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同仁化学细胞凋亡| 日本DOJINDO
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同仁化学 细胞凋亡
-细胞凋亡是指为维持有机体内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。正常情况下任何细胞在形成过程中发生的异常都会通过凋亡消除。例如体内的癌细胞增长为肿瘤的过程会受细胞凋亡的引导而被抑制。然而在抑癌基因p53出现问题时，凋亡就不会诱导发生，从而导致癌细胞的不断增长。细胞凋亡可以通过细胞形态的变化或生物化学的变化来检测。目前常用的指标有caspase活性变化、DNA碎片、磷脂酰丝氨酸的外翻等。
细胞凋亡
| 品名 | 货号 | 用途 |
|---|---|---|
| 细胞凋亡检测试剂盒——Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit | AD10 | FITC、PI通道流式凋亡检测 |
| 细胞凋亡检测试剂盒——Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit | AD11 | APC、PI通道流式凋亡检测 |
| Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric-试剂盒 | C551 | Caspase 3比色法检测 |
流式检测：
荧光显微镜检测：
在线小工具
实验工具|稀释计算器|摩尔浓度计算器
同仁化学MitoBright IM Red for Immunostaining试剂,MT15,Dojindo同仁化学| 日本DOJINDO
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MitoBright IM Red for Immunostaining试剂货号：MT15
免疫荧光用线粒体荧光染料
MitoBright IM Red for Immunostaining
商品信息
储存条件：-20度保存
运输条件：室温
特点：
● 标记稳定性强、特异性高
● 可用于免疫荧光共染色
选择规格：20μl 20μl*3
可在含血清的培养基中染色
更多线粒体检测方案（点击查看）
规格性状
产品概述
实验例：与内质网标记物KDEL的共染色
MitoBright IM Red与其他试剂的不同
与传统试剂的对比
可检测的次数
荧光特性
常见问题Q&A
规格性状
产品概述
线粒体不仅是细胞中产生能量的场所，也是与癌症、衰老、神经退行性疾病（例如，阿尔茨海默症、帕金森症）等密切相关的最重要的细胞器之一。
近年来，随着显微镜技术的发展，有关细胞器的研究正在由原来的“单独研究线粒体的机能””逐渐向“线粒体与其他细胞器之间的相互作用”的方向转移。因此，对于线粒体的更详细的形态观察需求越来越大。
MitoBright IM Red克服了其他染料的靶向标记稳定性差的问题，是一种可以用于免疫荧光共染色线粒体荧光探针。
实验例：与内质网标记物KDEL的共染色
用MitoBrightIM Red标记HeLa细胞的线粒体，经固定化和膜透性处理后再用内质网标记物KDEL的抗体进行免疫共染色。并且在左图的箭头所示范围内进行了荧光强度的检测。从荧光图像可以清晰的观察线粒体与附近的内质网的形态。
<检测条件>
MitoBright IM Red (红) Ex: 561 nm, Em: 560-620 nm
KDEL抗体-Alexa488 (绿) Ex: 488 nm, Em= 490-550 nm
Scale bar: 10 μm
MitoBright IM Red与其他试剂的不同
传统的小分子荧光染料在染色后的固定化操作或透膜剂处理后，往往会失去靶向性。而MitoBright IM Red与其他染料相比，提高了靶向稳定性，可以抑制免疫荧光实验时固定化操作造成的荧光强度减弱等问题。
・荧光强度差的比较
MitoBright IM与(T公司的)传统荧光染料相比，在活细胞线粒体染色后的固定化处理和透膜剂处理后的荧光强度如下图所示。固定化处理和透膜剂处理后，荧光强度都有一定的下降，但是MitoBright IM比传统染料的靶向标记稳定性更高，因此可以观察到更清晰的线粒体染色情况。
<检测条件>
Ex=561 nm; Em= 560-620 nm
・荧光背景的比较
使用线粒体标记物TOM20抗体比较MitoBrightIM和传统试剂的免疫染色后的线粒体定位情况。 用MitoBrightIM和传统试剂对HeLa细胞进行染色，然后用TOM20抗体进行二抗免疫荧光染色。 结果显示， 用MitoBrightIM或现有试剂对HeLa细胞进行染色，然后用TOM20抗体进行二抗染色。 结果显示，传统试剂有扩散到线粒体以外区域的情况，导致背景很高，而MitoBrightIM的背景更低，而且定位与TOM20抗体一致。
<检测条件>
Ex=561 nm; Em= 560-620 n
与传统试剂的对比
可检测的次数
| MitoBright IM Red
规格 |
荧光显微镜 |
| （35 mm dish, working solution 2 ml/dish时) | |
| 20 μl | 10 枚 |
| 20 µl x3 | 30 枚 |
荧光特性
激发波长(λex) ： 548 nm
