同仁化学铁死亡| 日本DOJINDO

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铁死亡

2012 年,哥伦比亚大学的 Stockwell 教授等人将一种铁依赖性细胞死亡命名为铁死亡 *, 于 2018 年被细胞死亡命名委员会 (NCCD) 报告为程序性细胞死亡之一。 由铁离子依赖性脂质过氧化物的堆积引起的铁死亡已被证实为不同于作为程序性细胞死亡之一的细胞凋亡的细胞死亡途径, 并且作为癌症治疗的新靶点而受到关注。 它还被证实与各种疾病有关,如神经退行性疾病、中风和肝炎(NASH)。 (*S. J. Dixon, B. R. Stockwell et al., Ferroptosis: an iron-dependent form of nonapoptotic cell death., Cell, 2012, 149(5), 1060.) 关于铁死亡如何检测、铁死亡的检测指标、高分文献信息等可详见下文对应干货链接。
铁死亡

品名 货号 用途
MDA检测试剂盒 M496 检测细胞或组织中的MDA浓度
胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit UP05 胱氨酸摄取能力检测
GPX4 Antibody——GPX4抗体 GPX4 检测 GPX4 总蛋白的内源水平
氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒-GSSG/GSH Quantification Kit II G263 氧化型/还原型谷胱甘肽定量
Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测 L248 细胞脂质过氧化物检测
活性氧检测试剂盒(ROS Assay Kit) R252 活性氧检测
二价铁离子检测探针—FerroOrange F374 细胞内二价铁离子检测
Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒 I291 组织总铁含量及二价铁含量检测
铁离子荧光探针—Mito-FerroGreen M489 线粒体内二价铁离子检测
MitoPeDPP试剂 M466 线粒体内脂质过氧化物检测
Glutamine Assay Kit-WST试剂盒 G268 谷氨酰胺的定量检测
Glutamate Assay Kit-WST试剂盒 G269 谷氨酸的定量检测

通路图

铁死亡

铁死亡铁死亡通路图下载

各类指标

铁死亡检测各项指标方法及对应实验结果,详见:

干货|细胞铁死亡(Ferroptosis)——细胞死亡的新模式

铁死亡

实验例

在铁死亡研究中测量谷氨酰胺/谷氨酸水平

众所周知,通过蛋白处理抑制xCT时,会引起铁依赖性细胞死亡,称为“ Ferroptosis”,使用蛋白处理后的A549细胞测定了谷氨酸的释放量和细胞内谷胱甘肽的含量。 蛋白处理过的A549细胞中的谷氨酸释放减少,并且通过抑制胱氨酸的摄取减少了细胞内谷胱甘肽的量。

铁死亡

铁死亡过程中各指标的波动

铁死亡

1. Mon, E. et al., “Regulation of mitochondrial iron homeostasis by sideroflexin 2”, The Journal of Physiological Sciences, 2019, 69(2), 359–373.DOI: 10.1007/s12576-018-0652-2

2. Takashima, M. et al., “Neuroprotective effects of Brazilian green propolis on oxytosis/ferroptosis in mouse hippocampal HT22 cells”, Food and Chemical Toxicology, 2019, 132, 110669.DOI: 10.1016/j.fct.2019.110669

3. Wang, Y. et al., “PM2.5 induces ferroptosis in human endothelial cells through iron overload and redox imbalance”, Environmental Pollution, 2019, 254(A), 112937.DOI: 10.1016/j.envpol.2019.07.105

4. Yambire, K. et al., “Impaired lysosomal acidification triggers iron deficiency, necrotic cell death and inflammation in vivo”, bioRxiv, 2019,DOI: 10.7554/eLife.51031

5. Kagan, V. et al., “Oxidized Arachidonic/Adrenic Phosphatidylethanolamines Navigate Cells to Ferroptosis”, Nat. Chem. Biol., 2017, 13(1), 81.DOI: 10.1038/nchembio.2238

