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同仁化学Ab-10 Rapid HiLyte Fluor 555 Labeling Kit试剂盒货号：LK35 HiLyte Fluor 555快速标记试剂盒（微量| 日本DOJINDO

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Ab-10 Rapid HiLyte Fluor 555 Labeling Kit试剂盒货号：LK35
HiLyte Fluor 555快速标记试剂盒（微量）
Ab-10 Rapid HiLyte Fluor 555 Labeling Kit
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同仁化学Ab-10 Rapid HiLyte Fluor 647 Labeling Kit试剂盒货号：LK36 HiLyte Fluor 647快速标记试剂盒（微量）| 日本DOJINDO

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Ab-10 Rapid HiLyte Fluor 647 Labeling Kit试剂盒货号：LK36
HiLyte Fluor 647快速标记试剂盒（微量）
Ab-10 Rapid HiLyte Fluor 647 Labeling Kit
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HiLyte Fluor 647 Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK15
HiLyte Fluor 647标记试剂盒-氨基
HiLyte Fluor 647 Labeling Kit – NH2
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储存条件：0-5度保存
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特点：

 

● 荧光素标记的产品可以在大约2小时内制备。

● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

● 可以标记50至200μg的蛋白质。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● 荧光素标记的物体可以与所附的存储溶液一起存储。

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HiLyte Fluor 647 Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK15 HiLyte Fluor 647标记试剂盒-氨基

HiLyte Fluor 647 Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK15 HiLyte Fluor 647标记试剂盒-氨基

试剂盒内含
产品概述
原理
荧光特性
操作步骤
产品优势
常见问题Q&A
参考文献

试剂盒内含

HiLyte Fluor 647 Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK15 HiLyte Fluor 647标记试剂盒-氨基

产品概述

NH2-reactive HiLyte FluorTM 647是试剂盒的成分之一，它有一个琥珀酰亚胺基（NHS），能与蛋白质或者其它分子的氨基反应。该试剂盒中包含了标记所需的全部试剂。每一管NH2-reactive HiLyte FluorTM 647最多能够标记200 μg的IgG，每个IgG分子可与4-6个HiLyte FluorTM 647分子共价结合。标记过程十分简单，只需要在特制的过滤膜上将NH2-reactive HiLyte FluorTM 647加入到IgG溶液中，然后在37℃下培养10分钟。过量的HiLyte FluorTM 647能够用过滤管除去。被HiLyte FluorTM 647标记后的IgG的激发和发射波长分别为652 nm和673 nm。

* HiLyte FluorTM为AnaSpec,Inc公司的商标

原理

HiLyte Fluor 647 Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK15 HiLyte Fluor 647标记试剂盒-氨基

荧光特性

HiLyte Fluor 647 Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK15 HiLyte Fluor 647标记试剂盒-氨基

操作步骤

使用注意事项:

1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量要>50,000。

2. 在标记过程中，IgG或者HiLyte FluorTM 647-IgG标记物始终在Filtration tube的滤膜上。

3. 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits（不包含于本试剂盒 中）来纯化。

4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。

5. 如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的标记试剂NH2-reactive HiLyte FluorTM 647放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持标记试剂的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。

标记IgG操作步骤

（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）

（2）8,000-10,000g离心10分钟。b）

（3）将10μl DMSO加入到NH2-reactive HiLyte FluorTM647中并用移液器吹打使其溶解。c）

（4）将100μl Reaction buffer以及8μl NH2-reactive HiLyte FluorTM647溶液加入到过滤管中，吹打使其混合。d）

（5）将过滤管放入培养箱中，37℃培养10分钟。

（6）将100μl WS buffer加入到过滤管中，8,000-10,000g离心10分钟，b）除去滤液。

（7）将200μl WS buffer加入到过滤管中，8,000g离心10分钟，b）重复该步骤一次。

（8）将200μl WS buffer加入到过滤管中吹打10-15次来回收标记产物。e）将该溶液转移到0.5ml试管中，在0-5℃下保存。

HiLyte Fluor 647 Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK15 HiLyte Fluor 647标记试剂盒-氨基

a）样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于1mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100μg。如果聚积过程中滤液的体积超过400μl，则在进行后续的离心操作前应除去滤液。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c）NH2-reactive HiLyte FluorTM647在管子的底部，向管底加入10μl DMSO，吹打数次使其溶解。

d）如果IgG的量为200μg，加入所有的NH2-reactive HiLyte FluorTM647溶液。

e）并不一定要使用WS buffer来回收标记产物，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来替代。

