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品牌：FUJIFILM Wako
CAS No.：50-99-7 储存条件：室温 纯度：99.5+% (after drying) |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
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076-05705 |
Japanese Pharmacopoeia | 500g | – | 咨询 | – | – |
* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用
* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。
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品牌：FUJIFILM Wako
CAS No.：9028-53-9 储存条件：-20℃ 纯度：– |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
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071-02411 |
for Biochemistry | 100U | – | 1,110.00 | – | – |
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品牌：Nihon Pharm
CAS No.： 储存条件：2-10℃ 纯度：– |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
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394-01031 |
– | 300 g | – |
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– | – |
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特点：
● 细胞上清液和细胞样品均适用
● 稳定性好
●可使用酶标仪高通量筛选
产品解说
活动进行中
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凑单关联产品TOP5
NO.1. Lactate Assay Kit-WST 乳酸检测
NO.2. Glucose Uptake Probe-Green 葡萄糖摄取检测
NO.3. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
NO.4. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
NO.5. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测
试剂盒内含
| 50 tests | 200 tests | |
| Dye Mixture | ×1 | ×1 |
| 葡萄糖标准品（10 mmol/l）(红盖) | 150 μl×1 | 600 μl×1 |
| 酶(绿盖) | ×1 | ×1 |
| Assay Buffer | 3.5 ml×1 | 14 ml×1 |
| Reconstitution Buffer(蓝盖) | 350 μl×1 | 1.4 ml×1 |
概述
葡萄糖是一种提供体内能量来源的最重要的物质，也是一种主要能量代谢指标。它不仅是糖尿病和肥胖研究的糖代谢指标，在癌症研究中，也常和乳酸一起作为体内细胞代谢的检测指标。最新的研究表明，抑制与葡萄糖代谢和脂质代谢有关的酶的活性，可以抑制癌细胞的生长。
葡萄糖检测试剂盒（Glucose Assay Kit-WST）可以定量检测能量代谢的底物-葡萄糖，通过测定WST反应的吸光度来定量细胞培养基上清液中的葡萄糖。检测限可达浓度为0.02 mmol/l的葡萄糖，适合用96孔板检测，可以同时检测多个样品。
原理
*本试剂盒可以检测细胞上清液＊的葡萄糖的含量，通过检测WST甲赞的吸光度来测定。另外，试剂盒里有葡萄糖标准液，可以制作标准曲线，测定样品中的葡萄糖浓度。
*要测定细胞上清液以外的样品，请事先查看常见问题FAQ“是否有检测细胞上清液以外的实验例?”。
操作步骤
制作葡萄糖标准曲线
可以用试剂盒中的葡萄糖标准液制作出葡萄糖标准曲线，然后通过标准曲线求出样品中的葡萄糖浓度。当葡萄糖浓度在0.5 mmol/l以上时，可以通过稀释样品进行检测。
实验例
用Phloretin抑制葡萄糖的摄取
1. 制备所需浓度Phloretin的Jurkat细胞悬液 (5×105 cells/ml，在RPMI培养基中含有10%的胎牛血清和1%的青霉素-链霉素)。
2. 在6孔板中接种1×106 cells/孔的细胞悬液，在37℃，5% CO2培养箱中过夜培养。
3. 将细胞悬液转移到锥形管中，在1,500 rpm离心5 min。
4. 吸取100 µl上清液至1.5 ml微型管中，用超纯水稀释30倍。