6. Dar, H. et al., “Pseudomonas aeruginosa utilizes host polyunsaturated phosphatidylethanolamines to trigger theft-ferroptosis in bronchial epithelium”, J Clin Invest. 2018, 128(10), 4639-4653.DOI: 10.1172/JCI99490

7. Totsuka, K. et al., “Oxidative stress induces ferroptotic cell death in retinal pigment epithelial cells”, Experimental Eye Research, 2019, 181, 316-324.DOI: 10.1016/j.exer.2018.08.019

8. Fujiki, K. et al., “Blockade of ALK4/5 signaling suppresses cadmium- and erastin-induced cell death in renal proximal tubular epithelial cells via distinct signaling mechanisms.”, Cell Death Differ. 2019, 26(11), 2371-2385.DOI: 10.1038/s41418-019-0307-8

脂质过氧化物检测

更多脂质过氧化物实验例详见:

如何Get铁死亡-脂质过氧化物实验的正确打开方式?

铁死亡

使用共聚焦显微镜观察L929细胞的细胞内脂质过氧化物的变化。实验的详细信息请参照我们公司的网站。

t-BHP: tert butyl hydroperoxide

<数据提供>

日本北里大学药学部

今井浩孝老师,熊谷刚老师

铁死亡

胞内铁离子检测

铁死亡

<检测条件>

Ex: 561nm  Em: 570-620 nm

比例尺:20 μm

谷氨酸、谷胱甘肽等检测

铁死亡

组织样品中的铁离子检测

Iron Assay Kit三大特点

1.经典比色法,操作简单快捷。

2.二价铁和三价铁均可检测。

3.Excel模板自动计算铁浓度。

铁死亡

加标回收实验验证试剂盒准确性

*加标回收率 是指在没有被测物质的样品基质中加入定量的标准物质,按样品的处理步骤分析,得到的结果与理论值的比值。结果越接近100%,说明检测结果越准确。

相关疾病研究

非酒精性脂肪肝

通过铁死亡抑制肝炎

一项使用 NASH 模型小鼠肝脏的研究证实,在脂肪肝开始时,坏死发生在细胞凋亡之前。 在更详细的实验中,报道了铁死亡与坏死中脂肪性肝炎的触发有关,并且在铁死亡抑制实验中几乎可以完全抑制肝炎的发作。

Minoru Tanaka, et al., “Hepatic ferroptosis plays an important role as the trigger for initiating inflammation in nonalcoholic steatohepatitis”, Cell Death & Disease201910, 449.

神经退行性疾病

溶酶体疾病与铁死亡之间的关联

在使用神经元细胞的实验当中,证实敲低溶酶体蛋白 Prosaposin 之后诱导了铁死亡,并且诱导了脂褐素形成和活性氧的产生,这两个指标也是衰老的特征。

Martin Kampmann, et al., “Genome-wide CRISPRi/a screens in human neurons link lysosomal failure to ferroptosis”, Nature Neuroscience202124, 1020

癌症

通过铁死亡控制癌症免疫

发现免疫疗法激活的 CD8 + T 细胞通过促进脂质过氧化和导致铁死亡来促进抗肿瘤作用。 该过程被发现是通过免疫疗法抑制胱氨酸的摄取和促进肿瘤细胞脂质过氧化的机制。

Weiping Zou, et al, “CD8+ T cells regulate tumour ferroptosis during cancer immunotherapy”, Nature2019569, 270

认识到铁在地球生命活动和疾病中的重要性

与铁死亡密切相关的铁研究综述。 有关铁动力学、过量铁引起的致癌作用和关联病信息。

名古屋大学大学院医学系研究科 病理病態学講座 生体反応病理学・分子病理診断学 教授 豊國 伸哉, Dojin News2017162, 1

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细胞周期

-细胞周期是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,分为间期与分裂期两个阶段。在细胞周期检测中,DNA含量也同样作为重要的分析手段而被广泛应用。通过细胞DNA含量的测定,可计算各细胞周期的百分率,也可通过DNA片段化检测、DNA双染标记等方法检测细胞凋亡。
细胞周期

