淀粉样物质染色试剂盒(改良Stores刚果红法)

 淀粉样物质染色液(改良Stores刚果红法)，主要用于淀粉样物质染色，从而区别组织器官是否发生病变。淀粉样物质是一种无固定形状的细胞外嗜酸性物质，可存在于不同的组织、器官。淀粉样物质主要是由蛋白质构成，该蛋白大部分排列成反向的β-折叠层结构。

目前研究发现传统的甲紫染色法灵敏度低、特异性差。1922年Bennhold发现了刚果红可以用于活体内淀粉样物质的鉴别，并应用到组织切片。作为经典的而且有效的方法一直延用到现在。

简要介绍荧光染料的应用

荧光染料在吸收紫外线或可见光后，能把短波长的光转变为波长较长的可见光波而反射出来，呈闪亮的鲜艳色彩。泛指吸收某一波长的光波后能发射出另一波长大于吸收光的光波的物质。它们大多是含有苯环或杂环并带有共轭双键的化合物。

工业应用：荧光染料可用作洗衣粉中的增白剂、各种荧光路标漆等荧光染料产品的制备。此外还用于纤维织物印染和某些特殊标志的制作。

科研应用：荧光染料在科研中常用于荧光免疫、荧光探针、细胞染色等。包括特异性的DNA染色，用于染色体分析、细胞周期、细胞凋亡等相关研究。另有很多核酸染料在多色染色系统中是非常有用的复染剂，可作为背景对照，标记细胞核使细胞内结构的空间关系一目了然。

在免疫分析中荧光标记的单克隆抗体技术为流式细胞仪在研究细胞膜和细胞内各种功能性抗原、肿瘤基因蛋白等领域扩展了无限的应用空间。荧光探针可以通过蛋白质交联剂共价结合在单克隆抗体上。

在核酸检测中荧光染料对细胞核染色后定量测量细胞所发出的荧光强度，就可以确定细胞核中DNA、RNA的含量，并可以对细胞周期和细胞的增殖状况进行分析。有多种荧光染料可以对细胞中的DNA或RNA染色，常用的DNA染料包括碘化丙啶(PI)、DAPI、Hoechst 33342等，RNA染料有噻唑橙、吖啶橙等。

常用荧光染料：

（一）免疫荧光标记常用的荧光染料

FITC（异硫氰酸荧光素）：绿色530nm

PE（藻红蛋白）：橙黄色575nm

PerCP（多甲藻黄素叶绿素蛋白）：深红色675nm

PI（碘化丙啶）：橙红色620nm488nm波长的氩离子激光激发

APC（别藻青蛋白）：红色660nm630nm波长的氦氖激光或红色二极管激光激发

Cy3：激发波长488nm，最大发射波长570nm。

1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；

2）FL2通道检测；

3）为小分子染料，非常适合需小分子染料的流式细胞术，荧光强度低于PE。

Cy5：激发波长633/635nm，最大发射波长670nm。

1）其标记的抗体适用于所有配备633nm氩离子激光器的流式细胞仪；

2）FL4通道检测；

3）小分子染料，非常适合需小分子染料的流式细胞术，荧光强度低于APC。

4）与单核和粒细胞非特异性结合多，易出现假阳性结果。

（二）免疫荧光标记

常用的标记染色为直接免疫荧光染色和间接免疫荧光染色。在进行双参数或多参数分析时，常常需要进行荧光抗体的组合标记，目前已经有双色、三色以及四色标记。

（三）细胞自发荧光

自发荧光信号为噪声信号，在多数情况下会干扰对特异荧光信号的分辨和测量。在免疫细胞化学等测量中，对于结合水平不高的荧光抗体来说，如何提高信噪比是个关键。一般说来，细胞成分中能够产生自发荧光的分子（例如核黄素、细胞色素等）的含量越高，自发荧光越强；培养细胞中死细胞／活细胞比例越高，自发荧光越强；细胞样品中所含亮细胞的比例越高，自发荧光越强。

上海金畔生物科技有限公司为生化试剂供应商，专业生产销售生化试剂、生物试剂、细胞培养基、试剂盒、实验耗材等产品。荧光染料为上海金畔生物科技有限公司的常备货产品，产品种类齐全，供您选择。

