葡萄糖氧化酶的作用

 葡萄糖氧化酶是从霉菌和蜂蜜中发现的一种酶。该酶对葡萄糖具有特异性。能催化葡萄糖通过消耗空气中的氧而氧化。因此，该酶可用来除去葡萄糖或氧气。由于能定量地生成H2O2，所以作为D-葡萄糖的定量试剂而广泛被应用于生物化学领域。

葡萄糖氧化酶在蛋奶粉生产过程中可以避免美拉德反应的发生。同时，葡萄糖氧化酶用于肉和蛋白质食品有助于金黄色泽的产生。葡萄糖氧化酶还可以从密封系统中除去氧气抑制脂肪氧化，和天然色素的降解。葡萄糖氧化酶对食品有多种作用，作为在食品保鲜及包装中最大的作用是除氧，延长食品的保鲜保质期。此外葡萄糖氧化酶催化过程不仅能使葡萄糖氧化变性，还能在反映中消耗多个氧分子，因此，可作为脱氧剂广泛应用于食品保鲜。

北京上海金畔生物科技有限公司科技有限公司是长期从事生化试剂耗材生产和销售的厂家。备有大量现货产品，其中包括生化试剂类产品葡萄糖氧化酶，货号为G8030，常卖规格为10KU。作为科研实验用试剂类产品，此标准品用于相关分析实验。常用诊断用酶。血浆中葡萄糖测定。用于生化研究， 用于葡萄糖的分析，制备尿糖和血糖试纸等。

MH培养基如何灭菌最合适以及MH培养基的使用方法

微生物中所指的MH是Mueller-Hinton的首字母缩写，指的是水解酪蛋白。而MH培养基指的就是水解酪蛋白（Mueller-Hinton）培养基，可配置成MH血琼脂培养基用于链球菌的药物敏感实验。本文主要介绍的是MH培养基如何灭菌最合适以及MH培养基的使用方法。

MH培养基如何灭菌

MH培养基可用湿热灭菌法,115度30分钟,作分离驯化蛋白酶的菌。

MH培养基的使用方法：

1、 称取本品38g,加入蒸馏水或去离子水1 L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装三角瓶,121℃高压灭菌15min,备用.

2、 试验菌液的制备：从TSA平皿上挑取3-5个形态相似的菌落顶端部分接种MHB或TSB培养基.经36±1℃培养4-6小时后,比浊至0.5麦氏单位.

3、 接种：用无菌棉拭浸取比浊好的菌液,在管壁内轻轻转压除去过多菌液,然后再轻轻涂抹培养基,每一平皿涂抹三次.每次涂抹后均需将平皿转动60度,再行下一次涂抹.每一质控菌株涂抹三个平皿.

4、 贴片：接种后的平皿置室温片刻,待稍干后,用无菌镊子将抗生素纸片均匀贴布于平皿琼脂表面.各纸片间中心间距不得小于24mm,纸片距平皿边不得小于15mm.一旦纸片接触琼脂表面,即不可再移动,因此时药物已开始扩散.

5、 培养：纸片贴妥后,在15-30分钟内,将平皿翻过来置于36±1℃培养16—24h后,观察结果.平皿培养时不宜堆放,以二个相叠为宜.

