如Novaseq),或保存剩余的文库用于多次测序
 
产品说明
SMART-Seq HT Kit(SS-HT)和SMART-Seq HT Plus Kit(SS-HT PLUS)均兼容自动化移液工作站,采用oligo(dT)引物,支持1-100个细胞或10 pg-1 ng总RNA起始。
SS-HT试剂盒是从第4代的SMARTer Ultra Low试剂(SMART-Seq v4)发展而来的,具有简化的操作流程,将原有的反转录和PCR扩增步骤整合为一步,且不影响性能。细胞分离或RNA提取后,仅通过一步RT-PCR扩增双链cDNA,然后进行纯化完成操作。cDNA合成可在4小时内完成,整个文库构建方案可在2天内完成。而且,SMART-Seq HT试剂盒具有与SMART-Seq v4试剂盒相同的灵敏度和可重复性。核心的SMART技术,是一种对全转录组研究,以及包括细胞内剪接位点,可变剪接研究的非常强大的工具,且可以检测全长基因。 Oligo(dT)可以从高品质总RNA(RIN> 8)或完整细胞中特异性扩增mRNA。 通过采用LNA技术,提升了模板转换的效率与基因检出数等性能。
SS-HT PLUS Kit在包含核心的cDNA合成试剂基础上,同时整合了Takara Bio Group专利性的文库构建技术(U.S. Patents 7,803,550, 8,399,199, 8,728,737, 9,598,727
, 10,196,686, 10,208,337, and 11,072,823及单次使用的双端特殊index(UDI),提供完整的单细胞cDNA合成到文库构建的实验体验。建库试剂中包含片段化酶,以实现对合成cDNA的片段化,接着利用特别的茎环形接头构建高品质illumina文库。在建库阶段,单管两步操作、过程中无需纯化、2 h即可建成文库!
 
SS-HT Kit:流程缩短、性能不变!
操作简便的单细胞mRNA分析
图1 SMART-Seq HT的技术流程
 
操作简便的单细胞mRNA分析
图2 SMART-Seq v4和SMART-Seq HT工作流程的比较
 
SMART-Seq HT(右)是由SMART-Seq v4方法(左)经过改进而来的一个手动操作时间更短的高通量工作流程。使用FACS方法获得单细胞,SMART-Seq HT试剂盒只需3个操作步骤即可制备cDNA,而SMART-Seq v4试剂盒需要6步。SMART-Seq HT工作流程的一个重要步骤是一步RT-PCR,即使用一步RT-PCR缓冲液,进行高效的反转录和PCR扩增cDNA的过程。
 
操作简便的单细胞mRNA分析
图3 使用SMART-seq v4 kit和SMART-Seq HT kit从FACS分选的293T细胞中获得的高重复性的基因表达数据
 
使用SMART-Seq v4试剂盒(SSv4_1-SSv4_12)和SMART-Seq HT试剂盒( HT_1-HT_9)(上图)从21个293T细胞单细胞制备文库,并对每个细胞获得的基因表达性进行评估。层次聚类热图展示了所有细胞之间的Euclidean distances,并显示从0.74到0.97的Pearson相关性。不仅用相同试剂盒制备的细胞之间可以观察到非常高的相关性,而在两种试剂盒之间的相关性也非常高。这些数据表明,SMART-Seq HT的工作流程与SMART-Seq v4相比,在基因表达分析中没有显著的偏差。
 
SS-HT PLUS Kit:不只是一个Kit,更是完整的单细胞RNA-Seq建库体验!
为了使单细胞cDNA合成、文库构建实验“一步”到位,我们全新推出了SS-HT PLUS Kit。
操作简便的单细胞mRNA分析
 
操作简便的单细胞mRNA分析
 
从高灵敏度、高重复性的cDNA合成出发,构建更高品质illumina文库
 
Takara科学家从10 pg小鼠脑total RNA起始,采用SMART-Seq HT Kit完成cDNA合成。随后分别使用SS-HT Plus Kit中的SMART-Seq Library Prep Kit模块与市面上较常用的A公司试剂盒构建文库,并比较性能差异。
 
操作简便的单细胞mRNA分析
(比较数据来源于Takara Bio USA, Inc.)
 
