Retrovirus Packaging Kit Ampho酶试剂盒Takara Clontech

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Retrovirus Packaging Kit Ampho
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Takara 6161 Retrovirus Packaging Kit Ampho 10 Rxns ¥2,003 Retrovirus Packaging Kit Ampho Retrovirus Packaging Kit Ampho Retrovirus Packaging Kit Ampho
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■ 制品内容
pGP Vector (1 μg/μl) 50 μl
pE-ampho Vector (1 μg/μl) 50 μl
Transfection Buffer
500 μl×10 支
2 M CaCl2
620 μl
25 mM Chloroquine
40 μl
本试剂盒中包含有2个病毒包装用质粒以及必要的转染用试剂。
 
■ 制品说明
Retrovirus Packaging Kit Ampho是逆转录病毒包装试剂盒,通过将插入有目的基因的逆转录病毒表达载体和2个特别设计的病毒包装用质粒通过磷酸钙法共转染到包装细胞中,可以得到高病毒滴度的逆转录病毒体。试剂盒中包含有表达gag-pol基因的质粒,pGP 质粒和表达amphotropic env基因的质粒及pE-ampho 质粒作为包装载体。使用本产品包装得到的逆转录病毒可以用于感染大多数的哺乳动物细胞。
试剂盒中特别设计的病毒包装用质粒上插入有逆转录病毒的结构基因,gag-polenv基因,这两种基因是逆转录病毒构建和复制所必需的基因,但是质粒上缺少包装信号Ψ序列和LTR序列,因此包装用质粒本身是无法包装成逆转录病毒的,只有将其和包含Ψ序列和LTR序列的逆转录病毒表达载体共转染到HEK293或者HEK293T包装细胞中,才能包装得到逆转录病毒体。试剂盒中同时还包含基于磷酸钙转染方法的转染试剂,方便客户使用,一般转染后48小时就可以得到高病毒滴度的逆转录病毒。
试剂盒中包装用质粒已经纯化可以直接用于转染,同时质粒上除了gag-polenv基因外,不包含其他任 何逆转录病毒来源的DNA序列,所以产生具有自我复制能力逆转录病毒的几率非常低。
 
Retrovirus Packaging Kit Ampho
 
■ 保存
-20℃。
Transfection Buffer、2 M CaCl2、25 mM Chloroquine融化后4℃保存。
 
 

同仁化学Fluo 4-AM special packaging试剂货号:F312 CAS号:273221-67-3| 日本DOJINDO

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品,欢迎访问官网了解更多信息

Fluo 4-AM special packaging试剂货号:F312
1-[2-Amino-5-(2,7-difluoro-6-acetoxymethoxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, tetra(acetoxymethyl)ester
CAS号:273221-67-3
商品信息
储存条件:-20度保存,避光
运输条件:室温
分子式:

C51H50F2N2O23

分子量:

1096.94

特点:

 

● 激发波长494 nm,发射波长516 nm

● 激光共聚焦,流式细胞仪均可检测

● 荧光强度高

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选择规格:
50ug
50ug*8

现货

 
钙离子

Fluo 4-AM special packaging试剂货号:F312 CAS号:273221-67-3

Fluo 4-AM special packaging试剂货号:F312 CAS号:273221-67-3

活动进行中
产品性状
产品概述
原理
激发发射波长
操作步骤
注意事项
数据处理
文献
Q&A

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NO.1.    Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit    细胞凋亡检测

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NO.4.    Cell Counting Kit-8    细胞增殖毒性检测

NO.5.    Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST    乳酸脱氢酶(LDH)检测

 

产品性状

规格

性状 :                      本产品为橙红色粉末,使用时将固体溶解于无水DMSO中

纯度(HPLC):           98%以上

 

荧光光谱图  :            符合实验要求

NMR光谱图 :           符合实验要求

处理条件

保存方法 :                避光冷冻

产品概述

Fluo 4是一种将Fluo 3结构中的Cl替换成F的钙荧光探针。由于将Cl替换成了电子吸引力更强的F,它的最大激发波长会向短波长处偏离10 nm左右。这个波长更接近于氩激光器的波长,所以用氩激光器激发时,Fluo 4的荧光强度比Fluo 3强1倍。