品名 货号 用途
细胞周期检测试剂盒-PI/RNase Staining C543 细胞周期(PI通道流式检测)
Cell Cycle Assay Solution Blue试剂 C549 细胞周期( Pacific Blue 通道流式检测)
Cell Cycle Assay Solution Deep Red试剂 C548 细胞周期(APC-Cy7通道流式检测)

日本ADVANTEC 3号定量滤纸55mm

日本ADVANTEC 3号定量滤纸

简要描述:

日本ADVANTEC 3号定量滤纸用途:
No.3:过滤速度较快:工业QA/QC定量分析,肥料分析、土壤沉淀物、矿物分析、水泥分析。
ADVANTEC 3定量滤纸 Quantitative Ashless Filter Paper
重量:113g/cm2
厚度:0.23mm
过滤时间:130秒
吸水高度:7.5cm
湿润破裂强度:1.9kPa
保留粒径:5μm

日本ADVANTEC 3号定量滤纸

 

ADVANTEC No.3定量滤纸适用于土壤、水泥、肥料、矿物等的试验。是过滤速度比较快的定量滤纸,被用于生产过程中的质量控制。ADVANTEC定量滤纸以含α-纤维素(纤维素中,聚合度高的纯粹的纤维素)99%以上的纤维素为原料。纤维素纤维经盐酸和氢氟suan清洗,再用超纯水清洗至中性。灰分含量0.01%左右的低水平,可以使用于良好的精确定量分析。pH值耐受性:0~12;热稳定性:zui高120℃;
 
特点
• zui高质量初次使用棉纤维
• 灰分: 0.01%
• 酸洗处理:经盐酸和氢氟suan清洗,再用超纯水清洗至中性。
 
应用
• 重量分析
• 环境监控
 
用途:
No.3:过滤速度较快:工业QA/QC定量分析,肥料分析、土壤沉淀物、矿物分析、水泥分析。
ADVANTEC 3定量滤纸 Quantitative Ashless Filter Paper
重量:113g/cm2 
厚度:0.23mm 
过滤时间:130秒 
吸水高度:7.5cm 
湿润破裂强度:1.9kPa 
保留粒径:5μm 
ADVANTEC 3 滤纸用途:过滤速度较快:工业QA/QC定量分析,肥料分析、土壤沉淀物、矿物分析、水泥分析。
注: 
1.过滤速度:于20℃时,以10cm水银柱压力,过滤100ml之蒸馏水所需的时间。 
2.吸水速度:于20℃时,一垂直条状过滤纸,10分钟内水由下往上吸附移动距离。 
3.破裂强度:10cm润湿的滤纸所能承受之水柱压力值。 

有各种尺寸可供选择:φ55mm、φ70mm、φ90mm、φ110mm、φ125mm、φ150mm、φ185mm、φ240mm、φ285mm、φ300mm、φ330mm、φ360mm、φ400mm、φ500mm、485x560mm。 ADVANTEC 孔径5um3号定量滤纸

ハンディコネクター(日本分光) 1/16HC-3 品牌:Sugiyama


ハンディコネクター(日本分光) 1/16HC-3

品牌:Sugiyama
CAS No.:
储存条件:室温
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

308-22851

1 pcs 咨询


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动,恕不另行通知,确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。

同仁化学自噬| 日本DOJINDO

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自噬

通过自身降解的途径,从而将一些没有用的杂质变废为宝成为营养物质。在饥饿或者化学刺激的情况下,在细胞质中首先会形成隔离膜,待降解的物质逐渐包裹其中,最终形成自噬体。随后溶酶体的外膜会与溶酶体外膜相融合,此时溶酶体中的酸性水解酶发挥作用,开始降解之前自噬体内含物,从而达到自噬目的。动态观察整个自噬流对于反映细胞内的自噬活性举足轻重。
线粒体自噬
细胞自噬