5. 按照葡萄糖标准液的制备方法制备葡萄糖标准液。
6. 在96孔板中分别加入50 µl的样品或葡萄糖标准液。
7. 在每孔中加入50 µl工作液。
8. 在37℃培养箱中培养30 min。
9. 用酶标仪检测450 nm处的吸光度，根据葡萄糖的标准曲线计算样品的葡萄糖浓度。
Phloretin抑制葡萄糖的摄取
实验证实，细胞培养基上清液中的葡萄糖摄入量减少与Phloretin (一种葡萄糖转运抑制剂)浓度之间有依存关系。
常见问题Q&A
| Q1：是否可以检测2-Deoxy-D-glucose？ |
| A1：可以检测2-Deoxy-D-glucose。 |
| Q2：Working Solution的稳定性如何？ |
| A2：Working Solution无法保存，请现配现用。由于对光不稳定，因此配制后请避光，在室温和避光条件下可保存4小时（当Working Solution在曝光下，溶液颜色会由红色变为橙色，背景升高）。 |
| Q3：当有还原性物质存在时是否还可以用这个试剂盒检测？ |
| A3：如果样品中含有还原性的物质，则也会和WST染料发生显色，此时无法准确定量葡萄糖浓度。实验中如遇到以上情况，可以设定药物对照（不含细胞含药物的培养基+试剂）作为背景对照，并从标准曲线和样品的吸光度中减去它。 |
| Q4：是否有检测细胞上清液以外的实验例? |
| A4：有测定细胞内葡萄糖的实验例。操作详情，请参考常见问题FAQ“Q5”。其他的样品没有实验例。 |
| Q5：是否可以检测细胞内葡萄糖？ |
| A5：细胞内葡萄糖也可以检测，请参考下面的样品制备步骤。 请准备「0.1%Triton X-100水溶液」和「滤膜（分子量：10KD ）」 （1）将细胞*1悬液收于1.5 ml微量管中。 ※测定所需的细胞数，需要根据细胞种类进行调整。 |
| Q6:一个试剂盒可以检测样品的数量。 |
| A6：制备标准曲线和样品（n=3）时，可以检测的样品数量如下所示。
标准曲线：8个点(0, 0.0157, 0.0313, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5, 1 mmol/l)(n=3)
96孔板排列示意图（n=3） |
| Q7:可以测量L-Glucose吗？ |
| A7：本产品用于β-D-Glucose测量，不能测量L-Glucose。 |
参考文献
| No | 检测对象 | 文献 |
| 1 | 小鼠血清 | Increased levels of Aβ42 decrease the lifespan of ob/ob mice with dysregulation of microglia and astrocytes, FASEB J., 2019,DOI: 10.1096/fj.201901028RR |
| 2 | 链霉菌 | Enhancement of metabolic flux toward ε-poly-l-lysine biosynthesis by targeted inactivation of concomitant polyene macrolide biosynthesis in Streptomyces albulus, J. Biosci.Bioeng., 2020,DOI: 10.1016/j.jbiosc.2019.12.002 |
| 3 | HCT116细胞 | Serine racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from serine, Nat. Metab., 2020, 2(1), 81 |
| 4 | P388白血病细胞 | 2-Deoxy-D-glucose enhances the anti-cancer effects of idarubicin on idarubicin-resistant P388 leukemia cell, Oncol. Lett., 2020, 20(1), 962-966 |
| 5 | 小鼠精子细胞 | Macrophage ubiquitin‑specific protease 2 contributes to motility, hyperactivation, capacitation, and in vitro fertilization activity of mouse sperm, Cellular and Molecular Life Sciences, 2020, doi: 10.1007/s00018-020-03683-9 |
*要测定细胞培养上清液以外的样品，请事先查看常见问题FAQ“是否有除检测细胞上清液以外的样品检测实验例”。
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特点：
● 检测灵敏度高
● 操作简便，用时短
● 可以用荧光酶标仪做高通量筛选
● 荧光染料泄露少，数据重现性高
产品解说
产品概述
产品概述