产品优势

1）荧光素标记的产品可以在大约2小时内制备。

2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

3）可以标记50至200μg的蛋白质。

4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

5）荧光素标记的物体可以与所附的存储溶液一起存储。

常见问题Q&A

Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？
A:可以。只要标记分子的分子量>50,000。
Q2:标记蛋白之前是否必须使用过滤管？
A:如果蛋白溶液中不含有带有活性氨基的小分子且蛋白浓度在10 mg/ml或者70 μM左右时，可以不使用过滤管来过滤，只需要将10 μl 样品溶液和90 μl Reaction Buffer以及8 μl NH2-reactive HiLyte FluorTM 555（由步骤3所得）混合并按照操作说明上的方法做从步骤4开始的后续试验。
Q3:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？
A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。
Q4:用该试剂盒所能标记的IgG的最小量是多少？
A:IgG的最小量为10 μg。IgG的量在10 μg-100 μg之间时，标记比率是相同的。
Q5:标记产物能保存多久？
A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。

参考文献

1) S. Hiroyasu, T. Ozawa, H. Kobayashi, M. Ishii, Y. Aoyama, Y. Kitajima, T. Hashimoto,   J.C.R. Jones and D. Tsuruta, “Bullous pemphigoid IgG induces BP180   internalization via a macropinocytic pathway”, Am. J. Pathol.., 2013,   182, (3), 828.
2) W. Jin, K. Yamada, M.   Ikami, N. Kaji, M. Tokeshi, Y. Atsumi, M.   Mizutani, A. Murai, A. Okamoto, T. Namikawa, Y.   Baba, M. Ohta, “Application of IgY to sandwich enzyme-linked   immunosorbent assays, lateral flow devices, and immunopillar chips for   detecting staphylococcal enterotoxins in milk and dairy   products”, J. Microbiol. Methods., 2013, 92, (3), 323.
3) Y. Hayashi, M. Okutani, S.   Ogawa, T. Tsukahara, R. Inoue, “Generation of anti-porcine CD69   monoclonal antibodies and their usefulness to evaluate early activation of   cellular immunity by flow cytometric analysis”, Anim. Sci. J.., 2018,   89, (5), 825.
4) T. Kojima, J. Hata, H.   Oka, K. Hayashi, K. Hitomi and H. Nakano, “Spatial arrangement of   proteins using scCro-tag: application for an in situ enzymatic microbead   assay.”, Biosci. Biotechnol. Biochem., 2018, 82, (11), 1911.
5) S. Mawaribuchi, Y.   Haramoto, H. Tateno, Y. Onuma, Y. Aiki and Y. Ito, “rBC2LCN lectin as a   potential probe of early-stage HER2-positive breast carcinoma.”, FEBS   Open Bio., 2020, DOI: 10.1002/2211-5463.12852.

同仁化学HiLyte Fluor 555 Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK14 HiLyte Fluor 555标记试剂盒-氨基| 日本DOJINDO

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HiLyte Fluor 555 Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK14
HiLyte Fluor 555标记试剂盒-氨基
HiLyte Fluor 555 Labeling Kit – NH2
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温

特点：

● 荧光素标记的产品可以在大约2小时内制备。

● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

● 可以标记50至200μg的蛋白质。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● 荧光素标记的物体可以与所附的存储溶液一起存储。

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现货

 
蛋白抗体标记检测方案

HiLyte Fluor 555 Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK14 HiLyte Fluor 555标记试剂盒-氨基

HiLyte Fluor 555 Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK14 HiLyte Fluor 555标记试剂盒-氨基

试剂盒内含
产品概述
原理
荧光特性
操作步骤
产品优势
常见问题Q&A
参考文献

试剂盒内含

HiLyte Fluor 555 Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK14 HiLyte Fluor 555标记试剂盒-氨基

产品概述

该试剂盒主要用于制备红色荧光标记的蛋白质，如免疫转染中的IgG和示踪用胞内蛋白。用NH2-reactive HiLyte FluorTM 555是试剂盒的成分之一，它有一个琥珀酰亚胺基（NHS），能与蛋白质或者其它分子的氨基反应。该试剂盒中包含了标记所需的全部试剂。每一管NH2-reactive HiLyte FluorTM 555最多能够标记200μg的IgG，每个IgG分子与4-6个HiLyte FluorTM 555分子共价结合。标记过程十分简单，只需要在特制的过滤膜上将NH2-reactive HiLyte FluorTM 555加入到IgG溶液中，然后在37℃下培养10分钟。过量的HiLyte FluorTM 555能够用过滤管除去。被HiLyte FluorTM 555标记后的IgG的激发和发射波长分别为555nm和570nm。

* HiLyte FluorTM 为AnaSpec,Inc公司的商标

原理

HiLyte Fluor 555 Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK14 HiLyte Fluor 555标记试剂盒-氨基

荧光特性

HiLyte Fluor 555 Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK14 HiLyte Fluor 555标记试剂盒-氨基

操作步骤

使用注意事项:

1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量要>50,000。

2. 在标记过程中，IgG或者HiLyte FluorTM 555-IgG标记物始终在Filtration tube的滤膜上。。

3. 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits（不包含于本试剂盒 中）来纯化。

4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。

5. 如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的标记试剂NH2-reactive HiLyte FluorTM 555放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持标记试剂的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。