原理

Fluo 4-AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料,需用无水DMSO配制。Fluo 4-AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fluo 4,从而被滞留在细胞内。产生的Fluo 4随后会和钙离子(Ca2+)结合并发出荧光。由于Fluo 4与钙离子的亲和力和Fluo 3近似(Fluo 3:Kd=0.4 μmol/l、Fluo 4: Kd=0.36 μmol/l),所以使用上和Fluo 3也基本相同,可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪等仪器检测细胞内钙离子浓度的变化。钙离子探针种类繁多,根据不同的实验要求,选择不同的产品。

激发发射波长

E x   :494 nm

E m  :516 nm

操作步骤

1、用 HBSS 溶液稀释 1-5 mmol/l 的 Fluo 4-AM 母液,配制成 1-5 µmol/l 的 Fluo 4-AM 工作液。

(此浓度仅供参考,请根据具体实验要求自行调整)

例如:1 mmol/l 母液配制 1 ml 浓度为 5 µmol/l 工作液的方法:用 1 ml HBSS 溶液稀释 5 µl 母

液即可。Fluo 4-AM 工作液需要即配即用,请勿反复冻存。如果Fluo 4-AM进入细胞的效果不好,可

使用Pluronic® F-127,后者可以防止Fluo 4-AM在缓冲液里聚合并能促进其进入细胞。

*Pluronic® F-127 先用DMSO溶解至浓度为 20%(W/V),然后根据实验需要直接加入Fluo 4-AM工作

液中至终浓度为 0.04-0.05%(此浓度仅供参考,请根据具体实验要求自行调整)。

2、取出预培养的细胞,除去培养基,使用 HBSS 溶液洗涤细胞 3 次。如果使用含血清的培养基,血清中

的酯酶会分解 AM 体,从而降低 Fluo 4-AM 进入细胞的效果。另外含有酚红的培养基会使本底值略

微偏高,所以加工作液之前需尽量去除培养基残留。

3、加入 Fluo 4-AM 工作液,溶液量以覆盖细胞为准。

4、37℃细胞培养箱孵育 10-60 分钟,除去 Fluo 4-AM 工作液。关于孵育的时间,如果首次做实验不能

确定,建议先孵育30分钟看荧光效果:如果细胞死亡较多,适当缩短时间;如果荧光强度太弱,

适当延长时间。

5、用 HBSS溶液洗涤细胞 3 次,以充分去除残留的 Fluo 4-AM 工作液。然后加入 HBSS 溶液覆盖细胞。

6、37℃培养箱孵育约 20-30 分钟,以确保 AM 体在细胞内的完全去酯化作用。

如果细胞内酯酶活性较低,建议严格按照此操作进行;酯酶活性高的细胞实验,可以忽略此步。

7、用激光共聚焦或荧光显微镜检测细胞,激发波长 494 nm,发射波长 516 nm。

注意事项

1、试剂容易吸潮,从冰箱取出后,请确认在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂极其微量,

开封前,请轻弹管壁几次,以保证粉末落入管底。

2、第一次使用时, 建议母液即配即用。试剂溶解后尽可能在短时间内使用,以保证实验效果。

3、溶解液DMSO需要保证新鲜无水,否则将会导致 AM 体水解,使荧光染料无法进入细胞,影响实验效果

4、母液遇水极易分解,如果不能一次用完,建议分装保存,例如分装成 5 μl/管,用封口膜封口,

并用铝箔纸包裹,放在一个密闭性能好的塑料袋中,并放入一包干燥剂,在≤-20℃密封避光保存。

5、建议您在正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等,找到最佳实验条件

数据处理

计算公式:

[Ca2+]i = Kd×(F-Fmin) / (Fmax-F)

[Ca2+]i :细胞内Ca2+浓度

Kd:解离常数

F  :荧光强度

Fmin:Ca2+为零状态下测得的荧光比值

Fmax:Ca2+为饱和状态下测得的荧光比值

文献

1) A. Minta, J. P. Y. Kao and R. Y. Tsien, “Fluorescent Indicators for Cytosolic Calcium Based on Rhodamine and Fluorescein Chromophores”, J. Biol. Chem., 1989, 264(14), 8171.

