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COATSOME MG-8080LA (DSPG) 品牌：NOF

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COATSOME MG-8080LA (DSPG)

品牌：NOF
CAS No.：108347-80-4
储存条件：-20℃
纯度：–
产品编号

(生产商编号)

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303-17031

 – 1 g –

COATSOME MG-8080LA (DSPG) 品牌：NOF

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TaKaRa LA PCR™ in vitro Cloning Kit酶试剂盒Takara Clontech

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上海金畔生物科技有限公司代理Takara Clontech酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

TaKaRa LA PCR™ in vitro Cloning Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara RR015 TaKaRa LA PCR™ in vitro Cloning Kit 10 Rxns ￥1,109 TaKaRa LA PCR™ in vitro Cloning Kit TaKaRa LA PCR™ in vitro Cloning Kit TaKaRa LA PCR™ in vitro Cloning Kit
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■ 制品内容 (10 次量，50 μl PCR)
Sau3A I Cassette(200 ng/μl) 25 μl
EcoR I Cassette(20 ng/μl) 25 μl
Hind III Cassette(20 ng/μl) 25 μl
Pst I Cassette(20 ng/μl) 25 μl
Sal I Cassette(20 ng/μl) 25 μl
Xba I cassette(20 ng/μl) 25 μl
Cassette Primer C1(10 pmol/μl) 20 μl
Cassette Primer C2(10 pmol/μl) 20 μl
Ligation Solution I* 150 μl
Ligation Solution II* 75 μl
TaKaRa LA Taq(5 U/μl) 10 μl
10×LA PCR Buffer II (Mg2+Plus) 100 μl
dNTP Mixture (各2.5 mM) 160 μl
Control DNA Fragment (100 ng/μl) 25 μl
Control Specific Primer CS-1 (10 pmol/μl) 10 μl
Control Specific Primer CS-2 (10 pmol/μl) 10 μl
   
*：Ligation Solution I和II与DNA Ligation Kit Ver.2.1 (Code No.: 6022) 中的组份相同。
 
 
■ 制品说明
本试剂盒利用PCR法，使用TaKaRa LA Taq、Cassette以及Cassette Primer，可特异性地扩增cDNA或基因组上的未知区域。通过应用LA PCR技术，提高了保真性能，减少了克隆时变异点的导入。使用本试剂盒，不必经过繁杂的文库构建及筛选等，就能简单地得到基因组等上的长链目的DNA。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 原理
本试剂盒原理的具体步聚如下：
1. 用适当的限制酶将待克隆的Target DNA完全分解。
2. 与具有对应的限制酶酶切位点的Cassette进行连接反应。
3. 用Cassette Primer (Primer C1) 和根据已知区域的DNA序列设计的Primer (Primer S1)，进行第1次PCR (1st PCR) 反应。
4. 使用内侧Primer (Primer C2和Primer S2) 进行第2次PCR (2nd PCR) 反应，特异性地扩增目的DNA片段。
TaKaRa LA PCR™ in vitro Cloning Kit
图1. 特异性PCR扩增原理图
具体原理见图1。因为在设计上，Cassette的5’末端没有磷酸基，所以Target DNA的3’末端和Cassette的5’末端的连接部位形成缺口。在第一次PCR反应的第一个循环时，从Primer C1开始的延伸反应在连接部位终止，限制了Primer C1和Primer C1同一引物之间的扩增，从而控制了非特异性PCR扩增。只有从Primer S1开始延伸合成的DNA链，才能成为Primer C1的模板，进行DNA的特异性扩增反应。再用内侧Primer (Primer C2，Primer S2) 进一步进行第二次PCR反应，可以高效特异性地扩增目的DNA。 当蛋白质的氨基酸序列已知时，可以根据已知信息设计Mixed primer代替Primer S1, S2，扩增编码蛋白质的cDNA。
 