表面活性剂的作用有哪些

    表面活性剂(surfactant)，是指加入少量能使其溶液体系的界面状态发生明显变化的物质。表面活性剂分为离子型表面活性剂（包括阳离子表面活性剂与阴离子表面活性剂）、非离子型表面活性剂、两性表面活性剂、复配表面活性剂、其他表面活性剂等。那么表面活性剂的作用是什么呢？
    表面活性剂的作用
    （1）乳化作用：由于油脂在水中表面张力大,当水中滴入油脂后,用力搅拌,油脂被粉碎成细珠状,互相混合成乳浊液,但搅拌停止又重新分层.如果加入表面活性剂,用力搅拌,停止后很长时间内却不易分层,这就是乳化作用.其原因是油脂的疏水性被活性剂的亲水基团所包围,形成定向的吸引力,降低了油在水中分散所需要的功,使油脂得到很好的乳化。
    （2）润湿作用：零件表面上往往粘附有一层蜡、油脂或鳞片状的物质,这些物质是疏水性的.由于这些物质的污染,零件表面不易被水润湿,当水溶液中加入表面活性剂时,零件上的水珠就很容易分散开来,使零件的表面张力大大降低,达到润湿目的。
    （3）增溶作用：油类物质中加入表面活性剂后,才能溶解,但是这种溶解只有在表面活性剂的浓度达到胶体的临界浓度时才能发生,溶解度的大小根据增溶对象和性质来决定.就增溶作用而言,长的疏水基因烃链要比短烃链强,饱和烃链比不饱和烃链强,非离子表面活性剂增溶作用一般比较显著。
    （4）分散作用：灰尘和污粒等固体粒子比较容易聚集在一起,在水中容易发生沉降,表面活性剂的分子能使固体粒子聚集体分割成细小的微粒,使其分散悬浮在溶液中,起到促使固体粒子均匀分散的作用。
    （5）泡沫作用：泡沫的形成主要是活性剂的定向吸附作用,是气液两相间的表面张力降低所致.一般低分子活性剂容易发泡,高分子活性剂泡沫少,豆蔻酸黄发泡性最高,硬脂酸钠发泡性最差,阴离子活性剂发泡性和泡沫稳定性比非离子型好,如烷基苯磺酸钠发泡性很强.通常使用的泡沫稳定剂有脂肪醇酰胺、羧基甲基纤维素等,泡沫抑制剂有脂肪酸、脂肪酸酯、聚醚等及其它非离子表面活性剂.x0d上海金山经纬化工有限公司是马来西亚吉隆坡甲洞集团（简称KLK）子公司.专业从事精细化学品制造企业,包括x0d二甲基乙酰胺批发x0d.系中国洗涤用品协会理事单位和中国精细化学协作组成员,亦系中国烟草学会会员单位。
    以上就是表面活性剂的作用，表面活性剂的分子结构具有两亲性：一端为亲水团子，另一端为疏水基团；亲水基团常为极性基团，如羧酸、磺酸、硫酸、氨基或胺基及其盐，羟基、酰胺基、醚键等也可作为极性亲水基团；