2) J. P. Kao, A. T. Harootunian and R. Y. Tsien, “Photochemically Generated Cytosolic Calcium Pulses and Their Detection by Fluo-3”, J. Biol. Chem., 1989, 264, 8179.

3) M. Eberhard and P. Erne, “Kinetics of Calcium Binding to Fluo-3 by Stopped-Flow Fluorescence”, Biochem. Biophys. Res. Commun., 1989, 163, 309.

4) A. Hernandez-Cruz, F. Sala and P. R. Adams, “Subcellular Calcium Transients Visualized by Confocal Microscopy in a Voltage-clamped Vertebrate Neuron”, Science, 1990, 247, 858.

5) A. H. Cornell-Bell, S. M. Finkbeiner, M. S. Cooper and S. J. Smith, “Glutamate Induces Calcium Waves in Cultured Astrocytes: Long-Range Glial Signaling”, Science, 1990, 247, 470.

6) D. A. Williams, “Quantitative Intracellular Calcium Imaging with Laser-scanning Confocal Microscopy”, Cell Calcium, 1990, 11, 589.

7) D. A. Williams, S. H. Cody, C. A. Gehring, R. W. Parish and P. J. Harris, “Confocal Imaging of Ionised Calcium in Living Plant Cells”, Cell Calcium, 1990, 11, 291.

8) P. A. Vandenberghe and J. L. Ceuppens, “Flow Cytometric Measurement of Cytoplasmic Free Calcium in Human Peripheral Blood T Lymphocytes with Fluo-3, A New Fluorescent Calcium Indicator”, J. Immunol. Methods, 1990, 127, 197.

10) M. Iino, H. Kasai and T. Yamazawa, “Visualization of Neural Control of Intracellular Ca2+ Concentration in Single Vascular Smooth Muscle Cells in situ”, EMBO J., 1994, 13 (21), 5026.

11) M. E. Dailey and S. J. Smith, “Spontaneous Ca2+ Transients in Developing Hippocampal Pyramidal Cells”, J. Neurobiol., 1994, 25(3), 243.

12) M. Burnier, G. Centeno, E. Burki and H. R. Brunner, “Confocal Microscopy to Analyze Cytosolic and Nuclear Calcium in Cultured Vascular Cells”, Am. J. Physiol., 1994, 266, C1118.

13) E. Donnadieu and L. Y. W. Bourguignon, “Ca2+ Signaling in Endothelial Cells Stimulated by Bradykinin: Ca2+ Measurement in the Mitochondria and the Cytosol by Confocal Microscopy”, Cell Calcium, 1996, 20 (1), 53.

14) M. Ikeda, H. Ariyoshi, J. Kambayashi, K. Fujitani, N. Shinoki, M. Sakon, T. Kawasaki and M. Monden, “Separate Analysis of Nuclear and Cytosolic Ca2+ Concentrations in Human Umbilical Vein Endothelial Cells”, J. Cell. Biochem., 1996, 63 (1), 23.

15) J. E. Merritt, S. A. McCarthy, M. P. A. Davies and K. E. Moores, “Use of fluo-3 to Measure Cytosolic Ca2+ in Platelets and Neutrophils Loading Cells with the Dye, Calibration of Traces, Measurements in the Presence of Plasma, and Buffering of Cytosolic Ca2+”, Biochem. J., 1990, 269, 513.

16)Hao Gu, Yuhui Zhu, Jiawei Yang, Ruixue Jiang, Yuwei Deng, Anshuo Li, Yingjing Fang, Qianju Wu, Honghuan Tu, Haishuang Chang, Jin Wen, Xinquan Jiang,”Liver-Inspired Polyetherketoneketone Scaffolds Simulate Regenerative Signals and Mobilize Anti-Inflammatory Reserves to Reprogram Macrophage Metabolism for Boosted Osteoporotic Osseointegration.Advanced Science”,2023, Advanced Science, doi:10.1002/advs.202302136

Q&A

 

 

 

Q1: 细胞内检测钙离子的试剂种类都有什么,选择什么样的比较好呢?