标记IgG操作步骤：

（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）

（2）8,000-10,000g离心10分钟。 b）

（3）将10μl DMSO加入到NH2-reactive HiLyte FluorTM 555中并用移液器吹打使其溶解。c）

（4）将100μl Reaction buffer以及8μl NH2-reactive HiLyte FluorTM 555溶液加入到过滤管中，吹打使其混合。d）

（5）将过滤管放入培养箱中，37℃培养10分钟。

（6）将100μl WS buffer加入到过滤管中，8,000-10,000g离心10分钟，b）除去滤液。

（7）将200μl WS buffer加入到过滤管中，8,000g离心10分钟，b）重复该步骤一次。

（8）将200μl WS buffer加入到过滤管中吹打10-15次来回收标记产物。e）将该溶液转移到0.5ml试管中，在0-5℃下保存。

HiLyte Fluor 555 Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK14 HiLyte Fluor 555标记试剂盒-氨基

a）样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于1mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100μg。如果聚积过程中滤液的体积超过400μl，则在进行后续的离心操作前应除去滤液。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c）NH2-reactive HiLyte FluorTM 555在管子的底部，向管底加入10μl DMSO，吹打数次使其溶解。

d）如果IgG的量为200μg，加入所有的NH2-reactive HiLyte FluorTM 555溶液。

e）并不一定要使用WS buffer来回收标记产物，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来替代。

产品优势

1）荧光素标记的产品可以在大约2小时内制备。

2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

3）可以标记50至200μg的蛋白质。

4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

5）荧光素标记的物体可以与所附的存储溶液一起存储。

常见问题Q&A

Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？
A:可以。只要标记分子的分子量>50,000。
Q2:标记蛋白之前是否必须使用过滤管？
A:如果蛋白溶液中不含有带有活性氨基的小分子且蛋白浓度在10 mg/ml或者70 μM左右时，可以不使用过滤管来过滤，只需要将10 μl 样品溶液和90 μl Reaction Buffer以及8 μl NH2-reactive HiLyte FluorTM 555（由步骤3所得）混合并按照操作说明上的方法做从步骤4开始的后续试验。
Q3:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？
A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。
Q4:用该试剂盒所能标记的IgG的最小量是多少？
A:IgG的最小量为10 μg。IgG的量在10 μg-100 μg之间时，标记比率是相同的。
Q5:标记产物能保存多久？
A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。

参考文献

1)A. Nagao, K. Sato, K.M. Nishida, H.   Siomi, M.C. Siomi, “Gender-specific hierarchy in nuage   localization of PIWI-interacting RNA factors in Drosophila”, Front   Genet.,2011, 2, 55.
2) H. Hoshino, G. Shioi, S.   Aizawa, “AVE protein expression and visceral endoderm cell behavior   during anterior–posterior axis formation in mouse embryos: Asymmetry in OTX2   and DKK1 expression”, Dev. Biol.., 2015, 402, (2), 175.
3) T. Kaneko, T. Minohara, S.   Shima, K. Yoshida, A. Fukuda, N. Iwamori, T. Inai and H. Iida, “A   membrane protein, TMCO5A, has a close relationship with manchette   microtubules in rat spermatids during spermiogenesis”, Mol. Reprod.   Dev.., 2019, 86, (3), 330.
4) Y. Nakashima, T. Mima, M.   Yashiro, T. Sonou, M. Ohya, A. Masumoto, S. Yamanaka, D. Koreeda, K. Tatsuta,   Y. Hanba, M. Moribata, S. Negi, T. Shigematsu, “Expression and   localization of fibroblast growth factor (FGF) 23 and Klotho in the spleen:   its physiological and functional implications”, Growth Factors ., 2016,   34, (5-6), 196.
5) Z. Zhang, K. Kakutani, K.   Maeno, T. Takada, T. Yurube, M. Doita, M. Kurosaka and K. Nishida,   “Expression of silent mating type information regulator 2 homolog 1 and   its role in human intervertebral disc cell homeostasis”, Arthritis Res.   Ther.., 2011, 13, (6), R200.
6) I. Hasan, M. Gerdol, Y.   Fujii and Y. Ozeki, “Functional Characterization of OXYL, A SghC1qDC   LacNAc-specific Lectin from The Crinoid Feather Star Anneissia   Japonica.”, Mar Drugs., 2019, 17, DOI:10.3390/md17020136.
7)Y.   Fujii, M. Gerdol, S.M.A. Kawsar, I. Hasan, F. Spazzali, T. Yoshida, Y. Ogawa,   S. Rajia, K. Kamata, Y. Koide, S. Sugawara, M. Hosono, J.R.H.  Tame, H. Fujita, A. Pallavicini and Y.   Ozeki, “A GM1b/asialo-GM1 oligosaccharide-binding R-type lectin from   purplish bifurcate mussels Mytilisepta virgata and its effect on MAP   kinases.”, FEBS J., 2019, DOI: 10.1111/febs.15154.

CloverDirect, HiLyte Fluor488 (300μl translation) 品牌：Protein Exp

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CloverDirect, HiLyte Fluor488 (300μl translation)

品牌：Protein Exp
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