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品牌：Enzo
CAS No.： 储存条件：-20℃ 纯度：– |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
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ENZ-42716 |
– | 25 Reactions | – |
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– | – |
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制备FISH探针的辅助试剂。用于切口平移的Fluorescein-12-dUTP核苷酸标记系统 组份: Fluorescein-12-dUTP Deoxynucleotide Mix, 125 µl 0.3 mM each of dATP, dCTP, dGTP and TTP/Fluorescein-12-dUTP Labeled Control DNA, 25 µl 40 µg/ml Fluorescein-12-dUTP labeled DNA in TE Buffer
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C24H16O7
416.38
特点：
● 激发和发射波长分别为488 nm和530 nm
● 可用于流式细胞仪
规格性状
规格
特性：该产物为白色结晶粉末或固体，可溶于二甲基亚砜。
可溶于二甲基亚砜：试验成功
NMR光谱：试验成功
产品概述
FDA可透过细胞膜并作为荧光素积蓄在活细胞内。由于荧光素较BCECF或Calcein的亲水性低，因此荧光素从细胞中渗漏的量也高。FDA也可用于流式细胞仪。荧光素的激发和发射波长分别为488 nm和530 nm。
荧光特性
荧光特性：λex=488 nm, λem=530 nm
参考文献
1) B. Rotman and B. W. Papermaster, “Membrane Properties of Living Mammalian Cells as Studied by Enzymatic Hydrolysis of Fluorogenic Esters”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1966, 55, 134.
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3) K. H. Jones and J. A. Senft, “An Improved Method to Determine Cell Viability by Simultaneous Staining with Fluorescein Diacetate-Propidium Iodide”,J.Histochem.Cytochem., 1985, 33, 77.
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6) E. Prosperi, “Intracellular Turnover of Fluorescein Diacetate. Influence of Membrane Ionic Gradients on Fluorescein Efflux”, Histochem.J., 1990, 22, 227.
常见问题Q&A
| Q1:如何使用FDA。
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A1:下面给出一个例子。请根据细胞的种类，观察条件讨论细胞的固定和试剂浓度。 【例1】HeLa细胞的形态观察 将1mg的FDA溶解在2ml的DMSO中(储存溶液) 用PBS(-)溶液稀释，设为2μmol/L。(用5ml PBS(-)稀释8μl贮存溶液) 1)用胰蛋白酶-EDTA等回收HaLa细胞，制备细胞悬浊液。 2)离心分离细胞悬浊液(1000rpm, 3min) 3)除去上清，添加PBS(-)(此时细胞数为105 ~ 106cells /mL) 4)通过粘贴等充分分散。 *因为培养液中的血清等有使背景上升的危险重复②~④的操作充分清洗。 5)在1.5 mL微管中添加用4)得到的30μL细胞悬浊液。 6)在此加入15μL的FDA溶液。 7)盖上微管，37℃下孵育15min。 8)在玻璃罩上放上7)的溶液10μL，从上面再盖上一层玻璃，夹入染色的细胞悬浊液。 9)将盖杯置于荧光显微镜下，用490nm滤光器激发，观察发出黄绿色荧光的活细胞。 例2:C57BL/6小鼠脾脏细胞的双重染色，使用FDA和PI。 k.h.j ones, j.a. senft, J.Histochem.Cytochem.， 33, 77 (1985). 将5mg的FDA溶解在1ml的丙酮中(储备溶液) 将上述0.04 mL溶液稀释为10ml PBS(-)。 PI将1mg溶解在50ml PBS(-)中。 在0.2 mL D-PBS溶液中混浊的细胞(2×106 cells/mL)溶液中添加0.1 mL的FDA溶液和0.03 mL的PI溶液。 孵化后观察。 【例3】使用HeLa细胞的细胞膜离子梯度对Fluorescein溶出的影响 ·E.Prosperi, Histochem. J.， 22, 227 (1990). 将5mg的FDA溶解在1ml的丙酮中(储备溶液) 用PBS(-)，终浓度2.4μmol/L染色。 |
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Q2：细胞染料的激发波长和发射波长是多少。 |
| A2： |
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特点：
● 荧光素标记的产品可以在大约2小时内制备。
● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
● 可以标记50至200μg的蛋白质。
● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
● 荧光素标记的物体可以与所附的存储溶液一起存储。
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试剂盒内含
产品概述
该试剂盒主要用于制备用荧光素标记的蛋白质，如免疫转染中的IgG和胞内蛋白示踪。氨基反应型荧光素是试剂盒的成分之一，它含有琥珀酰亚胺基（NHS），能与蛋白质或者其它分子的氨基反应。该试剂盒中包含了标记所需的全部试剂，包括Storage buffer。每一管荧光素最多能够标记200μg的IgG，每个IgG分子可与4-6个荧光素分子共价结合。该试剂盒还包含一个缓冲液交换系统，因此含有氨基缓冲液的样品也能用此试剂盒来标记。虽然用膜来过滤有时会导致IgG聚集，但是试剂盒中的缓冲液交换系统能够防止标记过程中聚集现象的发生。用该试剂盒标记的抗体在4℃下能够保存至少2个月。被荧光素标记后的IgG的激发和发射波长分别为495nm和520nm。
原理
产品优势
1）荧光素标记的产品可以在大约2小时内制备。
2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。
3）可以标记50至200μg的蛋白质。
4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。
5）荧光素标记的物体可以与所附的存储溶液一起存储。
荧光特性
操作步骤
使用注意事项:
1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量要>50,000。
2. 在标记过程中，IgG或者Fluorescein -IgG标记物始终存在于Filtration tube的滤膜上。
3. 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits（不包含于本试剂盒 中）来纯化。
4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。
5. 如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的标记试剂NH2-reactive fluorescein放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持标记试剂的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。