 

 

A1: 根据检测仪器和检测波长有很多的选择,产品后面标有AM的试剂是可以通过细胞膜的

有很多种相似的试剂,其特点如下:

【Fura 2】

•双波长激发

激发(λex= Ca:340 nm, Ca free:380 nm)、发射:λem=500 nm

•解离常数:224 nmol/L

•因为是荧光强度的比值、可以有效的减小误差

=>細胞内Ca浓度计算。

•该试剂被使用的最多

•必须要更换过滤片、会耽误一些时间。

【Fluo 3】

•单波长激发

激发:λex=508 nm、发射:λem=527 nm

•解离常数:400 nmol/L

•因为激发光在长波段,所以对细胞的损伤比较小

(不会受到NADH、NADPH的影响)

•可以使用Ar激光激发装置。

•不适合切片中钙离子的检测

•【Fluo 4】

•单波长激发

•激发:λex=495 nm、发射:λem=518 nm

•解离常数:360 nmol/L

•与Fluo3相比对荧光强度更高。

•因为激发光在长波段,所以对细胞的损伤比较小

•(不会受到NADH、NADPH的影响)

•可以使用Ar激光激发装置。 •与Fluo3相比对細胞的毒性低

•【Indo 1】

•单波长激发

•激发:λex= 330 nm、发射(λem= Ca:410 nm, Ca free:485 nm)

•解离常数:250 nmol/L

•由于不需要更换滤光片,可以很快地检测细胞内钙离子浓度变化以及像心肌细胞运动中钙离子的变化

•(需要两台检测仪器)

•【Rhod 2】

•单波长激发

•激发:λex=553 nm、发射:λem=576 nm

•解离常数:1.0 μmol/L

•因为激发光在长波段,所以对细胞的损伤比较小

•(不会受到NADH、NADPH的影响)

•可以使用Ar激光激发装置。

•【Quin 2】

•单波长激发

•激发:λex=339 nm、发射:λem=492 nm

•解离常数:110 nmol/L

•最早开发的产品

同仁化学Fura2-AM special packaging试剂货号:F025 CAS号:108964-32-5| 日本DOJINDO

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品,欢迎访问官网了解更多信息

Fura2-AM special packaging试剂货号:F025
1-[6-Amino-2-(5-carboxy-2-oxazolyl)-5-benzofuranyloxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, pentaacetoxymethyl ester
CAS号:108964-32-5
商品信息
储存条件:-20度保存
运输条件:室温
分子式:

C44H47N3O24

分子量:

1001.85

 

 

特点:

 

● 双波长激发检测钙离子

● 激光共聚焦,流式细胞仪均可检测

● 荧光强度高

 

 

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选择规格:
50ug
50ug*8

货 

 
钙离子

Fura2-AM special packaging试剂货号:F025  CAS号:108964-32-5

Fura2-AM special packaging试剂货号:F025  CAS号:108964-32-5

产品性状
产品概述
原理
激发发射波长
操作步骤
注意事项
数据处理
参考文献
Q&A

产品性状

规格

性状 :                      本产品为黄色或橙黄色粉末,使用时将固体溶解于无水DMSO中

纯度(HPLC):          98%以上

荧光光谱图:             符合实验要求

NMR光谱图:            符合实验要求

处理条件

保存方法 :                避光冷冻

产品概述

Fura 2-AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fura 2-AM的荧光比较弱,最大激发波长为369 nm,最大发射波长为478 nm,并且其荧光不会随钙离子浓度改变而改变。Fura 2-AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fura 2,从而被滞留在细胞内。Fura 2和钙离子结合后,最大激发波长为335 nm(最大激发波长随离子浓度的的不同而有所不同),最大发射波长为505nm。实际检测时推荐使用的激发波长为340nm,发射波长为510 nm。如果做双波长检测,则推荐使用的激发波长为340 nm和380 nm。