从测试数据中可以看出,SS-HT PLUS Kit所建文库的产量是A公司Kit产量的5倍,而更高的文库产量更适于高通量型Illumina测序仪,如Novaseq。
 
两种方法所建文库随后用Nextseq 500完成测序,并对TPM(Transcripts per million)≥0.1的基因数进行统计。SS-HT PLUS文库能比A公司文库多检出10%的基因,从同样的cDNA起始能“捕获”更全的信息!
 
 
产品详情请点击:操作简便的单细胞mRNA分析
 
更多实验数据:
SS-HT Kit
SS-HT Plus Kit
 
延伸阅读:
单细胞NGS解决方案
 
 

高灵敏度的单细胞全长mRNA分析酶试剂盒Takara Clontech

上海金畔生物科技有限公司代理Takara Clontech酶试剂盒全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

高灵敏度的单细胞全长mRNA分析
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 634470 SMART-Seq Single Cell Kit 12 Rxns ¥13,341 高灵敏度的单细胞全长mRNA分析 高灵敏度的单细胞全长mRNA分析 高灵敏度的单细胞全长mRNA分析
Clontech 634471 SMART-Seq Single Cell Kit 48 Rxns ¥37,759 高灵敏度的单细胞全长mRNA分析 高灵敏度的单细胞全长mRNA分析 高灵敏度的单细胞全长mRNA分析
Clontech 634472 SMART-Seq Single Cell Kit 96 Rxns ¥65,697 高灵敏度的单细胞全长mRNA分析 高灵敏度的单细胞全长mRNA分析 高灵敏度的单细胞全长mRNA分析
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高灵敏度的单细胞全长mRNA分析
SMART-Seq Single Cell Kit
· 简便的工作流程-可以FACS或其他方法分选的单细胞起始
· 灵敏度高、一致性好-非常适用于单细胞(尤其是RNA含量非常低的细胞和细胞核)RNA-Seq的研究,可检测更多基因
· 可靠的全长cDNA制备Kit-优于许多现有的单细胞全长cDNA合成方法,例如SMART-Seq2
· 高度灵活的工作流程-可与自动化设备兼容
 
SMART-Seq Single Cell Kit(SSsc)是一个具有高灵敏度和可再现的cDNA制备试剂盒,适用于单细胞和细胞核的RNA-Seq分析。该试剂盒可以从已知具有低RNA含量的单个细胞(例如,PBMC)直接生成高质量的全长cDNA。该试剂盒基于SMART-Seq技术进行优化改良,具有更高的灵敏度和再现性。远远超过许多现有的单细胞全长cDNA合成方法,例如SMART-Seq2和Takara Bio现有试剂盒(SMART-Seq V4)。
 
高灵敏度的单细胞全长mRNA分析
图1. 与Smart-seq2法的比较
 
以淋巴母细胞系GM12878单细胞为样本制备文库,分别采用SMART-Seq Single Cell Kit(SSsc,18个重复)和Smart-seq2法(Smart-seq2,20个重复)合成cDNA(均进行19个PCR循环扩增),然后制备RNA-Seq文库并进行测序分析(所有样本都均一化至1.75M paired-end reads)。
 
Panel A cDNA的制备方法不同,结果也不同。相比而言,Smart-seq2结果中比对到线粒体基因组的比率较高,而检测到基因鉴别的reads数相对较少。
 
Panel B SMART-Seq Single Cell Kit能检测到比Smart-seq2更多的基因。
 
高灵敏度的单细胞全长mRNA分析
图2. 与SMART-Seq v4的比较
 
Panel A 以淋巴母细胞系GM22601单细胞为样本制备文库,分别采用SMART-Seq Single Cell Kit(SSsc)和SMART-Seq v4(SSv4)合成cDNA(均用19个PCR循环扩增)。所有样本都均一化至1.25M paired-end reads。使用SSsc建库,能获得更高的文库产量。
 
Panel B 从一位健康供体收集到约50个PMBC单细胞,分别采用SSv4 和 SSsc制备cDNA,然后制备RNA-Seq文库并进行测序分析。不论测序深度如何,SMART-Seq Single Cell Kit检测的基因数均是SMART-Seq v4的1.6倍以上。
 
 
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高灵敏度的单细胞全长mRNA分析
   
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