发射波长(λem) ： 566 nm
常见问题Q&A
| Q: MitoBright IM Red出厂就是是DMSO溶液状态，反复冻融是否会影响染色结果？ |
| 我们做过反复冻融5次的稳定性实验，染色结果正常。如果长时间保存时需要反复冻融，保险起见建议提前分装，分开保存。 |
| Q：先药物刺激再进行MitoBright IM染色时，发现有荧光辉斑产生，请问是否有好的解决办法？ |
| A：请在药物刺激前进行MitoBright IM的染色。 由于本试剂是依靠线粒体膜电位在线粒体处积累的，如果线粒体膜电位大幅降低，会导致试剂无法在线粒体处聚集。
(参考实验) 分别采用“先FCCP刺激后染色” 和“先染色后FCCP刺激” 的方法对HeLa细胞进行实验并观察荧光。 先进行MitoBright IM染色再FCCP刺激的实验组很顺利的观察到了荧光，而相反的实验组没有观察到荧光。
|
同仁化学衰老| 日本DOJINDO
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细胞凋亡、细胞坏死及细胞自噬具有控制细胞生存及死亡的功能，对了解细胞的各种机能非常重要。
SA-β-gal
DNA损伤
核仁
| 品名 | 货号 | 用途 |
|---|---|---|
| 细胞衰老检测试剂盒—Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal | SG03 | 细胞衰老检测 |
| SPiDER-βGal试剂 | SG02 | 组织衰老检测 |
| Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal试剂盒 | SG05 | 细胞衰老检测(荧光酶标仪） |
细胞衰老的特征
近几年发现了细胞衰老及具有致癌因子的衰老相关分泌表型（SASP）。在干细胞等领域均发现有衰老现象，在各领域的衰老研究受到越来越多的重视。
通过不同指标评估衰老细胞
在不同传代数的WI-38细胞中，使用不同的试剂盒分别评估细胞的SA-ß-Gal活性，线粒体膜电位和细胞代谢情况（葡萄糖和乳酸）。在衰老细胞中，SA-ß-Gal活性增强，线粒体膜电位降低。其上清液中葡萄糖和乳酸的消耗量等代谢指标有所增加。
细胞老化导致相关因素的变化
引用论文
① H. Tanaka, S. Takebayashi, A. Sakamoto, N. Saitoh, S. Hino and M. Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Reports, 2017, 18(9), 2148.
② L. Garcia-Prat, M. Martinez-Vicente and P. Munoz-Canoves, “Autophagy: a decisive process for stemness”, Oncotarget, 2016, 7(11), 12286.
③ M. Bitar, S. Abdel-Halim and F. Al-Mulla, “Caveolin-1/PTRF upregulation constitutes a mechanism for mediating p53-induced cellular senescence: implications for evidence-based therapy of delayed wound healing in diabetes”, Am J Physiol Endocrinol Metab., 2013, 305(8), E951.
④ C. Wiley, M. Velarde, P. Lecot, A. Gerencser, E. Verdin, J. Campisi, et. al., “Mitochondrial Dysfunction Induces Senescence with a Distinct Secretory Phenotype”, Cell Metab., 2016, 23(2), 303.
⑤ E. Liao, Y. Hsu, Q. Chuah, Y. Lee, J. Hu, T. Huang, P-M Yang & S-J Chiu, “Radiation induces senescence and a bystander effect through metabolic alterations.”, Cell Death Dis., 2014, 5, e1255.
⑥ K. Nishimura, T. Kumazawa, T. Kuroda, A. Murayama, J. Yanagisawa and K. Kimura, “Perturbation of Ribosome Biogenesis Drives Cells into Senescence through 5S RNP-Mediated p53 Activation”, Cell Rep. 2015, 10(8), 1310.
⑦ M. J. Son, Y. Kwon, T. Son and Y. S. Cho, “Restoration of Mitochondrial NAD+ Levels Delays Stem Cell Senescence and Facilitates Reprogramming of Aged Somatic Cells”, Stem Cells. 2016, 34(12), 2840.
