简要介绍SUMO蛋白酶的作用以及使用说明
SUMO蛋白酶是自E.coli表达经亲和纯化的重组蛋白酶，是一种具有较高活性的半胱氨酸蛋白酶。它能识别SUMO蛋白的三级结构，而不是氨基酸序列，因此可以高效而且特异性地将SUMO蛋白从重组融合蛋白上切割下来。
SUMO蛋白酶的作用：
SUMO蛋白酶以一种非常特异的方式切割蛋白，它特异性识别UBL蛋白的三级结构－SUMO，而不是氨基酸序列，故该蛋白酶可以切割重组融合蛋白的SUMO。切割的最佳温度为30℃，该酶作用温度和pH范围(pH7-9)都比较广泛。酶切后，可通过亲和纯化很容易地将SUMO去除。SUMO蛋白酶在较宽范围的反应环境体系中能保持较高的活性，如温度（4-30℃），PH (5.5-9.5)等，SUMO蛋白酶带有多聚His标签，便于融合蛋白切割后利用亲和层析去除该蛋白酶。
SUMO蛋白酶的使用方法说明：
1. 10×SUMO Protease Buffer : 500mM Tris-HCl, 10mM DTT, pH 8.0。
2. SUMO蛋白酶与需要酶切的目的蛋白比例：1：100。
3. 酶切体系：
融合蛋白 1000 μg
10×SUMO Protease Buffer 20μL
SUMO 蛋白酶 2μL
ddH2O定容至 1000μL
4. 酶切条件：推荐4℃酶切过夜，用户可以根据自己研究的目的蛋白进行摸索，以下酶切分析图片可供参考。
5. 酶切后可取少量样本进行SDS-PAGE分析，若要去除酶切后体系中的SUMO蛋白酶，可用His标签纯化树脂亲和层析。
SUMO蛋白酶的注意事项：
为达到最好的酶切效果，请保证重组蛋白为部分或完全纯化的蛋白。对于大部分融合蛋白，SUMO蛋白酶最理想的反应液中NaCl的浓度为150 mM。然而，根据实际情况可在100 mM～300mM之间调节NaCl的浓度以达到最佳的效果。请务必考虑到酶中的盐的浓度(终浓度为12.5 mM)和底物中盐的浓度。在进行酶切反应时，请选用合适的10X SUMO Buffer +/- Salt。 咪唑的浓度应低于150 mM，若高于该浓度会影响SUMO蛋白酶的活性。
交联琼脂糖凝胶的使用方法及储存-技术文章
交联琼脂糖凝胶的使用方法及储存
交联琼脂糖凝胶产品简介
交联琼脂糖凝胶是由琼脂糖凝胶与2，3-二溴苯醇在强碱条件下共价交联反应得到的珠状凝胶颗粒，是和琼脂糖凝胶一样是凝胶过滤材料。与琼脂糖凝胶具有相同的孔隙度，具有琼脂糖凝胶一样的分离能力，但是其热稳定性和化学稳定性大大增强。在水相介质中pH3-14中可以使用，在碱性介质中，稳定性特别好。其种类也是和琼脂糖凝胶一样，根据琼脂糖含量分为2B，4B和6B3种。
三种类型的交联琼脂糖凝胶具体参数及应用如下：
交联琼脂糖凝胶的使用方法
使用方法同琼脂糖凝胶，根据不同的分离对象，选择不同的缓冲溶液即可。交联琼脂糖凝胶的工作PH更广，耐碱性更强。
交联琼脂糖凝胶的存贮方法:
应密封于4℃保存。以悬浮液贮存时，能抗生物降解，当有磷酸根存在时，容易长菌，特别当有磷酸根存在时所以可以添加叠氮钠(0.02%)、氯仿、三氯丁醇、丁醇(0.5%)能防止污染。
western blot的作用及注意事项-技术文章
western blot的作用及注意事项
western blot的作用
免疫印迹是一个用于蛋白质分析的常规技术，在电场的作用下将电泳分离的蛋白从凝胶转移至一种固相支持物，然后利用抗原—抗体的特异性反应，从蛋白混合物中检测出目标蛋白，从而确定正常或实验条件下细胞或组织中目标蛋白的表达情况。Western blot还可用于蛋白—蛋白、蛋白—DNA和蛋白—RNA相互作用的后续分析，作为一种廉价、便捷、可靠的研究工具，将与质谱和蛋白质芯片等技术一起在蛋白质组时代发挥重要作用。
Western bloting的注意事项
1、为了让实验更加严谨有说服力都要设计对照实验，对照分为：阳性对照（最好有标准品或者重组蛋白）；阴性对照（即不表达该目的蛋白的蛋白样品，这个一般在数据库寻找或者人为基因敲除所制备的蛋白样品）；空白对照（不加一抗，用PBS代替）；无关对照（用无关抗体）
2、一抗、二抗的浓度一般要参照抗体说明书选择最适当的比例，一抗二抗的选择直接影响实验结果以及背景