细胞通过摄入各种各样的营养物质并在胞内的代谢作用下产生能量。营养物代谢的过程随着细胞外环境、细胞状态、细胞种类的不同亦不尽相同。近年来的研究发现，营养代谢不仅与能量的产生密切相关，还与基因表达等各种各样的细胞调节机制有关。葡萄糖是最重要的一种营养物质，细胞摄取葡萄糖的过程对于研究和理解细胞机能非常重要。细胞摄取葡萄糖的评价方法主要是放射性同位素示踪法。但是由于放射性同位素示踪法操作繁杂，泛用性并不高。另外，还有一种使用2-Deoxy-D-glucose(2-DG)的酶循环法，该方法虽然可以进行孔板检测，但是无法用于荧光显微镜和流式细胞仪观察。因此，最近常用的方法是通过葡萄糖类似物2-NBDG的荧光检测法1)。然而，2-NBDG也有荧光强度弱、灵敏度低的问题，而且被细胞摄取的2-NGDG还有从细胞中向外泄漏的情况出现。同仁化学研究新开发的荧光葡萄糖类似物Glucose Uptake Probe-Red是一种比2-NBDG灵敏度更高的葡萄糖摄取能力检测试剂。而且使用本试剂盒中包含的Washing and Imaging (WI) Solution可以抑制探针从细胞内泄漏，得到重现性更高的实验数据。
产品优势
与传统方向相比的优势！ 4大特征
Glucose Uptake Probe-Red是红色荧光染料，可以与红色野外其他颜色的荧光染料共染色。另外，由于采用高亮度的荧光染料，相较于传统方法(2-NBDG)可以在更短时间内进行高灵敏度检测。
① 与其他荧光染料的共染色
可以根据实验需求，选择其他荧光染料与Glucose Uptake Probe进行共染色，一次检测多个指标。下图是用Glucose Uptake Probe Red与脂肪滴(绿色：Lipi-Green货号LD02)共染色脂肪细胞分化而来的3T3-L1细胞的荧光图像。
<观测条件>
细胞： 3T3-L1
检测条件：
Glucose Uptake Probe-Red：Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm
Lipi-Green：Ex = 450-490 nm; Em = 500-550 nm
② 可用荧光显微镜或流式细胞仪检测
Glucose Uptake Probe-Red除了荧光显微镜和流式细胞仪以外还可以用荧光酶标仪进行检测。下面是A549细胞的葡萄糖摄取能力的检测结果，可以明显观察到高浓度葡萄糖对Glucose Uptake Probe-Red摄入的抑制作用。
细胞：A549
检测条件
Glucose Uptake Assay Kit-Red：Ex = 545 nm, Em = 605 nm
③ 快速检测
使用高亮度的Glucose Uptake Probe-Blue，即使使用2-NBDG完全相同的实验步骤，也可以大幅缩短实验时间。
操作的前处理、染色(进入细胞内的过程)的步骤只需要清洗3次，非常简便。
④ 减少荧光染料的泄漏
使用试剂盒附带的WI Solution清洗细胞，可以抑制染料进入细胞后的泄漏，得到重现性更高的数据。详细的实验数据请参考Glucose Uptake Assay Kit-Green 货号UP02的页面。
与传统法的比较
*以上结果源自A549细胞实验的结果，其他细胞系的向胞外泄露的时间可能不同。
相关产品区别
与Glucose Assay Kit的不同点
Glucose Uptake Probe-Green和Glucose Assay Kit-WST(货号:G264)的不同点。
1.Glucose Assay Kit-WST可以定量检测细胞上清液中葡萄糖的消费量。
Glucose Uptake Assay Kit无法定量检测葡萄糖。
2.Glucose Uptake Assay Kit-Green可短时间内检测葡萄糖摄取能力的差值。
Glucose Assay Kit-WST无法在短时间内检测葡萄糖量的变化。
详细的实验数据请参考Glucose Uptake Assay Kit-Green 货号UP02 的页面。
实验例
实验例1：Cytochalasin B对葡萄糖摄取的抑制作用
HepG2细胞经过葡萄糖转运蛋白抑制剂Cytochalasin B处理后，使用本试剂盒对葡萄糖摄取能力的抑制作用进行高灵敏度观察。
荧光显微镜观察
(Scale Bar: 50 μm)
<观测条件>
细胞：HepG2细胞
使用培养基：MEM (5.5 mmol/l Glucose)
培养条件：5 µmol/l Cytochalasin B / MEM （5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS）, 37℃, 24 h
染色条件：Glucose Uptake Probe (500倍稀释)/DMEM（0 mol/l Glucose）, 37℃, 15 min
检测仪器：荧光显微镜；
Glucose Uptake Assay Kit-Blue: Ex = 340-380 nm; Em = 435-485 nm
Glucose Uptake Assay Kit-Green: Ex = 450-490 nm; Em = 500-550 nm
Glucose Uptake Assay Kit-Red: Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm
实验例2：Insulin(胰岛素)对细胞葡萄糖摄取能力的促进
胰岛素对脂肪细胞(adipocyte)的葡萄糖摄取能力的影响通过本试剂盒进行高灵敏度检测。
荧光显微镜观察
(Scale Bar: 50 μm)
<观测条件>
细胞：mouse adipocyte