同仁化学线粒体| 日本DOJINDO
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线粒体
线粒体(mitochondrion) 是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包被的细胞器，是细胞中制造能量的结构，是细胞进行有氧呼吸的主要场所，线粒体拥有自身的遗传物质和遗传体系，但其基因组大小有限，是一种半自主细胞器。除了为细胞供能外，线粒体还参与诸如细胞分化、细胞信息传递和细胞凋亡等过程，并拥有调控细胞生长和细胞周期的能力。最近越老越多的研究发现线粒体在细胞中的作用远远不止”细胞能量站”。它们参与了各种细胞功能调控，与很多人类疾病存在着莫大的联系。包括细胞信号传导、代谢、自噬、衰老和肿瘤发生都与线粒体的质量和活性相关
线粒体损伤
线粒体自噬
线粒体氧化应激
线粒体染色
| 品名 | 货号 | 用途 |
|---|---|---|
| 线粒体膜电位检测试剂盒 | MT13 | 线粒体膜电位检测 |
| 线粒体膜电位检测试剂盒—JC-1 MitoMP Detection Kit | MT09 | 线粒体膜电位检测 |
| Cellstain- MitoRed试剂 | R237 | 线粒体ATP检测-红色 |
| Cellstain- Rh123试剂(罗丹明123） | R233 | 线粒体ATP检测-绿色 |
| 品名 | 货号 | 用途 |
|---|---|---|
| Mtphagy Dye试剂 | MT02 | 线粒体自噬 |
| 线粒体自噬—Mitophagy Detection Kit | MD01 | 线粒体自噬检测 |
| 品名 | 货号 | 用途 |
|---|---|---|
| mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection | MT14 | 线粒体超氧化物检测 |
| 铁离子荧光探针—Mito-FerroGreen | M489 | 线粒体内二价铁离子检测 |
| Si-DMA for Mitochondrial Singlet Oxygen Imaging试剂 | MT05 | 线粒体内单线态氧检测 |
| MitoPeDPP试剂 | M466 | 线粒体内脂质过氧化物检测 |
| 品名 | 货号 | 用途 |
|---|---|---|
| MitoBright IM Red for Immunostaining试剂 | MT15 | 免疫荧光用线粒体荧光染料Red |
| MitoBright LT Green试剂 | MT10 | 线粒体长效荧光染色（绿色） |
| MitoBright LT Red试剂 | MT11 | 线粒体长效荧光染色（红色） |
| MitoBright LT Deep Red试剂 | MT12 | 线粒体长效荧光染色（深红色） |
线粒体功能研究
线粒体简要通路图海报下载
同仁化学 线粒体简要通路图.pdf
线粒体相关检测试剂
线粒体自噬检测
| 线粒体自噬 | ||
| 试剂 | Mtphagy Dye | Keima-Red |
| 原理 | 线粒体自噬染料是一种PH敏感的荧光探针，该染料聚集在线粒体中，并由溶酶体的酸性条件而发出荧光 | 这是一种基于PH感应比值的荧光蛋白。该蛋白在溶酶体中具有比较高的荧光比值（如550 nm/440 nm）。 |
| 固定细胞染色 | – | – |
| 活细胞染色 | Yes | Yes |
| 活细胞染色后固定 | – | – |
| 染色时间 | >30 min | – |
| Ex/Em | 530/700 | 440,550/620 |
| 产品货号 | MD01 , MT02 | – |
线粒体膜电位检测
| Membrane potential
线粒体膜电位 |
||
| 试剂 | JC-1 | TMRM, TMRE |
| 原理 | JC-1是一种被广泛使用的小分子线粒体膜电位探针，依赖于线粒体膜电位在线粒体中聚集，染料伴随聚集过程，荧光从绿色 (530 nm) 变为红色 (590 nm)。当线粒体发生去极化，红/绿荧光强度比值降低。 | 该试剂是细胞渗透性荧光染料，由于膜电位在完整的线粒体中积累。探针扩散发生在膜电位降低的受损线粒体中。 |
| 固定细胞染色 | – | – |
| 活细胞染色 | Yes | Yes |
| 活细胞染色后固定 | – | – |
| 染色时间 | 10- 60 min | 30- 60 min |
| Ex/Em | Monomer:514/529 | 550/575 |
| J-aggregation: 585/590 | ||
| 产品货号 | MT09 | – |
线粒体金属离子检测
| Iron ion (Fe2+)
亚铁离子 |
Calcium ion (Ca2+)
钙离子 |
|
| 试剂 | Mito-FerroGreen | Rhod 2-AM |
| 原理 | 该试剂是一种细胞通透性探针，其积累在线粒体中，并与线粒体中的亚铁离子发生特异性反应，发出绿色荧光。 | 该试剂是一种细胞通透性探针，该探针积聚在线粒体中，并与线粒体中的钙离子发生特异性反应，发出红色荧光。 |
| 固定细胞染色 | – | – |
| 活细胞染色 | Yes | Yes |
| 活细胞染色后固定 | – | – |
| 染色时间 | 30 min | 30-60 min |
| Ex/Em | 505/535 | 553/576 |
| 产品货号 | M489 | R002 |
线粒体荧光染色
| Mitochondria staining
线粒体染色 |
||
| 试剂 | MitoBright LT series | MitoTracker series |