简述bradford法测蛋白浓度实验过程

Bradford法测蛋白浓度是利用蛋白质-染料结合的原理，定量地测定微量蛋白质浓度的快速灵敏的方法。
Bradford法测蛋白浓度原理
考马斯亮蓝(CBB)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm;当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质—色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速;其结合物在室温下1h内保持稳定。该法试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg/ml，bradford法测蛋白浓度是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
Bradford法测蛋白浓度试验过程
1、试剂：
（1）考马斯亮蓝试剂：
考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，用蒸馏水稀释至1000ml, 滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250, 4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。
（2）标准蛋白质溶液：
纯的牛血清血蛋白，根据其纯度同0.15mol/L NaCl配制成100 ug/ml蛋白溶液。
2. 器材： （1）可见光分光光度计 （2）旋涡混合器
3、标准曲线的制作
试管编号 0 1 2 3 4 5 6
100ug/ml标准蛋白（ml） 0.0  0.1 0.2  0.3  0.4  0.5  0.6
0.15mol/L NaCl （ml） 1  0.9  0.8  0.7 0.6  0.5 ? 0.4
考马斯亮蓝试剂 （ml） 5 5 5 5 5 5 5
摇匀，1h内以0号管为空白对照,在595nm处比色
A595nm
以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug），在坐标轴上绘制标准曲线。
4、样品中蛋白质含量的测定
另取两支干净的试管（做一重复），加入合适浓度的待测样品，使其测定值在标准曲线的范围内，测定方法同上，由样品液的吸光度查标准曲线即可求出含量。
注意事项：
1、如果要求严格，最好在试剂加入后的5~20min内测定光 吸收，因为这段时间内颜色是最稳定的。
2、若选择在旋涡混合器上混合，注意不要太剧烈，以免产生大量气泡而难于消除。
一、实验目的
用bradford法测蛋白浓度，测定未知蛋白质浓度样品的吸光度，根据标准曲线得到蛋白质的浓度。配制一组浓度分别为0.10mg/ml，0.08mg/ml，0.06mg/ml，0.04mg/ml，0.02mg/ml，0mg/ml的牛血清蛋白（BSA）溶液，测定这组溶液的吸光度，得到蛋白质浓度对吸光度的一条标准曲线。测定未知蛋白质浓度样品的吸光度，根据标准曲线得到蛋白质的浓度。
二、bradford法测蛋白浓度实验过程
1．准备所需的药品和仪器。
2．计算所需配制的溶液的量。
先配制1mg/ml的牛血清蛋白（BSA）母液，再往母液中加入磷酸缓冲溶液（PBS）配制一组浓度分别为1.0mg/ml，0.8mg/ml，0.6mg/ml，0.4mg/ml，0.2mg/ml的BSA溶液，再将这组溶液稀释10倍，得到一组浓度分别为0.10mg/ml，0.08mg/ml，0.06mg/ml，0.04mg/ml，0.02mg/ml的BSA溶液。计算第一步稀释各组需要的BSA溶液及PBS溶液的体积。
BSA体积（ul） 100 80 60 40 20
PBS体积（ul） 900 920 940 960 980
BSA浓度（mg/ml） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2
3．具体操作过程。
用天平称量1.00g牛血清蛋白（BSA），溶于去离子水中，配成100ml的溶液，溶液的浓度为10mg/ml。用移液枪分别取100ul，80ul，60ul，40ul，20ul的BSA溶液，置于1.5ml的EP管中，再分别加入900ul，920ul，940ul，960ul，980ul的磷酸缓冲溶液（PBS）配成1ml的溶液，震荡使溶液混合均匀。得到一组浓度分别为1.0mg/ml，0.8mg/ml，0.6mg/ml，0.4mg/ml，0.2mg/ml的BSA溶液。
移液枪分别移取100ul刚配好的一组BSA溶液，置于1.5ml的EP管中，各加入900ul的PBS溶液，震荡使溶液混合均匀。得到一组浓度分别为0.10?mg/ml，0.08mg/ml，0.06mg/ml，0.04mg/ml，0.02mg/ml的BSA溶液。另外量取1ml的PBS溶液（BSA溶液浓度为0?mg/ml）作对照试验。
用移液枪分别移取50ul配好的一组BSA溶液，滴加到孔板中，再分别加入200ul的考马斯亮蓝（CBB）。静置10min后，用酶标仪测得这组BSA溶液的吸光度。
bradford法测蛋白浓度实验结果
通过用Bradford法测蛋白浓度，得到的吸光度对BSA浓度的关系曲线为y=3.09x+0.6807，R2=0.9541。可以看出吸光度—浓度的关系曲线中R2值较小，即测得的吸光度与浓度的线性不是很好。究其原因可能有以下两点：一是移液枪的操作不是很熟练，二是移液枪在移液过程中存在着气泡，使移的液体体积不准确。

tris饱和酚配制

 Tris饱和酚是用Tris-Cl pH8.0饱和过的重蒸酚，为浅黄色透明液体，有刺激性气味，上层为Tris盐酸缓冲液，pH>7.8。虽然现在有现成产品出售，但是还是要掌握tris饱和酚配制方法。下面就详细介绍配制步骤和方法。

Tris饱和酚：

1、冰箱取出重蒸酚，室温放置－－－68度水浴溶化，切勿立即放入68度的水浴中，以防玻璃炸裂；

2、加8－羟基喹啉至0.1％和β－巯基乙醇至0.2％，（原液14. 4MOL/ML），混匀，溶液呈现黄色，倒入分液漏斗中（也可在烧杯中进行）；

3、加入等溶剂的1MOL/ML的Tris(PH8.0),反复混匀后，静至分层；放出下层黄色酚液，弃上层；

4、加固体Tris约1g/100ml酚，摇匀，去水相；

5、加0.1MOL/MLTris(PH8.0)平衡数次，至PH为8.0；

6、加0.1MOL/MLTris(PH8.0)于棕色瓶中4度保存；

7、如黄色消失或呈粉红色，则不能使用。

提醒各位老师和同学，Tris饱和酚为有毒、刺激性物体，需要在通风橱中操作。上海金畔生物科技有限公司提供成品出售。免去手动配制tris饱和酚。欢迎选购。