原理

Fura 2可以和钙离子(Ca2+)结合,结合钙离子后在330-350 nm激发光下可以产生较强的荧光,而在380 nm激发光下则会导致荧光减弱。这样就可以使用340 nm和380 nm这两个荧光的比值来检测细胞内的钙离子浓度,可以消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异,荧光探针的渗漏,细胞厚度差异等一些误差因素。

激发发射波长

Ex :340~380 nm

Em :510 nm

Fura2-AM special packaging试剂货号:F025  CAS号:108964-32-5

操作步骤

1、用HBSS溶液稀释1-5 mmol/l的Fura 2-AM母液,配制成1-5 μmol/l的Fura 2-AM工作液。

(此浓度仅供参考,请根据具体实验要求自行调整)

例如:1 mmol/l母液配制1 ml浓度为5 μmol/l工作液的方法:用1 ml HBSS溶液稀释5μl母液即可。

如果Fura 2-AM进入细胞的效果不好,可使用Pluronic® F-127,后者可以防止Fura 2-AM在缓冲液里

聚合并能促进其进入细胞。

*Pluronic® F-127先用DMSO溶解至浓度为20%(W/V),然后根据实验需要直接加入Fura 2-AM工作液

中至终浓度为0.04-0.05%(此浓度仅供参考,请根据具体实验要求自行调整)。

2、取出预培养的细胞,除去培养基,使用HBSS溶液洗涤细胞3次。

如果使用含血清的培养基,血清中的酯酶会分解AM体,从而降低Fura 2-AM进入细胞的效果。

另外含有酚红的培养 基会使本底值略微偏高,所以加工作液之前需尽量去除培养基残留。

3、加入Fura 2-AM工作液,溶液量以覆盖细胞为准。

4、37℃细胞培养箱孵育10-60分钟,除去Fura 2-AM工作液。关于孵育的时间,如果首次做实验不能定

建议先孵育30分钟,看荧光效果:如果细胞死亡较多,缩短时间;荧光强度太弱,延长时间。

5、用HBSS溶液洗涤细胞3次,以充分去除残留的Fura 2-AM工作液。然后加入HBSS溶液覆盖细胞。

6、37℃培养箱孵育约20-30分钟,以确保AM体在细胞内的完全去酯化作用。如果细胞内酯酶活性较低,

建议严格按照此操作进行;酯酶活性高的细胞实验,可以忽略此步。

7、用流式细胞仪或其它设备检测细胞,激发波长380 nm(Fura 2)和340 nm(钙离子-Fura 2),

发射波长510 nm。

注意事项

1、试剂容易吸潮,从冰箱取出后,请确认在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂极其微量,

开封前,请轻弹管壁几次,以保证粉末落入管底。

2、第一次使用时, 建议母液即配即用。试剂溶解后尽可能在短时间内使用,以保证实验效果。

3、溶解液DMSO需要保证新鲜无水,否则将会导致AM体水解,使荧光染料无法进入细胞,影响实验效果。

4、母液遇水极易分解,如果不能一次用完,建议分装保存,例如分装成5 μl/管,用封口膜封口,并用铝箔纸包裹,

放在一个密闭性能好的塑料袋中,并放入一包干燥剂,在≤-20℃密封避光保存。

5、建议您在正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等,找到最佳实验条件。

数据处理

Fλ1与Fλ2分别是λ1与λ2激发时的总荧光强度,Sf 1与Sf 2是两种紫外光激发时游离Fura-2 (未结合Ca2+)的荧光系数,

Cf是游离的Fura-2浓度,Sb1与Sb2是相应波长下结合Ca2+后Fura-2的荧光系数,Cb是结合Ca2+的Fura-2浓度

参考文献

1) G. Grynkiewicz, M. Poenie and R. Y. Tsien, “A New Generation of Ca2+ Indicators with Greatly Improved Fluorescence Properties”, J. Biol. Chem., 1985, 260, 3440.

2) D. A. Williams, K. E. Fogarty, R. Y. Tsien and F. S. Fay, “Calcium Gradients in Single Smooth Muscle Cells Revealed by the Digital Imaging Microscope Using Fura-2”, Nature, 1985, 318, 558.