a) 样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于1mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100 μg。如果聚积过程中滤液的体积超过400μl，则在进行后续的离心操作前应除去滤液。
b) 如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5 min或者适当增加转速直至膜上没有残留液体。
c) NH2-Reactive Fluorescein Dye在管子的底部，向管底加入10μl DMSO，吹打数次使其溶解，如果没有DMSO的话，可以用乙醇来替代。
d) 如果IgG的量为200μg，在步骤4时加入所有的NH2-Reactive Fluorescein Dye溶液。
e) 并不一定要使用WS Buffer来回收标记产物，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来替代。
标记率计算
计算标记率：
1分子蛋白质上结合的荧光素的数量 (标记率) 的计算方法：将标记的蛋白质溶液用5倍的中性缓冲液稀释，分别测定在280nm和各个荧光染料的最大吸收波长处的吸光度，采用以下公式计算。
* 如果是IgG，摩尔吸光系数ε=216,000。
* 荧光染料在WS缓冲液中的摩尔吸光系数参见下表：
常见问题Q&A
| Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？ |
| A:可以。只要标记分子的分子量>50,000。 |
| Q2:标记蛋白之前是否必须使用过滤管？ |
| A:如果蛋白溶液中不含有带有活性氨基的小分子且蛋白浓度在10mg/ml或者70μM左右时，可以不使用过滤管来过滤，只需要将10μl 样品溶液和90μl Reaction Buffer以及8μl NH2-reactive Fluorescein（由步骤3所得）混合并按照操作说明上的方法做从步骤4开始的后续试验。 |
| Q3:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？ |
| A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。 |
| Q4:用该试剂盒所能标记的IgG的最小量是多少？ |
| A:IgG的最小量为10μg。IgG的量在10μg-100μg之间时，标记比率是相同的。 |
| Q5:标记产物能保存多久？ |
| A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。 |
参考文献
| 1) M. Hiyoshi, S. Suzu, Y. Yoshidomi, R. Hassan, H. Harada, N. Sakashita, H. Akari, K. Motoyoshi and S. Okada, “Interaction between Hck and HIV-1 Nef Negatively Regulates Cell Surface Expression of M-CSF Receptor”, Blood, 2008, 111(1), 243. |
| 2) W. Aung, A. Tsuji, H. Sudo, A. Sugyo, T. Furukawa, Y. Ukai, Y. Kurosawa and T. Saga, “Immunotargeting of Integrin α6β4 for Single-Photon Emission Computed Tomography and Near-Infrared Fluorescence Imaging in a Pancreatic Cancer Model”, Molecular Imaging, 2016, 15, 1. |
| 3) A. Shinya, K. Yamamoto, M. Kurata, S. Abe-Suzuki, R. Horii, F. Akiyama and M. Kitagawa, “Targeting MCM2 function as a novel strategy for the treatment of highly malignant breast tumors”, Oncotarget., 2015, 6, (33), 34892. |
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| 5) P.G. Sreekumar, R. Kannan, M. Kitamura, C. Spee, E. Barron, S.J. Ryan and D.R. Hinton, “αB crystallin is apically secreted within exosomes by polarized human retinal pigment epithelium and provides neuroprotection to adjacent cells”, PLoS ONE., 2010, 5, (10), e12578. |
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| 7) R. Asano, I. Shimomura, S. Konno, A. Ito, Y. Masakari, R. Orimo, S. Taki, K. Arai, H. Ogata, M. Okada, S. Furumoto, M. Onitsuka, T. Omasa, H. Hayashi, Y. Katayose, M. Unno, T. Kudo, M. Umetsu and I. Kumagai, “Rearranging the domain order of a diabody-based IgG-like bispecific antibody enhances its antitumor activity and improves its degradation resistance and pharmacokinetics”, MAbs., 2014, 6, (5), 1243. |
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| 17) H Fujishiro, H Yamamoto, N Otera, N Oka, M Jinno and S. Himeno, “In vitro Evaluation of The Effects of Cadmium on Endocytic Uptakes of Proteins into Cultured Proximal Tubule Epithelial Cells.”, Toxics, 2020, 8,10.3390/toxics8020024 |
| 18) Y. Liu, Y. Liu, X. Zheng, L. Zhao and X. Zhang, “Recapitulating and Deciphering Tumor Microenvironment by Using 3D Printed Plastic Brick–Like Microfluidic Cell Patterning”, Adv Healthc Mater, 2020, 9, (6), 1901713. |
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品牌：FUJIFILM Wako
CAS No.：2321-07-5 储存条件：室温 纯度：– |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
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065-00252 |
Wako Special Grade | 25g | – | 830.00 | – | – |
* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用
* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。