品名 货号 用途
线粒体自噬—Mitophagy Detection Kit MD01 线粒体自噬检测试剂盒
Mtphagy Dye试剂 MT02 线粒体自噬

线粒体自噬试剂盒原理:

记载了本产品的检测原理和实验例的论文请看MD01论文实验例中第四篇:Live Cell Imaging of Mitochondrial Autophagy with a Novel Fluorescent Small Molecule

自噬

细胞自噬流程图:

自噬

自噬试剂原理:

自噬

DAPGreen和DALGreen在头部具有末端氨基功能的化学结构(该结构如磷脂酰乙醇胺)该结构的一部分嵌入在疏水膜环境中。

自噬

自噬隔离膜在形成中被DALGreen和DAPGreen处理的共聚焦显微镜图像 比例尺:20 μm

自噬

当自噬体膜形成时,DAPGreen嵌入膜内。嵌入的DAPGreen是一种pH不敏感探针,在亲脂性条件下,其荧光增强。

自噬

当自噬体的膜形成时,DALGreen同样会嵌入膜内,DALGreen是一种pH敏感探针,在酸性条件下,自噬体与溶酶体结合后荧光增强。

实验例:

1.DALGreen与LC3的高度相关性

自噬

用1 μmol/l的DALGreen染色后,用无氨基酸培养基分别培养HeLa细胞0、2、4、6h。

用20 μm/l抗LC3抗体和抗肌动蛋白抗体检测的LC3 I-和LC3 II的相对表达水平并用免疫印迹分析法验证其相对表达水平。

结果证明DALGreen荧光强度的增加与LC3-I, LC3-lI转化率相关。

2.自噬细胞的荧光成像

自噬

用1 μmol/l DALGreen染色后,并用野生型和ULK 1/ULK2 DKO的MEF细胞分别进行处理(或不处理)

并添加雷帕霉素和氯喹8小时后。在ULK1/ULK2双敲除(DKO)MEF细胞中几乎没有观察到DALGreen荧光信号,

对酵母的同源功能有缺陷Atg1蛋白,即使存在氯喹(COL)。DALGreen荧光信号也正确反映了自噬的发生。

3.对自噬细胞抑制处理后的荧光成像

自噬

在3-Methyladenine(3-MA)存在的情况下,饥饿HeLa细胞的DALGreen荧光值降低。

样品:5小时饥饿的HeLa细胞,DALGreen:1 μmol/l,3-MA:5 mmol/l,比例尺:20 μm

4.DAPGreen和tagRFP-LC3共染

自噬

DAPGreen荧光信号与tagRFP-LC3信号有高度相关性,且DAPGreen和tagRFP-LC3都可以染色活细胞。

样本:tagRFP-LC3表达MEF细胞。DAPGreen: 0.1 μmol/l,比例尺:10 μm

5.DAPGreen和Lamp1-tagRFP共染色

自噬

从溶酶体中可观察到大量DAPGreen荧光信号并看到DAPGreen与Lamp 1-tagRFP

(溶酶体染色探针)存在共定位关系。因为DAPGreen不仅染色自噬体,而且也染色自噬溶酶体。

样本:Lampl-tagRFP表达的MEF细胞  DAPGreen: 0.1 μmol/l,比例尺:10 μm

6.DALGreen和tagRFP-LC3共染

自噬

几乎所有的DALGreen荧光信号都与LC3存在共定位关系。tagRFP-LC3

不仅染色自噬体也染色自溶酶体,而DALGreen的荧光信号表示细胞中有自噬溶酶体的存在

样本: tagRFP-LC3表达MEF细胞  DALGreen:1 μmol/l,比例尺:10 μm

7.DALGreen和Lamp1-tagRFP共染

自噬

几乎所有的DALGreen都与Lamp1-tagRFP共定位。Lamp-tagRFP染色溶酶体,

而DALGreen的荧光信号表示细胞中有自噬溶酶体的存在

样本:Lamp1-tagRFP表达的MEF细胞,DALGreen:1 μmol/l,比例尺:10 μm