3) R. Y. Tsien, T. J. Rink and M. Poenie, “Measurement of Cytosolic Free Ca2+ in Individual Small Cells Using Fluorescence Microscopy with Dual Excitation Wavelengths”, Cell Calcium, 1985, 6, 145.

4) D. A. Williams and F. S. Fay, “Intracellular Calibration of the Fluorescent Calcium Indicator Fura-2”, Cell Calcium, 1990, 11, 75.

5) W. Almers and E. Neher, “The Ca Signal from Fura-2 Loaded Mast Cells Depends Strongly on the Method of Dye-loading”, FEBS Lett., 1985, 192, 13.

6) G. H. R. Rao, J. D. Peller and J. G. White, “Measurement of Ionized Calcium in Blood Platelets with a New Generation Calcium Indicator”, Biochem. Biophys. Res. Commun., 1985, 132, 652.

7) H. Ozaki, K. Sato, T. Satoh and H. Karaki, “Simultaneous Recordings of Calcium Signals and Mechanical Activity Using Fluorescent Dye Fura 2 in Isolated Strips of Vascular Smooth Muscle”, Jpn. J. Pharmacol., 1987, 45, 429.

8) M. Mitsui, A. Abe, M. Tajimi and H. Karaki, “Leakage of the Fluorescent Ca2+ Indicator Fura-2 in Smooth Muscle”, Jpn. J. Pharmacol., 1993, 61, 165.

Q&A

 

 

 

Q1: 细胞内检测钙离子的试剂种类都有什么,选择什么样的比较好呢?

 

 

A1: 根据检测仪器和检测波长有很多的选择,产品后面标有AM的试剂是可以通过细胞膜的

有很多种相似的试剂,其特点如下:

【Fura 2】

•双波长激发

激发(λex= Ca:340 nm, Ca free:380 nm)、发射:λem=500 nm

•解离常数:224 nmol/L

•因为是荧光强度的比值、可以有效的减小误差

=>細胞内Ca浓度计算。

•该试剂被使用的最多

•必须要更换过滤片、会耽误一些时间。

【Fluo 3】

•单波长激发

激发:λex=508 nm、发射:λem=527 nm

•解离常数:400 nmol/L

•因为激发光在长波段,所以对细胞的损伤比较小

(不会受到NADH、NADPH的影响)

•可以使用Ar激光激发装置。

•不适合切片中钙离子的检测

•【Fluo 4】

•单波长激发

•激发:λex=495 nm、发射:λem=518 nm

•解离常数:360 nmol/L

•与Fluo3相比对荧光强度更高。

•因为激发光在长波段,所以对细胞的损伤比较小

•(不会受到NADH、NADPH的影响)

•可以使用Ar激光激发装置。 •与Fluo3相比对細胞的毒性低

•【Indo 1】

•单波长激发

•激发:λex= 330 nm、发射(λem= Ca:410 nm, Ca free:485 nm)

•解离常数:250 nmol/L

•由于不需要更换滤光片,可以很快地检测细胞内钙离子浓度变化以及像心肌细胞运动中钙离子的变化

•(需要两台检测仪器)

•【Rhod 2】

•单波长激发

•激发:λex=553 nm、发射:λem=576 nm

•解离常数:1.0 μmol/L

•因为激发光在长波段,所以对细胞的损伤比较小

•(不会受到NADH、NADPH的影响)

•可以使用Ar激光激发装置。

•【Quin 2】

•单波长激发

•激发:λex=339 nm、发射:λem=492 nm

•解离常数:110 nmol/L

•最早开发的产品

LVpro™ Packaging Mix with pLVpro系列载体酶试剂盒Takara Clontech

上海金畔生物科技有限公司代理Takara Clontech酶试剂盒全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