潮霉素B的作用

潮霉素B(Hygromycin B )是由吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死细菌、真菌和高等真核细胞。潮霉素B通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成。目前常用于筛选和维持培养含潮霉素抗性基因的原核或真核细胞。   

潮霉素B的应用：

1）筛选和维持培养稳定转染Hph+载体的原核细胞或真核细胞（植物细胞和哺乳动物细胞）；

2）由于作用模式的差异，常与G418 （GeneticinTM），Zeocin™ 和blasticidin S联合使用，筛选稳定转染两个不同载体的细胞株

3）抗病毒剂，由于潮霉素B选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞，而且具有抑制翻译的功效；

4）作为驱虫药加入动物饲料；哺乳动物细胞选择的有效浓度通常是50 μg/ml–1 mg/ml之间；对于植物细胞，其有效浓度是20–200 μg/ml；对于细菌，有效浓度是20–200μg/ml；对于真菌，有效浓度是200μg–1 mg/ml。

化学性质：

 潮霉素B是微黄褐色无定形粉末，有特殊气味，熔点160-180℃。为弱碱，易溶于水、甲醇、乙醇，易与许多有机酸和无机酸生成盐。

保存方法：溶液直接存放在2℃～8℃，至少存放1年。

       北京上海金畔生物科技有限公司科技有限公司备有现货产品潮霉素B(Hygromycin B )，货号为H8080，为Germany分装产品，浓度为100mg/ml，效价为1100units/mg，主要用于转染实验中。

       潮霉素B磷酸转移酶能够灭活潮霉素B，因此携带hph基因转染的细胞能稳定或暂时表达该基因，产生潮霉素B抗性。

MTT实验原理是什么？

MTT是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT实验原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值(OD值)，来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强(如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小)。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。
MTT通常用于.细胞增殖及细胞活性测定以及药物(也包括其他处理方式如放射线照射)对体外培养的细胞毒性的测定。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。
注意事项：
1、在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
2、配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感
3、MTT一般最好现用现配，过滤后4度避光保存两周内(个人曾做过4度避光保存4周的MTT溶液，效果仍然不错)有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用。
4、MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.
通常，此法中的MTT浓度为5mg/ml。因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。

HE染色法的优缺点

木精 — 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，简称HE染色法 ，石蜡切片技术里常用的染色法之一 。苏木精染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色 ；伊红为酸性染料 ，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。

去氧核糖核酸（DNA）两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中称蓝色，所以细胞核被染成蓝色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。伊红是细胞浆的良好染料。

由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。经苏木精染色后，细胞核及钙盐粘液等呈蓝色，可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝，如处理适宜，可使细胞核着清楚的深蓝色，胞浆等其它成分脱色。再利用胞浆染料伊红染胞浆，使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。

易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性( basophilia )和嗜酸性( acidophilia )；而对碱性染料和酸性染料亲和力都比较弱的现象称为中性（neutrophilia)。

组织内的蛋白质构成蛋白质的氨基酸的种类很多，它们有不同的等电点。在普通染色法中，染色液的酸碱度为pH6左右，细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内膜质及透明软骨基质等均被碱性染料染色，这些物质称为。而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色，这些物质称为嗜酸型。如果改变染色液的酸碱度，pH值升高时，则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性；pH值降低时，原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。所以说染色液的pH值可以影响染色的反应。

脱氧核糖核酸（DNA）两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。伊红是细胞浆的良好染料。

由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。经苏木精染色后，细胞核及钙盐粘液等呈蓝色，可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝，如处理适宜，可使细胞核着清楚的深蓝色，胞浆等其它成分脱色。再利用胞浆染料伊红染胞浆，使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。

HE染色结果

细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。[1]?

着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。例如，细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。

上海金畔生物科技有限公司是一家集产品研发、生产、销售、服务于一体的高科技生物企业。产品主要涵盖生化试剂、分子生物学试剂、细胞培养、免疫学产品及实验耗材等。HE染色试剂盒为上海金畔生物科技有限公司自产产品，其货号为G1120，在细胞HE染色的组织切片中，细胞核呈蓝色，细胞浆呈红色，二者形成鲜明的对比，易于观察分析。