■ 注意事项
1. 37℃室温溶解完全后，用枪头搅拌或上下摇晃microtube使试剂混合均匀。避免剧烈振荡。有时当混合10× LA PCR Buffer 和TaKaRa LA Taq时，小心混匀，避免产生气泡或使酶失活。使用前试剂放置在冰上。
2. 反应前用移液器轻微吸打混匀反应液。不要剧烈振荡。
3. 退火及延伸条件：45-68℃范围内以2℃间隔实验确定最适退火温度。在3 step PCR中，延伸速度为72℃ 1 min./kb。退火-延伸在68℃进行 (2 step PCR)*，同样建议1 min./kb。当温度低于68℃时，需更长时间。
*：由于TaKaRa LA Taq在60-68℃范围内显示出很强活性，可进行Shuttle PCR (Two step PCR)。
 
 

TaKaRa RNA LA PCR™ Kit (AMV) Ver.1.1酶试剂盒Takara Clontech

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TaKaRa RNA LA PCR™ Kit (AMV) Ver.1.1
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara RR012A TaKaRa RNA LA PCR™ Kit (AMV) Ver.1.1 100 Rxns ￥2,168 TaKaRa RNA LA PCR™ Kit (AMV) Ver.1.1 TaKaRa RNA LA PCR™ Kit (AMV) Ver.1.1 TaKaRa RNA LA PCR™ Kit (AMV) Ver.1.1
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TaKaRa RNA LA PCR™ Kit (AMV) Ver.1.1 TaKaRa RNA LA PCR™ Kit (AMV) Ver.1.1 TaKaRa RNA LA PCR™ Kit (AMV) Ver.1.1 TaKaRa RNA LA PCR™ Kit (AMV) Ver.1.1
 
 
■ 制品内容 (100 次量*1)
AMV Reverse Transcriptase XL (5 U/μl) (来源于Avian Myeloblastosis Virus) 50 μl
RNase Inhibitor*2 (40 U/μl) 25 μl
Random 9 mers*2 (50 pmol/μl) 50 μl
Oligo dT-Adaptor Primer (2.5 pmol/μl) 50 μl
RNase Free dH2O 1 ml
TaKaRa LA Taq (5 U/μl) 25 μl
M13 Primer M4*2 (20 pmol/μl) 50 μl
10X RNA PCR Buffer 120 μl
    100 mM Tris-HCl (pH8.3)  
    500 mM KCl  
10X LA PCR Buffer II (Mg2+ Free) 500 μl
dNTP Mixture (各10 mM) 150 μl
MgCl2 (25 mM) 1 ml
Control F-1 Primer*2 (20 pmol/μl) (Positive Control RNA下游引物) 25 μl
Control R-1 Primer*2 (20 pmol/μl) (Positive Control RNA上游引物) 25 μl
Positive Control RNA*2 (2 × 105 copies/μl)
(Transcribed poly(A)+ RNA of pSPTet3 plasmid)		 25 μl
 
*1：本试剂盒可用于100次反应 (总反应量：RT 反应10 μl, PCR反应 50 μl)
*2：【各种引物序列】
 
引物名称 各引物序列
Random 9 mers
        5′-NNNNNNNNN-3′
Oligo dT-Adaptor Primer
        包含dT区域及M13 Primer M4序列。
Control F-1 Primer
        5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′
Control R-1 Primer
        5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′
M13 Primer M4
        5′-GTTTTCCCAGTCACGAC-3′
 
*3：【Positive Control RNA】
本试剂盒中的Control RNA是以pSPTet3质粒 (质粒中的SP6启动子下游插入长约1.4 kbp的pBR322来源的DNA片段，其DNA片段上含有抗四环素基因) 为模板由SP6 RNA聚合酶经体外转录而得到的。Control RNA (约1.4 kb) 是带有30个A碱基的具有Poly(A)+ 尾的RNA。当把Control RNA经RT-PCR合成的双链cDNA插入质粒时，该质粒便可获得四环素抗性。Control RNA简图见图1。
 