| 原理 | 细胞渗透性荧光染料，基于线粒体膜电位而在完整的线粒体中积累。 | 细胞渗透性荧光染料，基于线粒体膜电位而在完整的线粒体中积累。 |
| 固定细胞染色 | – | – |
| 活细胞染色 | Yes | Yes |
| 活细胞染色后固定 | – | – |
| 染色时间 | >10 min | 15 -45 min |
| Ex/Em | 493/508,547/563, 643/663 | 490/516~644/665 |
| 产品货号 | MT10、MT11、MT12 | – |
| Mitochondria staining
线粒体染色 |
|||
| 试剂 | DsRed | MitoRed | Rh123 |
| 原理 | 一种红色荧光蛋白染料，通过转染试剂与完整的线粒体结合。 | 细胞渗透性荧光染料，基于线粒体膜电位而在完整的线粒体中积累。 | 细胞渗透性荧光染料，基于线粒体膜电位而在完整的线粒体中积累。 |
| 固定细胞染色 | – | – | – |
| 活细胞染色 | Yes | Yes | Yes |
| 活细胞染色后固定 | – | – | – |
| 染色时间 | Expression in 8 -12 hrs. | >15 min | >15 min |
| Ex/Em | 558/583 | 560/580 | 507/529 |
| 产品货号 | – | R237 | R233 |
线粒体氧化应激
| Lipophilic peroxide
脂质过氧化物 |
Singlet oxygen
单线态氧 |
Superoxide
超氧化物 |
|
| 试剂 | MitoPeDPP | Si-DMA | MitoSOX |
| 原理 | MitoPeDPP是一种新型荧光染料，由于其具有三苯基膦结构，因此可以穿过细胞膜并在线粒体中聚集。聚集在线粒体内膜上的MitoPeDPP可以被脂质过氧化物氧化而释放出强荧光。 | 该试剂是一种细胞渗透性荧光探针，积聚在线粒体中，与线粒体中产生的单线态氧发生反应，发出红色荧光。 | 该试剂是一种细胞渗透荧光探针，积聚在线粒体中，与线粒体中产生的超氧化物反应，发出红色荧光。 |
| 固定细胞染色 | – | – | – |
| 活细胞染色 | Yes | Yes | Yes |
| 活细胞染色后固定 | – | – | – |
| 染色时间 | > 15 min | > 45 min | > 10 min |
| Ex/Em | 452/ 470 | 644/ 670 | 510/ 590 |
| 产品货号 | M466 | MT05 | – |
引用论文
① H. Tanaka, S. Takebayashi, A. Sakamoto, N. Saitoh, S. Hino and M. Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Reports, 2017, 18(9), 2148.
② L. Garcia-Prat, M. Martinez-Vicente and P. Munoz-Canoves, “Autophagy: a decisive process for stemness”, Oncotarget, 2016, 7(11), 12286.
③ M. Bitar, S. Abdel-Halim and F. Al-Mulla, “Caveolin-1/PTRF upregulation constitutes a mechanism for mediating p53-induced cellular senescence: implications for evidence-based therapy of delayed wound healing in diabetes”, Am J Physiol Endocrinol Metab., 2013, 305(8), E951.
④ C. Wiley, M. Velarde, P. Lecot, A. Gerencser, E. Verdin, J. Campisi, et. al., “Mitochondrial Dysfunction Induces Senescence with a Distinct Secretory Phenotype”, Cell Metab., 2016, 23(2), 303.
⑤ E. Liao, Y. Hsu, Q. Chuah, Y. Lee, J. Hu, T. Huang, P-M Yang & S-J Chiu, “Radiation induces senescence and a bystander effect through metabolic alterations.”, Cell Death Dis., 2014, 5, e1255.
⑥ K. Nishimura, T. Kumazawa, T. Kuroda, A. Murayama, J. Yanagisawa and K. Kimura, “Perturbation of Ribosome Biogenesis Drives Cells into Senescence through 5S RNP-Mediated p53 Activation”, Cell Rep. 2015, 10(8), 1310.
⑦ M. J. Son, Y. Kwon, T. Son and Y. S. Cho, “Restoration of Mitochondrial NAD+ Levels Delays Stem Cell Senescence and Facilitates Reprogramming of Aged Somatic Cells”, Stem Cells. 2016, 34(12), 2840.