hepes缓冲液的配制步骤

 HEPES缓冲液是细胞培养实验中经常用到的缓冲液。在开放式的培养条件中，加入HEPES缓冲液，可防止培养基内pH氧化升高，从而将PH维持在7.0左右。那么，HEPES缓冲液的配制步骤和方法是怎样的，下面就给大家详细介绍。

HEPES分子量为238.31，化学名：4-羟乙基哌嗪乙磺酸，分子式: C8H18N2O4S。

HEPES常用于生物缓冲剂，pH值缓冲范围：6.8-8.2，用在生化诊断试剂盒、DNA/rna提取试剂盒及PCR诊断试剂盒里。对细胞无毒性作用。它是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的pH范围。使用终浓度为10-50mmol/L。

关于HEPES 缓冲溶液的配制，不同的文献资料有不同的说法。根据用途，一种是单纯的HEPES+NaOH，另一种是HEPES+盐。各种配制方法总结如下：

一、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制

119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸馏水中，加0.5~1M 的NaOH水溶液调节至少所需pH(HEPES的有效pH 范围是6.8~8.2)，然后用蒸馏水定容至500ml，于4摄氏度保存。

二、加少量盐的HEPES Buffer配方(500ml)

HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液调节pH值，最后定容。

三、2×HEPES缓冲盐溶液的配制

将1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸馏水，用0.5M NaOH调节至所需pH值，再用蒸馏水定容至100ml即可。

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