TaKaRa RNA LA PCR™ Kit (AMV) Ver.1.1
图1. Positive Control RNA：使用各种引物所能扩增的DNA片段
 
 
■ 制品说明
TaKaRa RNA LA PCR Kit (AMV) Ver.1.1使用TaKaRa LA Taq酶，实现反转录后的更长更准确的PCR反应。TaKaRa LA Taq酶是Takara Bio公司研制的LA (long and accurate) PCR*反应的关键组成。
本试剂盒利用LA Technology的优势特点，用AMV (Avian Myeloblastosis Virus) 来源的反转录酶，由RNA反转录至cDNA，然后再在同一反应管中用TaKaRa LA Taq扩增此cDNA，操作简单，使用方便。本试剂盒中的Oligo dT-Adaptor Primer的特别设计，使从Poly (A)+ RNA 3’端合成cDNA的效率更高，从而可以利用3’-RACE法高效扩增RNA的3′端未知区域。
*：U.S.Patent 5,436,149 for LA Technology is owned by TAKARA BIO INC.
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 特点
RNA模板
   适用于所有RNA
扩增片段大小
   ～12 kb
反转录酶
   AMV Reverse Transcriptase (反转录反应温度在42℃～60℃)
DNA Polymerase
   TaKaRa LA Taq
RNase Inhibitor
   试剂盒中含有
合成cDNA第一条链的引物
   Random 9 mers或Oligo dT-Adaptor Primer或特异性下游PCR Primer 可供选择
3′-RACE法
  RT反应时使用Oligo dT-Adaptor Primer
  PCR反应时下游引物使用M13 Primer M4
操 作
   在同一反应管中进行 (反转录酶在进行PCR反应前须进行高温失活)
 
■ 使用注意
1. 当同时需要进行多个反转录反应或PCR反应时，应先配制各种试剂的混合液 (其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture、MgCl2等），然后再分装到每个反应管中。这样，可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
2. 使用Reverse Transcriptase (AMV)、RNase Inhibitor、TaKaRa LA Taq 等试剂时，应轻轻混匀，避免起泡；分取之前要小心地离心收集到反应管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。
3. 酶制品应在实验前才从-20℃中取出，使用后也应立即放回-20℃中保存。
4. 分装试剂时务必使用新的枪头，以防止样品间污染。
5. PCR反应条件
最适的PCR条件因PCR扩增仪的不同而不同，建议在进行样品实验前先试做一下Control实验。
6. 引物选择
用于反转录的引物可视实验具体情况选择Random 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer或特异性下游引物。对于不具有Hairpin构造的短链mRNA，3种引物中的任何一种都可以使用，但一般应按以下方法进行选择。
Random 9 mers
  适用于长的或具有Hairpin构造的RNA。包括rRNA、mRNA、tRNA等在内的所有RNA的反转录反应都可使用本引物。
  用Random 9 mers合成的cDNA进行PCR反应时，使用任何一对特异性引物都能获得良好的扩增。
Oligo dT-AdaptorPrimer
   适用于具有Poly(A)+ Tail的RNA。(注意：原核生物的RNA、真核生物Primer 的rRNA及tRNA以及某些种类的真核生物的mRNA不具有Poly(A)+ Tail)。本Primer设计巧妙，反转录效率高。反转录反应后，可用M13 Primer M4进行3’-RACE实验。
特异性下游PCR Primer
(PCR时的下游引物)
  因其必须与模板序列互补，所以只适用于Target序列已知的情况。
 
 

COATSOME MG-4040LA (DMPG) 品牌：NOF

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COATSOME MG-4040LA (DMPG)

品牌：NOF
CAS No.：108321-03-5
储存条件：-20℃
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产品编号

(生产商编号)

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309-17011

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COATSOME MG-4040LA (DMPG) 品牌：NOF

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* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


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10 × LA Taq Buffer II (Mg2+ plus)酶试剂盒Takara Clontech

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10 × LA Taq Buffer II (Mg2+ plus)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 9153A 10 × LA Taq Buffer II (Mg2+ plus) 1 ml × 10 ￥261 10 × LA Taq Buffer II (Mg2+ plus) 10 × LA Taq Buffer II (Mg2+ plus) 10 × LA Taq Buffer II (Mg2+ plus)
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■ 制品内容
10×LA Taq Buffer II (Mg2+ plus) 1 ml×10
 
■ 制品说明
本产品是在TaKaRa LA Taq® (Code No.: RR002A/B) 所提供的10× LA Taq Buffer II 中加入最适浓度的Mg2+而得到的10×buffer。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 用 途
PCR法扩增DNA。