LVpro Packaging Mix with pLVpro系列载体
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 6195 LVpro Packaging Mix 60 Rxns ¥8,277 LVpro™ Packaging Mix with pLVpro系列载体 LVpro™ Packaging Mix with pLVpro系列载体 LVpro™ Packaging Mix with pLVpro系列载体
Takara 6962 LVpro Packaging Mix (pLVpro-MSCV Vector) 1 Set ¥9,871 LVpro™ Packaging Mix with pLVpro系列载体 LVpro™ Packaging Mix with pLVpro系列载体 LVpro™ Packaging Mix with pLVpro系列载体
Takara 6963 LVpro Packaging Mix (pLVpro-MSCV-EI Vector) 1 Set ¥9,871 LVpro™ Packaging Mix with pLVpro系列载体 LVpro™ Packaging Mix with pLVpro系列载体 LVpro™ Packaging Mix with pLVpro系列载体
Takara 6964 LVpro Packaging Mix (pLVpro-EF1α Vector) 1 Set ¥9,871 LVpro™ Packaging Mix with pLVpro系列载体 LVpro™ Packaging Mix with pLVpro系列载体 LVpro™ Packaging Mix with pLVpro系列载体
Takara 6965 LVpro Packaging Mix (pLVpro-MSCV-ZsGreen1 Vector) 1 Set ¥9,871 LVpro™ Packaging Mix with pLVpro系列载体 LVpro™ Packaging Mix with pLVpro系列载体 LVpro™ Packaging Mix with pLVpro系列载体
Takara 6966 LVpro Packaging Mix (pLVpro-MSCV-EI-ZsGreen1 Vector) 1 Set ¥9,871 LVpro™ Packaging Mix with pLVpro系列载体 LVpro™ Packaging Mix with pLVpro系列载体 LVpro™ Packaging Mix with pLVpro系列载体
Takara 6967 LVpro Packaging Mix (pLVpro-EF1α-ZsGreen1 Vector) 1 Set ¥9,871 LVpro™ Packaging Mix with pLVpro系列载体 LVpro™ Packaging Mix with pLVpro系列载体 LVpro™ Packaging Mix with pLVpro系列载体
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■ 制品内容
·LVpro Packaging Mix (Code No. 6195)
LVpro Packaging Mix,60次用量*1(140 μl × 3)
*1:当使用100-mm培养皿时。
·LVpro Packaging Mix (pLVpro-MSCV Vector) (Code No. 6962)
·LVpro Packaging Mix (pLVpro-MSCV-EI Vector) (Code No. 6963)
·LVpro Packaging Mix (pLVpro-EF1 α Vector) (Code No. 6964)
·LVpro Packaging Mix (pLVpro-MSCV-ZsGreen1 Vector) (Code No. 6965)
·LVpro Packaging Mix (pLVpro-MSCV-EF1-ZsGreen1 Vector) (Code No. 6966)
·LVpro Packaging Mix (pLVpro-EF1 α -ZsGreen1 Vector) (Code No. 6967)
Code No. 6962-6967是由LVpro Packaging Mix (Code No. 6195) 和不同pLVpro Vector(Code No. 6956–6961)组成的套装,所包含的pLVpro Vector不单独销售。
pLVpro Vectors (Code No. 6956-6961):浓度为0.5 μg/μl, 质量为20 μg,体积为40 μl。
 
Limited Use Label License (Code No. 6962-6967):[M105]
 
■ 制品说明
·HIV-1 tat非依赖性第三代慢病毒载体
·临床使用可能 ,将HIV-1来源序列排除到极限 ,提高安全性
·优化了包装系统,制备高滴度慢病毒粒子
·和3’LTR/ΔU3 pLVpro vector组合使用可进行P2实验(注:取决于插入基因)
 
LVpro Packaging Mix是经过优化的质粒混合物,高效表达慢病毒制备所需要的成分,用于包装生产高滴度重组慢病毒。将pLVpro慢病毒载体和LVpro包装质粒混合物共转染Lenti-X 293T细胞,包装质粒瞬时表达Gag、Pol、Rev和VSV-G包膜蛋白,这有助于将重组病毒RNA(从pLVpro慢病毒载体转录而来)包入完整的病毒粒子中(图1)。使用这种经过优化的包装质粒混合物和高效转染Lenti-X 293T细胞的转染试剂Trans IT-Virus-GEN(Mirus Bio, Code No. MIR6700)或Trans IT-293(Mirus Bio, Code No. MIR2700),可以获得高滴度的重组慢病毒,而且在多数情况下,该病毒可用于直接感染靶细胞,而不需要事先进行浓缩处理。
 
pLVpro vector是tat非依赖性第三代慢病毒载体,其中5’LTR的U3区域被CMV启动子取代,并且在不影响感染滴度的情况下删除了包装信号附近的HIV来源序列。
 