使用培养基：DMEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS)
刺激条件：0 or 1 µmol/l Insulin / DMEM (0 mmol/l Glucose , serum free), 37℃, 15 min
染色条件：Glucose Uptake Probe-Green (500倍稀释) /DMEM (0 mmol/l Glucose, serum free), 37℃, 15 min
检测仪器：荧光显微镜；
Glucose Uptake Assay Kit-Blue: Ex = 340-380 nm; Em = 435-485 nm
Glucose Uptake Assay Kit-Green: Ex = 450-490 nm; Em = 500-550 nm
Glucose Uptake Assay Kit-Red: Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm
常见问题Q&A
| Q1: Glucose Uptake Probe-Red具体是通过哪种葡萄糖转运蛋白进入细胞的？ |
| A：对于具体的每一种葡萄糖转运蛋白的特异性目前还没有详细的数据。 |
| Q2: Glucose Uptake Probe-Red被细胞摄入后，会被分解或代谢掉吗？ |
| A：染料的荧光部分非常稳定，实验范围内的操作不会造成分解。另外，类葡萄糖的部位，从结构上考虑可能会被Hexokinase(己糖激酶)磷酸化，除此以外应该不会参加任何代谢反应。 |
| Q3: Glucose Uptake Probe-Red被活细胞摄入后，可以进行细胞固定的操作吗？ |
| A：由于荧光探针会从细胞内漏出，染色后无法进行细胞固定。 |
| Q4: 用荧光酶标仪检测时候，对孔板有什么特别要求吗？ |
| A：需要使用荧光检测用的细胞培养板。 |
| Q5:Probe working solution可以长期保存吗？ |
| A：Probe working solution无法长期保存，请现配现用。Probe stock solution冷冻可以保存一个月。 |
| Q6: 无法观察到荧光信号变化的时候，应该怎么办？ |
| A：预实验的时候可以先从稀释浓度（x250~x1,000）、染色时间(5 min~1 h)范围内进行摸索。 |
| Q7: 荧光背景高的时候，应该怎么办？ |
| A：可能是由于有未被细胞摄入的残留荧光染料。请用WI Solution再多进行一次清洗操作。 |
| Q8: 用WI solution清洗之后，荧光染料可以在细胞内停留多长时间？ |
| A：一般在室温下可以保持在细胞内1 h左右，不同的细胞种类，时间可能会有一定差别。 |
| Q9: 可以对葡萄糖进行定量检测吗？ |
| A：本产品不能用于葡萄糖的定量检测。如果需要定量检测培养基中的葡萄糖的消耗量或者细胞内的葡萄糖量，可以使用同仁化学研究所的Glucose Assay Kit-WST(货号:G264)。 |
| Q10: 可以对被细胞摄入的染料进行定量吗？ |
| A：不可以对细胞摄入的染料进行定量。本试剂盒是葡萄糖摄取能力强弱或增减的检测试剂盒。 |
| Q11: 如果无法通过葡萄糖的竞争性抑制细胞探针的摄取，该如何解决？ |
A：竞争性抑制是否发生取决于每个细胞中的葡萄糖转运蛋白的表达水平和类型。（例如：HepG2细胞）
在这种情况下，使用2-脱氧葡萄糖(2-DG)进行预处理可能会在葡萄糖竞争抑制方面产生差异。 请参考Glucose Uptake Assay Kit-Green(产品代码:UP02)的使用示例。 2-DG预处理对探针摄取的抑制和葡萄糖竞争性抑制(HepG2细胞) 1.将细胞接种在培养皿或微孔板中，并在5% CO₂培养箱(37°C)中培养过夜。 2.除去培养基[DMEM (10% FBS，高葡萄糖)]后，加入50 mmol/l 2-DG/培养基，并 在5% CO₂培养箱(37℃)中培养细胞2小时。 3.清洗细胞两次。 4.加入预热的DMEM(无葡萄糖，无血清)并将细胞在5%CO₂中孵育 在培养箱(37°C)中培养15 min。 5.除去上清液后，加入预热的探针溶液并在5% CO₂中孵育 在培养箱(37°C)中培养15 min。 6.除去上清液后，用冷却的WI溶液(1x)洗涤细胞两次。 7.除去上清液后，加入冷却后的WI溶液(1x)，并在室温下培养 5分钟。 8.除去上清液后，加入冷却的WI溶液(1x)。 9.荧光显微镜下观察细胞。
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| Q12: 目前有过检测实例的细胞有哪些? |
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| Q13: 以下为不同细胞添加抑制剂后，葡萄糖摄取能力检测实验。 |
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规格性状
| Glucose Uptake Probe-Red ×1
WI Solution (50X) 5 ml ×1 供参考的可测次数 每个试剂盒大约可检测12枚35 mm dish或1枚96孔板 |