3、实验设计时所釆用的抗体批次尽量要一样，尽量的避免抗体批次不同的带来的差异。另外在做样品裂解时更要注意所釆用的操作条件，尽可能的排除可变因素给实验带来不确定性。
4、凝胶的质量直接影响以后的实验结果，要特别注意几点：凝胶要均一没有气泡；浓缩胶与分离胶界面要水平；AP和TEMED的量不能过多，太多会导致胶易脆裂；拔梳子时方向要正向上，保持一定的速度（较快），尽量保证点样孔平整。
5、电泳、转膜时特别要注意正负极，电压电流都不能过高；制作转膜“三明治”时的叠放次序要正确，同时要防止产生气泡；尽量让电转温度保持在10度以下，冰浴为宜。
6、封闭时一般在室温下1-2h，但是要注意如果是生物素标记的二抗就不宜用牛奶，因为牛奶中含有生物素，用BSA效果更好。
7、加一抗二抗要严格保证反应时间，一抗的孵育建议是4度摇晃过夜，更有利于抗原抗体的结合。
8、洗膜要注意尽可能地将未结合的一抗二抗洗净，能较好的降低非特异性结合，有利于降低背景；
9、这配置封闭液，一抗，二抗和洗涤液时，请确认缓冲液的pH值（7.4左右为宜），在碱性和酸性条件下不利于抗原抗体的结合。
动物外周血淋巴细胞分离液的注意事项-技术文章
动物外周血淋巴细胞分离液的注意事项
使用的注意事项：
1.开封前颠倒混匀，本分离液为无菌产品，为延长分离液保存时间，请在无菌条件下启封，避免微生物污染。。
2.分离液使用时应始终保持室温（18℃~25℃），如室内温度较低，可将分离液预热。4℃或者是温度较低的条件下离心，可能会导致白膜层中红细胞污染加重。
3.血液样本最好为新鲜抗凝血（采血2 h以内），为保持淋巴细胞的活性，应避免冷冻和冷藏。
4.稀释血液或洗涤细胞，不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液，其成分会导致血细胞凝集，大大降低细胞得率及纯度。
5.部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其带有的静电作用，可能会导致细胞挂壁影响分离效果。
6.血液样本的粘稠度或者是温度差异，可能会影响分离效果，可以调节离心转数和离心时间，摸索最佳的分离条件。
7.吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加；吸取过多的血浆层可能会导致淋巴细胞中血浆蛋白及血小板污染。
8.如果要进一步对分离的细胞进行培养，那在收集血液和分离过程中，注意无菌操作，避免微生物污染。
9.不同动物血液在不同比重分离液中的细胞离散系数及细胞带电不同，用户在制定分离液时应提供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。
4%多聚甲醛固定液配制-技术文章
4%多聚甲醛固定液配制
4％的多聚甲醛溶液通常是作为流式标本的储存液，保存在2－8℃。要使用时，可用PBS稀释至工作液（应用液）。因为甲醛有毒，所以在配置4％的多聚甲醛固定液时要做好防护措施。下面详细介绍4%多聚甲醛固定液配制步骤和方法。
4%多聚甲醛固定液配制需材料和设备：
去离子水、HCl (稀)、NaOH (1 N)、多聚甲醛粉末、1X PBS（0.137 M NaCl, 0.05 M NaH2PO4, pH 7.4）、0.22μm滤膜、玻璃器皿、手套和保护眼镜、磁力搅拌器、温度计、通风柜
步骤：
要配制1 L的4%多聚甲醛，在通风柜中，将800 mL的1X PBS加入玻璃烧杯，边搅拌边加热至约60℃，注意不能让溶液沸腾。
往热PBS溶液中加入40g多聚甲醛粉末。
多聚甲醛粉末可能不会立即溶解，可通过滴入1N NaOH搅拌逐步提高pH值，直至多聚甲醛粉末完全溶解。
待溶液冷却，过滤溶液，用PBS调节溶液体积至1L。
检查pH值，用稀盐酸调节pH值至6.9左右。
保存：
4％的多聚甲醛溶液可分装成多管冻存，或者保存在2－8℃大约1个月。
上海金畔生物科技有限公司作为专业生化试剂供应商，提供4%多聚甲醛固定液成品出售，免除各位老师和同学们在配置过程中直接接触甲醛，更方便您实验。上海金畔生物科技有限公司技术支持电话：4009686088。