LVpro™ Packaging Mix with pLVpro系列载体
图1. 使用LVpro Packaging Mix和Lenti-X 293T cells制备慢病毒。
使用LVpro Packaging Mix和携带目标基因的pLVpro慢病毒载体共转染Lenti-X 293T cells(Step1),产生相应的重组慢病毒基因组RNA转录本和病毒包装蛋白(Step2)。重组病毒RNA基因组上的包装信号(ψ)被包装蛋白所识别(Step3),使重组病毒RNA和包装蛋白相结合,形成病毒核心并被转运到细胞膜(Step4)。在那里,病毒核心被包含VSV-G包膜蛋白的细胞膜包裹。这样成熟的具有感染性的病毒粒子从细胞中产生了(Step5),这些病毒粒子会被释放到培养液中,然后从培养液中回收病毒粒子(Step6)。
 
虽然用这种试剂盒产生的病毒粒子是具有感染性的,但它们缺少在靶细胞中复制和增殖所必需的七种基因。该试剂盒使用了多种不同的质粒用于表达病毒蛋白,因此除非多次发生低频重组,否则很难产生具有复制能力的病毒,这样试剂盒的使用是非常安全的。
 
■ 保存
-20℃
 
LVpro™ Packaging Mix with pLVpro系列载体
LVpro Packaging Mix
with pLVpro系列载体

 

 
 
 

Retrovirus Packaging Kit Ampho酶试剂盒Takara Clontech

上海金畔生物科技有限公司代理Takara Clontech酶试剂盒全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

Retrovirus Packaging Kit Ampho
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 6161 Retrovirus Packaging Kit Ampho 10 次 ¥2,003 Retrovirus Packaging Kit Ampho Retrovirus Packaging Kit Ampho Retrovirus Packaging Kit Ampho
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■ 制品内容
pGP Vector (1 μg/μl) 50 μl
pE-ampho Vector (1 μg/μl) 50 μl
Transfection Buffer
500 μl×10 支
2 M CaCl2
620 μl
25 mM Chloroquine
40 μl
本试剂盒中包含有2个病毒包装用质粒以及必要的转染用试剂。
 
■ 制品说明
Retrovirus Packaging Kit Ampho是逆转录病毒包装试剂盒,通过将插入有目的基因的逆转录病毒表达载体和2个特别设计的病毒包装用质粒通过磷酸钙法共转染到包装细胞中,可以得到高病毒滴度的逆转录病毒体。试剂盒中包含有表达gag-pol基因的质粒,pGP 质粒和表达amphotropic env基因的质粒及pE-ampho 质粒作为包装载体。使用本产品包装得到的逆转录病毒可以用于感染大多数的哺乳动物细胞。
试剂盒中特别设计的病毒包装用质粒上插入有逆转录病毒的结构基因,gag-polenv基因,这两种基因是逆转录病毒构建和复制所必需的基因,但是质粒上缺少包装信号Ψ序列和LTR序列,因此包装用质粒本身是无法包装成逆转录病毒的,只有将其和包含Ψ序列和LTR序列的逆转录病毒表达载体共转染到HEK293或者HEK293T包装细胞中,才能包装得到逆转录病毒体。试剂盒中同时还包含基于磷酸钙转染方法的转染试剂,方便客户使用,一般转染后48小时就可以得到高病毒滴度的逆转录病毒。
试剂盒中包装用质粒已经纯化可以直接用于转染,同时质粒上除了gag-polenv基因外,不包含其他任 何逆转录病毒来源的DNA序列,所以产生具有自我复制能力逆转录病毒的几率非常低。
 
Retrovirus Packaging Kit Ampho
 
■ 保存
-20℃。
Transfection Buffer、2 M CaCl2、25 mM Chloroquine融化后4℃保存。